Định nhóm kháng nguyên tiểu cầu ở quần thể người Kinh, miền Trung Việt Nam

Chia sẻ: Sunshine_3 Sunshine_3 | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:5

Thêm vào BST

Báo xấu

57
lượt xem 4
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Trong các nhóm glycoprotein trên màng tiểu cầu ng-ời GPIIb/IIIa, GPIa, GPIbavà GPIbò có các hệ thống kháng nguyên đặc hiệu tiểu cầu (HPA) đ-ợc ký hiệu từ HPA-1 đến HPA-13. Gen mã hoá cho mỗi hệ thống HPA có hai alen khác nhau ở 1 cặp nucleotid dẫn đến sự thay thế 1 axit amin t-ơng ứng. Tần số các gen này khác nhau giữa các quần thể, ví dụ ở châu á tần số của HPA-1a, HPA-2a, HP-3a & HPA-5a cao hơn tần số của HPA-1b, HPA-2b và HPA-5b. Tr-ớc đây, để xác định kháng nguyên tiểu cầu, người ta đã sử dụng các kỹ thuật huyết thanh học, tuy nhiên...

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Định nhóm kháng nguyên tiểu cầu ở quần thể người Kinh, miền Trung Việt Nam

TCNCYH 27 (1) - 2004 §Þnh nhãm kh¸ng nguyªn tiÓu cÇu ë quÇn thÓ ng−êi Kinh, miÒn Trung ViÖt Nam B¹ch Kh¸nh Hoµ 1 , TrÇn ThÞ Sinh 1 , Lª ThÞ Kim TuyÕn 2 1 Tr−êng §¹i häc Y Hµ Néi, 2 ViÖn VÖ sinh DÞch tÔ Trung −¬ng, Hµ Néi Trªn bÒ mÆt mµng tiÓu cÇu ng−êi cã c¸c kh¸ng nguyªn ®Æc hiÖu tiÓu cÇu (HPA- Human-Platelet-Antigen) liªn quan ®Õn mét sè héi chøng suy gi¶m tiÓu cÇu m¾c ph¶i. TÇn sè gen HPA cã sù sai kh¸c gi÷a c¸c quÇn thÓ. Trong nghiªn cøu nµy, b»ng ph−¬ng ph¸p PCR-SSP (Polymerase Chain Reaction- Specific Sequence Primer), chóng t«i b−íc ®Çu x¸c ®Þnh tÇn sè HPA cña quÇn thÓ ng−êi Kinh sèng ë miÒn Trung ViÖt Nam. TÇn sè kiÓu gen quan s¸t ®−îc nh− sau: 0.977 HPA-1a/a, 0.023 HPA-1a/b, 0.000 HPA-1b/b; 0.827 HPA-2a/a, 0.161 HPA-2a/b, 0.011 HPA2b/b; 0.276 HPA3-a/a, 0.552 HPA-3a/b, 0.173 HPA 3b/b; 0.920 HPA-5a/a, 0.080 HPA 5-a/b, 0.000 HPA 5b/b, cßn víi HPA-4 toµn bé 87 mÉu biÓu hiÖn kiÓu gen HPA-4a/a. I. §Æt vÊn ®Ò c¸c h¹n chÕ trªn. Ban ®Çu, ng−êi ta sö Trong c¸c nhãm glycoprotein trªn mµng dông kü thuËt PCR-RFLP (Polymerase tiÓu cÇu ng−êi GPIIb/IIIa, GPIa, GPIbαvµ Chain Reaction-Restriction Fragment GPIbβ cã c¸c hÖ thèng kh¸ng nguyªn ®Æc Length Polymorphism) nh−ng kü thuËt nµy hiÖu tiÓu cÇu (HPA) ®−îc ký hiÖu tõ HPA-1 cÇn cã qu¸ tr×nh c¾t b»ng enzym giíi h¹n ®Õn HPA-13. Gen m· ho¸ cho mçi hÖ nªn rÊt tèn kÐm, phøc t¹p vµ mÊt nhiÒu thèng HPA cã hai alen kh¸c nhau ë 1 cÆp thêi gian kh«ng phï hîp cho viÖc x¸c ®Þnh nucleotid dÉn ®Õn sù thay thÕ 1 axit amin nhanh HPA. HiÖn nay, kü thuËt PCR víi t−¬ng øng. TÇn sè c¸c gen nµy kh¸c nhau cÆp måi ®Æc hiÖu (PCR-SSP) ®· ®−îc gi÷a c¸c quÇn thÓ, vÝ dô ë ch©u ¸ tÇn sè chøng