Kỹ thật nuôi cấy

Chia sẻ: Vo Canh Tung | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:0

Thêm vào BST

Báo xấu

373
lượt xem 115
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Yêu cầu khi nuôi cấy trong xét nghiệm vi sinh lâm sàng: Chọn đúng môi trường nuôi cấy: Mỗi loại bệnh phẩm có sự hiện diện của tác nhân nhiễm trùng dựa khác nhau nên cần phải lựa chọn môi trường nuôi cấy phù hợp với từng bệnh phẩm nhưng không chọn trùng lặp môi trường nuôi cấy.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Kỹ thật nuôi cấy

KYÕ THUAÄT NUOÂI CAÁY Phaïm Thaùi Bình Yeâu caàu khi nuoâi caáy trong xeùt nghieäm vi sinh laâm saøng 1
Phaûi choïn ñuùng moâi tröôøng nuoâi caáy Moãi loaïi beänh phaåm coù söï hieän dieän cuûa taùc nhaân nhieãm truøng khaùc nhau neân caàn phaûi löïa choïn moâi tröôøng nuoâi caáy phuø hôïp vôùi töøng beänh phaåm. Nhöng khoâng choïn truøng laëp moâi tröôøng nuoâi caáy Cuøng moät loaïi vi khuaån nhöng treân moâi tröôøng nuoâi caáy khaùc nhau, tính chaát khuùm khuaån coù theå khaùc nhau. Choïn truøng laëp nhieàu moâi tröôøng nuoâi caáy: ð Laøm roái trí ngöôøi laøm xeùt nghieäm khi choïn vi khuaån ñích treân moâi tröôøng phaân laäp. ð Khoâng taïo ñöôïc söï ñoàng boä trong hoaït ñoäng cuûa phoøng xeùt nghieäm. 2
Moâi tröôøng nuoâi caáy thöôøng quy treân caùc beänh phaåm Moâi tröôøng Moâi tröôøng Moâi tröôøng Beänh phaåm taêng sinh, phong phuù phaân laäp thay theá Chai CAXV Maùu caáy CAXV ® BA maùu MC GN broth ® Selenite F Phaân GN broth MC ® EMB SS ® HE/XLD SS Uri select 4 Uri select 4 ® BA & MC Nöôùc tieåu Dòch naõo tuûy BHI-XV CAXV® BA + S.aureus CAXV broth Moâi tröôøng nuoâi caáy thöôøng quy treân caùc beänh phaåm Moâi tröôøng Moâi tröôøng Moâi tröôøng Beänh phaåm taêng sinh, phong phuù phaân laäp phaân laäp thay theá Ñöôøng hoâ haáp MC ® EMB treân BA ® BANg BA CAHI MC Ñöôøng hoâ haáp MC ® EMB döôùi BA ® BANg BA CAHI MC Muû vaø MC ® EMB tieát dòch BA ® BANg BA MC Ñöôøng sinh CAVCN duïc 3
Phaûi choïn ñuùng kyõ thuaät caáy Maùu Nöôùc tieåu Dòch naõo tieåu Caùc beänh phaåm khaùc Moät soá moâi tröôøng nuoâi caáy thöôøng duøng trong xeùt nghieäm vi sinh laâm saøng 4
Moâi tröôøng taêng sinh, phong phuù GN broth: ð Phong phuù Salmonella vaø Shigella. BHI broth: ð Citrate vaø desoxycholate: öùc cheá vi ð Taêng sinh caùc vi khuaån. khuaån Gram (+) vaø moät soá coliform. ð Taêng sinh H. influenzae ð Mannitol cao hôn dextrose: haïn cheá söï caàn boå sung XV phaùt trieån cuûa Proteus, Pseudomonas vaø kích thích Salmonella, Shigella phaùt trieån. Selenite F broth: ð Phong phuù chuyeân bieät Salmonella. Peptone kieàm: ð Sodium selenite: öùc cheá vi khuaån ð Phong phuù chuyeân bieät Vibrio. Gram (+) vaø haàu heát tröïc khuaån ð 0.5% NaCl: kích thích Vibrio Gram (-) deã moïc, ngoaïi tröø Proteus, phaùt trieån Pseudomonas, Salmonella. ð pH kieàm: öùc cheá haàu heát tröïc ð L-cystine: kích thích Salmonella khuaån ñöôøng