Atlas de poche de microbiologiel - part 6

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234 Văn hóa của vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus. Các cdture trên TCBS thuộc địa cho thấy màu xanh lá cây (sucrose không lên men) V parahaemolyticus chịu trách nhiệm về ngộ độc thực phẩm liên quan đến hải sản (TCBS thạch, 18 giờ ở 37 ° C)

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Nội dung Text: Atlas de poche de microbiologiel - part 6

Bactéries et infections bactériennes 234 Culture de Vibrio parahaemolyticus. La cdture sur TCBS montre des colonies vertes (ne fermentant pas le sucrose) V parahaemolyticus est responsable d'infections alimen- taires associées à des fruits de mer (Gélose TCBS, 18 h à 37 °C) 235 Aeromonas hydrophila. Culture sur gélose au sang contenant 10 ug/ml d'ampi- cilline Les colonies p-hémolytiques sont oxydase positive (Gélose au sang, 18 h à 37 °C) 157
Allas de microbiologie médicale 236 Campylobacter jejuni. La coloration de Gram montre des bacilles caractéristiques incurves en spirale a Grrm négatif souvent compares a des « ailes de mouette » {Gram x1000f 237 Culture de Campylobacter jejuni. C (e(uni est un germe microaerophile, qui pousse preferentiellement a 42 °C Sur milieu sélectif Campylobacter, contenant de la vancomy- cine et une polymyxine, les colonies sont petites, grises et en gouttelettes (Milieu sélectif Campylobacter, 48 h à 43 °C, sous ÏO % Oj 158
Bactéries et infections bactériennes 238 Helicobacter pylori, coloration de Giemsa. Coloration directe de biopsie de muqueuse gastrique, montrant H py/on dans les cellules a mucus (Glemsa, x1000) 239 Helicobacter pylori sur gélose au sang. La culture produit des colonies claires, qui peuvent pousser a partir d'un échantillon de biopsie gastrique (Gélose au sang, 18 h a 37 °Cj 159
Atlas de microbiologie médicale 240 Culture de Legionella pneumophila. Les échantillons contenant L pneumophila sont cultivés sur milieu tamponné au charbon et à l'extrait de levure (BCYE) incubé sous COz pendant 3 à 14 jours. Les colonies sont luisantes, gris-blanc et constituées de bacilles à Gram négatif. (Milieu BCYE, 4 jours à 37 "Cj 241 Legionella pneumophila en microscopie à fluorescence. L pneumophila peut être recherchée dans les sécrétions respiratoires, en utilisant des anticorps marqués à la fluorescéine. (Microscopie à fluorescence, xi 000] 160
Bactéries et infections baclériennes 242 Gardnerella vaginalis, coloration de Gram. Les bacilles à Gram négatif sont massés à la périphérie des cellules épithéliales, parfois désignées sous le terme de « c/ue ce//s ». (Qram, xlOOO] 243 Culture de Gardnerella vaginalis. Sur milieu Gardnerella, une gélose de base Columbia contenant de la gentamicine, de l'acide nalidixique et de l'amphotéricine B, les colo- nies de G. vaginalis sont petites et grises. (Milieu Gardnerella, 48 h à 37 °C sous COj 161
Atlas de microbiologie médicale PSEUDOMONAS ET AUTRES BACILLES À GRAM NÉGATIF NON FERMENTANTS Les caractères de ces bactéries sont résumés dans les tableaux 244 à 246. Le genre Pseudomonas et les espèces voisines comprennent des bactéries largement distribuées dans l'environnement, et dont certaines sont d'importants pathogènes pour l'homme. Ce sont des germes résistants à de nombreux antibiotiques. P. aeruginosa est responsable de toute une gamme d'infections, en particulier de plaies de l'arbre urinaire, ou septicémiques. La figure 247 montre la coloration de Gram d'une expectoration, avec des cocci à Gram positif (S. aureus) et des bacilles à Gram négatif (P. aeruginosa). 244 Pseudomonas et autres bacilles à Gram négatif non fermentants. Infections. 162
Bactéries et infections bactériennes P. aeruginosa ne fermente pas le lactose et produit une réaction d'oxydase positive. Les cultures produisent souvent un pigment bleu-vert (pyocyanine) (248). Biochimiquement, les Pseudomonas se différencient des entérobactéries par l'absence de métabolisme fer- mentatif (reactions d'oxydation-fermentation) (249, 250). Burkholderia cepacia (ancienne- ment Pseudomonas cepacia) est un important pathogène respiratoire chez les patients atteints de mucoviscidose; il peut être détecté par sa résistance à la colistine (251). B. pseudomallei est l'agent d'une infection tropicale humaine, la mélioïdose (252 à 254). Eikenella corrodons est retrouvé dans des plaies de morsure humaine et forme des colonies jaunâtres sur gélose au sang (255), qui peuvent s'incruster dans le milieu. Le genre Flavobacterium comprend F. meningosepticum ( renommé récemment Chryseo- bacterium meningosepticum, NdT), responsable de rares méningites néonatales, et F. odoratum, p athogène occasionnel de l'immunodéprimé. Les Fia voba cterium produi- sent des colonies jaunes sur gélose au sang (les colonies de C. meningosepticum sont cependant beaucoup plus pâles que celles des autres espèces, NdT) (256). 