minh lµ mét ph−¬ng ph¸p ®¬n gi¶n, tiÕt kiÖm, nhanh, cã ®é chÝnh x¸c cao cã cña HPA-1a, HPA-2a, HP-3a & HPA-5a thÓ x¸c ®Þnh ®ång thêi tÊt c¶ c¸c hÖ thèng cao h¬n tÇn sè cña HPA-1b, HPA-2b vµ gen HPA [1, 3]. ChÝnh v× thÕ, chóng t«i ®· HPA-5b. Tr−íc ®©y, ®Ó x¸c ®Þnh kh¸ng chän kü thuËt nµy ®Ó x¸c ®Þnh tÇn sè gen nguyªn tiÓu cÇu, ng−êi ta ®· sö dông c¸c HPA cña quÇn thÓ ng−êi Kinh ë miÒn kü thuËt huyÕt thanh häc, tuy nhiªn kü Trung ViÖt Nam. thuËt nµy cã mét sè h¹n chÕ nh− kh«ng cã s½n c¸c kh¸ng huyÕt thanh ®Æc hiÖu, thêi II. VËt liÖu vµ ph−¬ng ph¸p gian thùc hiÖn ph¶n øng dµi vµ hay cã Chóng t«i ®· thu thËp 87 mÉu m¸u tõ ph¶n øng chÐo víi nhau. GÇn ®©y sù xuÊt nh÷ng ng−êi kh«ng cã quan hÖ huyÕt hiÖn cña c¸c kü thuËt dùa trªn viÖc x¸c th«ng ë quÇn thÓ ng−êi Kinh miÒn Trung ®Þnh gen m· ho¸ cho HPA ®· gi¶i quyÕt ViÖt Nam. Qu¸ tr×nh t¸ch chiÕt ADN tõ m¸u ngo¹i vi chèng ®«ng b»ng EDTA ®−îc thùc 1
TCNCYH 27 (1) - 2004 hiÖn theo kü thuËt perchlorat sodium cña x¸c ®Þnh dùa vµo ph−¬ng tr×nh Hacdi- S.A.Miller, D.D.Kykes, H.F.Polesky (1988) Vanbec. [7]. C¸c måi cho ph¶n øng PCR ®−îc sö III. KÕt qu¶ dông theo t¸c gi¶ Jau-Yi Lyou vµ céng sù TÊt c¶ 5 cÆp måi ®Òu cho s¶n phÈm [3]. ViÖc x¸c ®Þnh kiÓu gen HPA ®−îc tiÕn khuÕch ®¹i ®Æc hiÖu (¶nh 1). Thêi gian tõ hµnh trong 2 ph¶n øng PCR riªng biÖt sö lóc b¾t ®Çu t¸ch chiÕt ADN cho ®Õn khi dông 3 måi trong ®ã cã 1 måi chung vµ 2 hoµn thµnh ®iÖn di kiÓm tra s¶n phÈm lµ 4 måi ®Æc hiÖu alen. §ång thêi, chóng t«i sö giê. S¶n phÈm PCR cña 5 cÆp måi khi ®iÖn dông thªm cÆp måi HGH ®Ó khuÕch ®¹i di ®Òu cho b¨ng ADN chøng d−¬ng cña gen m· ho¸ cho hocm«n sinh tr−ëng ng−êi gen HGH (438 cÆp baz¬), vµ b¨ng ADN trong tÊt c¶ c¸c ph¶n øng lµm chøng cña alen HPA cã kÝch th−íc tõ 196-252 d−¬ng. Ph¶n øng PCR ®−îc thùc hiÖn cÆp baz¬. TÇn sè kiÓu gen HPA cña 87 trong eppendorf 0.2ml víi tæng thÓ tÝch ng−êi cho m¸u ®−îc tr×nh bµy ë b¶ng 2. ph¶n øng lµ 10µl gåm: 1Xbuffer (10X), Trong sè 5 HPA, th× HPA-3 cã biÓu hiÖn 2.5mM dNTPs, 0.5nM måi HPA, 0.05nM kiÓu gen dÞ hîp tö cao nhÊt 0.276 HPA- måi HGH, 0.5 ®¬n vÞ enzyme Taq 3a/a, 0.552 HPA-3a/b, 0.172 HPA-3b/b. polymerase cïng víi 10-15 ng ADN mÉu. Víi HPA-1, HPA-2, HPA-5 hÇu hÕt ®ång Ch−¬ng tr×nh ch¹y nh− sau: 95oC: 10 gi©y, hîp tö a/a. Riªng HPA-4, toµn bé cã kiÓu 13 chu kú (95o C: 10 gi©y, 63oC: 30 gi©y, gen HPA-4a/a. 72oC: 30 gi©y), 22 chu kú (95oC: 10 gi©y, TÇn sè gen quan s¸t ®−îc nh− sau: 58oC: 30 gi©y, 72oC: 30 gi©y), 72oC: 5 0.989 HPA-1a / 0.011 HPA-1b; 0.908 phót, 4oC. HPA-2a / 0.092 HPA2b; 0.552 HPA-3a / S¶n phÈm PCR ®−îc ®iÖn di kiÓm tra 0.0448 HPA-3b; 0.960 