ruoät. phaùt trieån. Moâi tröôøng chai caáy maùu hai pha Ñaëc ñieåm thaønh phaàn: ð BHI (Merck, BD, Biorad): laø moâi tröôøng boå döôõng vaø lyù töôûng ñeå caáy maùu. ð Sodium Polyanethol Sulfonate: ð Khaùng ñoâ ng, nhôø ñoù vi khuaån khoâng bò baã y trong cuïc maùu ñoâng. ð ÖÙc cheá thöïc baøo vaø boå theå. ð ÖÙc cheá taù c ñoä ng cuû a caù c khaùng sinh aminoglycosides Ñaëc ñieåm caáu taïo: ð Traùnh ngoaïi nhieãm: khoâng caàn môû nuùt chai khi caáy maùu; caáy truyeàn ngay trong chai caáy maùu kín töø phase loûng qua phase ñaëc. ð Taùch rôøi pha loûng khoûi pha ñaëc: ð Neáu trong maù u coù chaát öù c cheá vi khuaån (khaùng sinh), chaát öù c cheá töø maùu hoøa vaø o phase loûng seõ seõ khoâng thaám qua phase ñaëc. Nhôø vaäy vi khuaån khoâ ng moï c trong phase loûng vaã n coù theå moïc trong phase ñaëc. ð Laøm khaùng sinh ñoà tröïc tieáp töø chai caáy maù u (+) neân tieát kieäm ñöôïc thôøi gian. 5
Moâi tröôøng thaïch maùu Ñaëc ñieåm thaønh phaàn moâi tröôøng: ð Moâi tröôøng cô baûn: CBA (hoaëc TSA hoaëc BHIA). ð Maùu cöøu: 5-7%. Nuoâi caáy vi khuaån: ð Khoâng coù khaùng sinh (BA): haàu heát vi khuaån. ð Nalidixic acid (BANg): Staphylococcus, Streptococcus. ð Gentamicin (BAGe):Streptococcus. Phaân bieät caùc loaïi tieâu huyeát (a, b, g) M. catarrhalis Staphylococcus S. pyogenes S. pneumoniae E. faecalis Moâi tröôøng thaïch naâu Ñaëc ñieåm thaønh phaàn moâi tröôøng: ð Moâi tröôøng cô baûn: CBA (hoaëc TSA hoaëc BHIA). ð Maùu ngöïa: 5-7% (hoaëc maùu cöøu coù boå sung V). Nuoâi caáy vi khuaån: ð Khoâng coù khaùng sinh (CAXV): caùc vi khuaån. ð Bacitracin (CAHI): Haemophilus. ð VCN (CAVCN):Neisseria. M. catarrhalis N. meningitidis N. gonorrhoae S. pneumoniae 6
Moâi tröôøng Mac Conkey Agar (MC) Ñaëc ñieåm thaønh phaàn moâi tröôøng: ð Crystal violet vaø bile salt: öùc cheá vi khuaån Gram (+). ð Neural red: chæ thò phaân bieät leân men lactose. Nuoâi caáy vi khuaån: ð Tröïc khuaån Gram (-), deã moïc. E. coli Ñaëc ñieåm khuùm khuaån: ð Leân men lactose: khuùm khuaån maøu hoàng. ð Khoâng leân men lactose: khuùm khuaån maøu traéng. S. typhi K. pneumoniae S. marcescens P. aeruginosa Shigella Moâi tröôøng Salmonella Shigella Agar (SS) Ñaëc ñieåm thaønh phaàn moâi tröôøng: ð Brilliant green vaø bile: öùc cheá vi khuaån Gram (+). ð Noàng ñoä thiosulfate vaø citrate cao: haïn cheá coliform. ð Neural red: chæ thò phaùt hieän leân men lactose. Salmonella ð Thiosulfate vaø Fe3+: chæ thò phaùt hieän sinh H2S. Nuoâi caáy phaân laäp chuyeân bieät cho Sal monella vaø Shigella. Ñaëc ñieåm khuùm khuaån: ð Shigella: khuùm khuaån coù maøu traéng. ð Salmonella, Proteus: khuùm khuaån coù maøu traéng, coù theå coù taâm ñen. ð Coliform: khuùm khuaån coù maøu hoàng. Shigella 7