245 Pseudomonas et autres bacilles non fermentants. Sources et modes de transmission. 163
Atlas de microbiologie médicale Bactéries ef infections bactériennes 247 Coloration de Gram d'une expectoration contenant Pseudomonas leruginosa. Cette expectoration d'un patient atteint de mucoviscidose montre des staphylo- oques et les fins bacilles a Gram négatif de P aeruginosa fGram, x1000j 248 Pseudomonas aeruginosa. Culture sur milieu de MacConkey P aeruginosa ne fermente pas le lactose, est oxydase positive et produit souvent un pigment bleu-vert, la pyo- cyamne (Gélose de MacConkey, 18 h a 37 °Cj 164 165
Atlas de microbiologie médicale 249,250 Réactions d'oxydation- fermentation. Le germe étudié est ense- mencé dans deux tubes de milieu gélose contenant du glucose et un indicateur de pH (bleu de bromothymol). L'un des tubes est ensuite scellé par une couche d'huile de paraf- fine pour isoler son contenu de l'oxygène de l'air. Les tubes sont incubés jusqu'à deux semaines. L'acidification se traduit par une coloration jaune. Les bactéries qui oxydent et fermentent le glucose produisent une acidifica- tion dans les deux tubes, alors que celles qui sont strictement oxydantes n'acidifient que le milieu du tube sans paraffine. 249 Escherichia coli, oxydation et fermentation. 230 Pseudomonas aeruginosa. Bactérie non fermentante. L'acidification n'apparaît que dans le tube de gauche (non paraffiné). (Gélose peptonée, 7 jours à 37 °Q 166
Bactéries et infections bactériennes 251 Burkholderia cepacia (anciennement Pseudomonas cepacia). Pathogène respiratoire d'importance croissante chez les patients atteints de mucoviscidose. La plupart des souches sont multirésistantes aux antibiotiques. 8. cepacia est ensemencé au centre. Une souche de contrôle sensible est ensemencée en périphérie. (Milieu pour antibiogramme, 18 h à 37 °C) 252 Burkholderia pseudomallei. Coloration de Gram dans une expectoration. Les bactéries sont pléomorphes, à coloration parfois bipolaire. (Gram, x1000f 167
Atlas de microbiologie médicale 253 Burkholderia pseudomallei, gélose au sang. Culture de 72 heures montrant les colonies caractéristiques sèches et ridées Les cultures ont une odeur de truffe (Gélose au sang 72 h a 37 °Q 254 Burkholderia pseudomallei, milieu de Ashdown. Il s'agit d'un milieu selec tif, contenant du glycerol, du violet cristal et de la gentamicine La morphologie ridée est accentuée par la présence de glycerol (Milieu de Ashdown, 72 h a 37 °Cj 168
Bactéries et infections bactériennes 255 Eikenella corrodons. Culture sur gélose au sang produisant des colonies |aunâtres Quand les colonies sont raclées de la gélose, il reste souvent une dépression (Gélose m sang, 18 h a 37 "Ci 256 Flavobacferium odoratum. Culture sur gélose au sang produisant des colonies |aunes caractéristiques Les F/avooacfenum sont largement répandus dans l'environnement et sont occasionnellement pathogènes F meningosepticum est parfois responsable de méningite neonatale fGe/ose ou sang, 18 h a 37 "Ci 169
Atlas de microbiologie médicale BACTERIES ANAEROBIES STRICTES Les caractères des bactéries anaérobies sont résumés dans les tableaux 257 à 259. BACTÉRIES ANAÉROBIES À GRAM POSITIF Les Clostridium sont des bacilles à Gram positif sporulés, et comprennent les agents de la gangrène gazeuse, d'intoxications alimentaires, du tétanos, du botulisme et de colites associées à la prise d'antibiotiques. La figure 260 montre les bacilles à Gram positif en forme de brique de C. perfringens dans un prélèvement de gangrène gazeuse. La figure 261 montre des bacilles de C. tetani, avec des spores terminales. Les Clostridium pous- sent sur gélose au sang, formant des zones d'hémolyse (262, 263). Les espèces se diffé- rencient par