HPA-5a / 0.040 trªn gel agrose 2%, nhuém b»ng Ethidium HPA-5b. TÊt c¶ c¸c mÉu nghiªn cøu ®Òu Bromide vµ quan s¸t d−íi tia tö ngo¹i. Sù cã kiÓu gen HPA-4a. (B¶ng3). ph©n bè cña kiÓu gen, vµ tÇn sè gen ®−îc GiÕng 1 2 3 4 5 6 HGH (434bp) HPA-2 HPA-2 a b a b a b ¶nh 1: KÕt qu¶ ®iÖn di s¶n phÈm PCR-SSP ®¹i diÖn. MÉu1 (giÕng1-2): HPA2a/a; MÉu2 (giÕng3-4): HPA2a/b; MÉu3 (giÕng5-6): HPA2b/b 2
TCNCYH 27 (1) - 2004 B¶ng 2: TÇn sè kiÓu gen HPA IV. Bµn luËn KiÓu gen HPA TÇn sè KÕt qu¶ thu ®−îc cho thÊy, tÇn sè gen cña HPA-1a lµ 0.989 t−¬ng tù víi tÇn sè 1a/1a 0.977 gen nµy ë quÇn thÓ ng−êi Kinh ë miÒn B¾c 1a/1b 0.023 ViÖt Nam (0.986), quÇn thÓ ng−êi Hµn 1b/1b 0.000 Quèc (0.988), quÇn thÓ ng−êi Th¸i Lan 2a/2a 0.827 (0.985) vµ kh«ng cã tr−êng hîp nµo ®−îc 2a/2b 0.161 t×m thÊy lµ cã kiÓu gen HPA-1b/b. Sù hiÕm gÆp cña alen HPA-1b trong nghiªn cøu 2b/2b 0.011 nµy phï hîp víi kÕt qu¶ ®· ®−îc c«ng bè 3a/3a 0.276 ë quÇn thÓ ng−êi ch©u ¸. Trong nghiªn 3a/3b 0.552 cøu nµy chóng t«i t×m thÊy tÇn sè gen 3b/3b 0.172 HPA-3 cã sù sai kh¸c gi÷a quÇn thÓ ng−êi 4a/4a 1.000 Kinh sèng ë miÒn Trung (0.552 HPA-3a; 0.448 HPA-3b) vµ miÒn B¾c (0.486 HPA- 4a/4b 0.000 3a; 0.514 HPA-3b), tuy nhiªn tÇn sè nµy l¹i 4b/4b 0.000 t−¬ng tù víi quÇn thÓ ng−êi Hµn Quèc 5a/5a 0.920 (0.555 HPA-3a; 0.445 HPA-3b) vµ quÇn 5a/5b 0.080 thÓ ng−êi Th¸i Lan (0.533 HPA-3a; 0.467 5b/5b 0.000 HPA-3b). HiÖn t¹i, chóng t«i ch−a ph¸t hiÖn thÊy alen HPA-4b, toµn bé mÉu nghiªn cøu ®Òu cã kiÓu gen HPA-4a/a. B¶ng 3: TÇn sè alen HPA §iÒu nµy còng b¾t gÆp ë quÇn thÓ ng−êi Alen HPA TÇn sè Kinh ë miÒn B¾c vµ quÇn thÓ ng−êi ch©u ¸ HPA-1a 0.989 nãi chung. Cßn ®èi víi HPA-2 vµ HPA-5, HPA-1b 0.011 tÇn sè alen HPA-2a (0.908) vµ HPA-5a (0.950) thÊp h¬n kÕt qu¶ ®· ®−îc c«ng bè HPA-2a 0.908 ë quÇn thÓ ng−êi Kinh ë miÒn B¾c ViÖt HPA-2b 0.092 Nam nh−ng t−¬ng tù víi quÇn thÓ ng−êi HPA3a 0.552 Th¸i Lan. HPA3b 0.448 IV.KÕt luËn HPA4a 1.000 B»ng ph−¬ng ph¸p PCR-SSP chóng t«i ®· x¸c ®Þnh tÇn sè gen HPA1-5 cña quÇn HPA4b 0.000 thÓ ng−êi Kinh sèng ë miÒn Trung. KÕt qu¶ HPA-5a 0.960 thu ®−îc trong nghiªn cøu nµy sÏ gióp cho HPA-5b 0.040 viÖc ®¸nh gi¸ sù ph©n bè gen HPA cña ng−êi Kinh sèng ë c¸c khu vùc kh¸c nhau ë ViÖt Nam. 3
TCNCYH 27 (1) - 2004 B¶ng 4: TÇn sè gen HPA ë mét sè quÇn thÓ ch©u ¸ HPA-1 HPA-2 HPA-3 HPA-4 HPA-5 QuÇn thÓ a b a b a b A b a b Kinh (Trung 0.989 0.011 0.908 0.092 0.552 0.448 1.000 0.000 0.960 0.040 ViÖt Nam) Kinh (B¾c 0.986 0.014 0.953 0.047 0.486 0.514 1.000 0.000 0.972 0.028 ViÖt Nam) [2] Hµn Quèc [8] 0.988 0.012 0.923 0.077 0.555 0.445 0.990 0.010 0.978 0.022 Th¸i Lan [5] 0.985 0.015 