Moâi tröôøng Hektoen Enteric Agar (HE) Ñaëc ñieåm thaønh phaàn moâi tröôøng: ð Bile vaø fuchsin: öùc cheá vi khuaån Gram (+). ð Salicin, sucrose: phaân bieät Salmonella, Shigella vôùi tröïc khuaån Gram (-) khoâng leân men lactose (Proteus…) Coliform ð Bromothymol blue vaø fuchsin: chæ thò phaùt hieän leân men lactose. ð Thiosulfate vaø ferric amonium citrate: chæ thò phaùt hieän sinh H2S. Phaân laäp vaø phaân bieät Salmonella, Shigella vôùi caùc tröïc khuaån Gram (-) khoâng gaây beänh khaùc. Shigella Ñaëc ñieåm khuùm khuaån: ð Shigella: khuùm khuaån maøu xanh laù. ð Salmonella, Proteus: khuùm khuaån coù maøu xanh laù, coù theå coù taâm ñen. Salmonella ð Coliform: khuùm khuaån coù maøu vaøng. Moâi tröôøng Xylose Lysin Desoxycholate Agar (XLD) Ñaëc ñieåm thaønh phaàn moâi tröôøng: ð Xylose: phaân bieät Shigella vaø Providencia (khoâng hoaëc leân men xylose chaäm) vôùi tröïc khuaån Gram (-) khaùc (leân men xylose). ð Lysin decarbosylase: phaân bieät Salmonella vôùi caùc tröïc khuaån Gram (-) khaùc leân men xylose. ð Lactose vaø sucrose haøm löôïng cao: ngaên ngöøa döông tính giaû cuûa lysin decarboxylase Salmonella Shigella töø caùc coliform. ð Thiosulfate vaø ferric amonium citrate: chæ thò phaùt hieän sinh H2S. ð Sodium desoxycholate: öùc cheá vi khuaån Gram (+) vaø söï moïc lan cuûa Proteus. Phaân laäp choïn loïc Salmonella, Shigella. Ñaëc ñieåm khuùm khuaån: ð Salmonella: khuùm khuaån maøu ñoû, coù theå coù taâm ñen. ð Shigella, Providencia: khuùm khuaån coù maøu ñoû. ð Coliform: khuùm khuaån coù maøu vaøng. ð Proteus: khuùm khuaån coù maøu vaøng, coù theå coù Coliform taâm ñen. 8
Moâi tröôøng Thiosulfate Citrate Bile Sucrose Agar (TCBS) Ñaëc ñieåm thaønh phaàn moâi tröôøng: ð Thiosulfate vaø citrate vôùi noàng ñoä cao trong pH kieàm: öùc cheá Enterobacteriaceae. ð Ox bile: öùc cheá Enterococcus. ð Thymol blue vaø bromothymol blue: chæ thò leân men sucrose ngay caû khi trong ñieàu kieän moâi tröôøng kieàm maïnh. Phaân laäp choïn loïc Vibrio. V. cholerae Ñaëc ñieåm khuùm khuaån: ð V. cholerae, V. fluvialis, V. alginolyticus: khuùm khuaån maøu vaøng. ð V. parahaemolyticus: khuùm khuaån maøu xanh. ð Proteus, Staphlococcus: cuõng coù theå moïc vaø cho khuùm khuaån maøu vaøng. V. parahaemoliticus Moâi tröôøng Uriselect 4 (URI4) Ñaëc ñieåm thaønh phaàn moâi tröôøng: ð Cô chaát cuûa b-glucosidase: thuûy giaûi cô chaát cho saûn phaåm coù maøu xanh (Klebsiella, Enterococcus, Serratia). ð Cô chaát cuû a b-galactosidase: thuûy giaûi cô chaát cho saûn phaåm coù maøu hoàng (E. coli). ð Trytophan: phaùt hieän sinh indol (E. coli, P. vulgaris) vaø deaminase cho saûn phaåm coù maøu naâu (Proteus). Nuoâi caáy nöôùc tieåu. E. coli E. faecalis Ñaëc ñieåm khuùm khuaån: ð E. coli: khuùm khuaån 3mm, maøu hoàng, indol (+). ð P. mirabilis: khuùm khuaå n 2mm, maøu naâ u cam, indol (-). ð P. vulgaris, Providencia, Morganella: khuùm khuaån 2mm, maøu naâu cam, indol (+). ð Klebsiella: khuùm khuaån 3mm, xanh bieån ñaäm. P. mirabilis K. pneumoniae ð Enterococcus: khuùm khuaån 0.5-1.5mm, xanh bieån nhaït. ð Vi khuaån khaùc: khuùm khuaån maøu traéng. 9