intTypePromotion=1
zunia.vn Tuyển sinh 2024 dành cho Gen-Z zunia.vn zunia.vn
ADSENSE

Bài giảng Kỹ thuật cấy chuyền và tạo dòng tế bào động vật

Chia sẻ: Lavie Lavie | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:36

151
lượt xem
16
download
 
  Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Bài giảng Kỹ thuật cấy chuyền và tạo dòng tế bào động vật nêu lên một số kỹ thuật nuôi cấy tế bào, cấy chuyền, tạo dòng tế bào. Mời các bạn tham khảo bài giảng để bổ sung thêm kiến thức về lĩnh vực này, với các bạn chuyên ngành Sinh học thì đây là tài liệu hữu ích.

Chủ đề:
Lưu

Nội dung Text: Bài giảng Kỹ thuật cấy chuyền và tạo dòng tế bào động vật

  1. ThS. Phan Lữ Chính Nhân Kỹ thuật cấy chuyền và tạo dòng tế bào động vật
  2. Nội dung Tạo dòng tế Nhắc lại bào Kỹ thuật Các ứng cấy dụng chuyền
  3. THU NHẬN MẪU MÔ CẮT NHỎ (chọn lọc mẫu mô quan tâm, cắt bỏ phần mô chết) Tách tế Cắt nhỏ Tách tế bào bào bằng (mảnh nhỏ bằng cơ học (nghiền, ép) enzym để nuôi) (ủ…) Nuôi mẫu NUÔI SƠ Trypsin Collagenas Trypsin ấm mô sơ cấp CẤP lạnh e Tái huyền Thu nhận Ly tâm Cấy chuyền phù tế bào mới Thu mảnh DÒNG TẾ mô thứ BÀO cấp
  4. Nuôi sơ cấp Nuôi mô Thu nhận cơ quan Cắt nhỏ Thành Cấy chuyền tế bào đơn Cấy chuyền Cell line 4 Nuôi sơ cấp
  5. 5
  6. Tách rời tế bào Tách bằng tác Tách bằng nhân khác enzym (EDTA) Trypsin Collagenase Papain Elastas Trypsin ấm Trypsin lạnh
  7. Tách bằng enzyme Trypsin: Chymotrypsin Collagenase Papain Elastase • pH6-9, tối ưu 8-9 • pH 7-9, thích • Hoạt động • pH • Phân huỷ • Nồng độ dùng: hợp 8-9 tốt: pH7-8, 4,5-8,5 elastin 0,01%-0,5% • Cắt liên kết < 450C • Bị kìm • Sử dụng • Ca2+ được xem như peptide tạo bởi • Cắt liên kết hãm kết hợp chất bảo vệ Trypsin –COOH acid peptide bởi với • Bị kìm hãm bởi FBS amin thơm với – dạng poly-L chất enzyme hoặc Di-Isopropyl- NH2 prolin; gồm oxy khác Fluorophosphat(DFP) • Tính đặc hiệu 4 loại đặc hoá • Không đặc hiệu cho kém hơn trypsin trưng tắt loại protein: Cắt liên • Bị ức chế bởi từng loại kết –COOH của DFB mô chuyên lysin/arginin và –NH2 • biệt ít  có thể gây hư hai làm hư hại cho tế bào tế bào MỘT SỐ ENZYME PHÂN CẮT THƯỜNG DÙNG
  8. Tế bào bám dính Tế bào không bám dính Cụm tế bào nuôi sơ cấp 1. Huyền phù để tách rời cụm Sau nuôi sơ cấp, tế Sau 1 thời gian, tế bào tế bào thành tế bào bám vào bề mặt tăng sinh, bao phủ đầy đĩa nuôi bề mặt đĩa nuôi bào đơn Tế bào tách khỏi bề Thêm enzym (trypsin, 2. Pha loãng mật mặt đĩa nuôi, chuyển collagenase…) độ tế bào, qua các đĩa nuôi khác 1 chuyển sang các đĩa nuôi mới 3 2 3. Tế bào đơn với Sau cấy chuyền, tế bào tiếp tục tăng sinh mật độ thưa trong đĩa nuôi mới 8 Puck và Marcus (1955)
  9. Lưu ý • Hạn chế tối đa thời gian tiếp xúc của enzyme phân tách với tế bào • Chọn nồng độ tối thiểu enzyme phân tách tuỳ loại tế bào • Sử dụng các chất ức chế hoạt tính enzym ngay sau khi phân tách (FBS, protease inhibitor)
  10. TẠO DÒNG TẾ BÀO XÂY DỰNG ĐƯỜNG KHÁI NIỆM- ĐẶC TÍNH MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP CONG TĂNG TRƯỞNG VÀ ĐO SỰ PHÁT TRIỂN
  11. 11
  12. 12
  13. Tăng sinh 13 (Regenerative Medicine, 2006)
  14. 14
  15. Tiêu chí lựa chọn dòng tế bào cho thí nghiệm • Loài • Đặc điểm chức năng • Hữu hạn hay liên tục • Bình thường hay chuyển dạng • Điều kiện và đặc tính tăng trưởng
  16. • Cùng kiểu gen, hình thái • quần thể tế bào như nhau ở đặc điểm quan tâm. 16
  17. Douglas C. McFarland Methods in Cell Science 22: 63–66 (2000). Mô Phân tách Tế bào đơn Nuôi sơ cấp Pha loãng tới hạn Vòng nhẫn Tách tế bào tự động Clone phát triển 17
  18. Giếng tế bào gốc Chuỗi pha Loãng lần 1 Chuỗi pha Loãng lần 2
  19. 19
  20. Nhuộm crystal violet
ADSENSE

CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD

 

Đồng bộ tài khoản
2=>2