0.938 0.062 0.507 0.493 1.000 0.000 0.963 0.037 NhËt B¶n [4] 0.991 0.009 0.900 0.100 0.718 0.282 1.000 0.000 0.973 0.027 Tµi liÖu tham kh¶o allele- specific PCR method. Vox Sang 1. Harald Kluter, Kirstin Fehlau, 1995;68: 225-230. Simon Panzer, Holger Kirchner, Gregor 5. Liu TC, Shih MC, Lin CL, Lin SF. Bein. Rapid Typing for Human Platelet Gene frequencies of the HPA-1 to HPA-8w Antigen Systems –1, -2, -3 and –5 by PCR platelet antigen alleles in Taiwanes, Amplification with Sequence Specific Indonesian, and Thai. Ann Hematol Primer. Vox Sang 1996;71: 121-125. 2002;81: 244-248. 2. Halle L, Bach Khan H, Bianchi F, 6. Legler TJ, Khohler M, Mayr WR, Le T Kim T, Kaplan C. Ðtude dÐ risques Panzer S, Ohto H, Fischer GH. d’allo-immunisation plaquettire (HPA-1 µ Genotyping of the human platelet antigen HPA-7w, -9w µ 11w et Gov) dans une systems 1 through 5 by multiplex population Vietnamienne. Transfusion polymerase chain reaction and ligation- 2003;10: 22-23. based typing. Transfusion 1996;36: 426- 3. Jau-Yi Lyou, Ying-Ju Chen, Hui-Yu 431. Hu, Jeong-Shi Lin, and Cheng-Hwai 7. S.A.Miller, D.D.Dykes and H.F. Tzeng. PCR with sequence-specific Polesky. A simple salting out procedure for primer-based simultaneous genotyping of extracting DNA form human nucleated human platelet antigen-1 to – cells. Nucleic acids research 1988;16: 13w.Transfusion 2002;42: 1089-1095. 1215-1218. 4. Shigenori Tanaka, Atsuko Taniue, 8. Seo DH, Park SS, Kim DW, Nobuo Nagao, Shiro Ohnoki, Hirotshi Furihata K, Ueno I, Han KS. Gene Shibata, Yasuto Okubo and Hideo frequencies of eight human platelet- Yamaguchi. Simultaneous DNA typing of specific antigens in Koreans. Transfus human platelet antigens 2, 3 and 4 by an Medicine 1998;8: 129-32. 4
TCNCYH 27 (1) - 2004 Summary Phenotyping Human platelet antigens of the Kinh population in the Centre, Vietnam Located on the platelet membrane surface, human platelet specific antigens (HPAs) are related to alloimmune thrombocytopenic syndromes. The frequencies of HPA genes vary between different populations. In this study, we initially identified HPA gene frequencies of Kinh population which are living in the Centre of Vietnam by polymerase chain reaction with specific spequence primers (PCR-SSP). The frequencies observed are following: 0.977, 0.023, 0.000 for HPA-1a/a, HPA-1a/b, HPA-1b/b; 0.827, 0.161, 0.011 for HPA-2a/a, HPA-2a/b, HPA-2b/b; 0.276, 0.552, 0.173 for HPA-3a/a, HPA-3a/b, HPA-3b/b; 0.920, 0.080, 0.000 for HPA- 5a/a, HPA-5a/b, HPA-5b/b, respectively. For HPA-4, all 87 donor samples presented HPA-4a/a. 5