leur reaction en milieu de Robertson à la viande cuite (264), sur gélose au lactose, au jaune d 'œuf et au l ait (265), et par la réaction de Nagler (266). C. d ifficile est impliqué dans des colites post-antibiothérapie. Sur gélose cyclosérine/céfoxitine/fructose (CCFA), il forme des colonies en « éclat de verre » (267,268). La production de toxine par C. d ifficile p eut être mise en évidence par u n test de cytotoxicité sur culture cellulaire (269) (et surtout par méthode immunoenzymatique, NdT). BACILLES À GRAM NÉGATIF ANAÉROBIES Bacteroides fragilis est fréquemment isolé lors d'abcès abdominaux (270). Les espèces du genre Bacteroides se distinguent par leur profil de résistance aux antibiotiques (271) et par leur profil d'acides gras volatils, en chromatographie en phase gazeuse (272). B. mela- ninogenicus ( aujourd'hui Prevotella rnelaninogenica) f orme des colonies brun-noir carac- téristiques sur gélose au sang (273). Les bactéries du genre Fusobacterium sont responsables d'infections chroniques (et aiguës, NdT), en particulier l'angine de Vincent, infection oro-pharyngée dans laquelle le spirochète Borrelia vincenti est également impliqué, aux côtés de Fusobacterium nuclea- tum. Ce sont de fins bacilles à Gram négatif, aux extrémités souvent effilées (274). F. necrophorum peut entraîner des infections de la tête et du cou, parfois septicémiques dans les formes graves (275, 276). 170
Bactéries et infections bactériennes 257 Bactéries anaérobies strictes. Infections. 171
Atlas de microbiologie médicale Bactéries et infections bactériennes 172 173
Atlas de microbiologie médicale 260 Clostridium perfringens. Coloration de Gram d'un pus de gangrène gazeuse, montrant des bacilles épais à Gram positif, en forme de brique (Gram, x1000j 261 Clostridium tetani, Gram. Fins bacilles à Gram positif à spore terminale Le centre des spores ne prend pas la coloration (Gram, x1000) 174
Bactéries et infections bactériennes 262 Clostridium perfringens. La culture sur gélose au sang montre l'hémolyse 8 Cer- taines souches produisent une double zone d'hémolyse (Gélose au sang 24 h à 37 "C en anaérobiosej 263 Clostridium perfringens, gélose au sang. Les colonies sont entourées d'un double halo d hémolyse, dû aux différentes toxines présentes. (Gélose au sang 48 h à 37 °C en anaérobiosej 175
Atlas de microbiologie médicale 264 Closfridium perfringens, milieu de Robertson à la viande cuite. La crois- sance dans ce milieu (à gauche) provoque une activité saccharolytique (rougissement) et une faible activité protéolytique (noircissement). I l / a également production de gaz. A droite, milieu non ensemencé. (Milieu à la viande cuite, 24 h à 37 °C) 265 Clostridium perfringens, gélose au lactose, au jaune d'oeuf, et au lait. Sur ce milieu, C. perfringens produit des colonies rosés par fermentation du lactose, entourées d'un halo opaque dû à la dégradation de la lécithine (Gélose au lactose, jaune d'œuf, et lait, 48 h à 37 "C, en anaérobiose) 176
Bactéries et infections bactériennes 266 Reaction de Nagler. La gélose de Nagler contient un milieu au jaune d'œuf dont une moitié contient de l'antitoxine de C. perfringens La souche est ensemencée en strie trans- versale, passant de la moitié contenant l'antitoxine à celle qui en est dépourvue Après incuba- tion d une nuit en anaérobiose, un résultat positif apparaît, avec l'opacification du milieu autour de la strie dans la partie sans antitoxine A droite, pas d'antitoxine. fGé/ose de Naaler 18 h a 37 C, en anaérobiose) ' ? Ju cte5fr'd"Jm difficile, gélose cyclosérine-céfoxitine-fructose (CCFA). L difficile est responsable de colite pseudomembraneuse Sur milieu CCFA, les colonies sont orillantes et grises fGé/ose cydosérine-céhxitme-fructose , 48 h à 37 °C, en anaérobiose] 177
Atlas de microbiologie médicale 268 Clostridium difficile, gélose CCFA, gros plan des colonies. Aspect métal lique brillant des colonies (Gélose cydosenne cefoxitine fructose , 48 h a 37 °C, en anoero- biosef 269 Culture tissulaire et action des toxines de Clostridium difficile. Les colites et les diarrhées sont dues a des souches de C difficile pro- ductrices de toxines Celles ci peuvent être détectées par leurs effets sur des cellules Vero, après 18 h d'incubation (b), (a) témoin non ensemence (Cellules Vero/ 18 h a 37 °Q 178