Báo cáo: Nghiên cứu xây dựng qui trình sản xuất chế phẩm vi sinh phòng trừ bệnh héo lạc và vừng

Chia sẻ: Leon Leon | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:8

Thêm vào BST

Báo xấu

99
lượt xem 13
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Cô lập, lựa chọn, đánh giá hoạt động sinh học và khả năng chống lại bệnh héo vi khuẩn bệnh do Ralstonia solanacearum và Fusarium oxysporum của các chủng vi khuẩn có được thực hiện. 2 nhóm vi sinh vật được sử dụng để chuẩn bị cho vi khuẩn lạc (PS1, TS6, Pb8, Ba51, T15) và mè (HS10, màn hình CRT, HS8, M, CX1) đã được lựa chọn. Trong hỗn hợp điều kiện, tất cả các chủng vi khuẩn được lựa chọn có thể được tồn tại tốt với nhau và có tác động tích cực đến tăng trưởng, phát triển và ức chế bệnh...

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Báo cáo: Nghiên cứu xây dựng qui trình sản xuất chế phẩm vi sinh phòng trừ bệnh héo lạc và vừng

NGHIÊN C U XÂY D NG QUI TRÌNH S N XU T CH PH M VI SINH PHÒNG TR B NH HÉO L C VÀ V NG Lê Th Thanh Th y, Lê Như Ki u, Nguy n Văn Huân, Tr n Th L a, Tr n Quang Minh SUMMARY Study on the construction of process for production of microbial preparation to control of wilt disease of groundnut and sesame Isolation, selection, assessment of biological activities and the ability to against bacterial wilt disease caused by Ralstonia solanacearum and Fusarium oxysporum of bacterial strains have been done. 2 groups of microorganisms used to make microbial preparation for groundnut (PS1, TS6, Pb8, Ba51, T15) and sesame (HS10, CRT, HS8, M, CX1) were selected. In the mixed condition, all of selected bacterial strains can be existed well together and had positive effects to growth, development and inhibition of disease caused by R. solanacearum and F. oxysporum. These selected bacterial strains have potential to produce microbial preparation to control of wilt disease of groundnut and sesame. We constructed of process for production of microbial preparation VSV1 used for groundnut and VSV2 used for sesame. Both of microbial preparations contained multi- antagonistic strains have density of microorganism is about 109 cfu/g. Quality of microbial preparation was insured in 3 months keeping time in room temperature. Keywords: Disease of groundnut, disease of sesame, bacterial wilt, R. solanacearum, F. oxysporum, antagonistic bacteria. I. M U nghiên c u v b nh héo xanh vi khuN l c n và v ng ch y u ch gi i h n trong ph m vi nư c ta, cây l c và cây v ng là xác nh m c thi t h i, s phân b c a nh ng cây có giá tr kinh t cao trên m t b nh và bư c u xác nh ngu n gen kháng ơn v di n tích gieo tr ng. Do v y phát trong t p oàn các gi ng l c và v ng hi n có. tri n tr ng l c và v ng không ch thúc Ny Tuy nhiên do kh năng có th bi n i tính chuy n d ch cơ c u cây tr ng trong nông c c a các ch ng vi khuN R. solanacearum n nghi p mà còn nâng cao thu nh p cho gây b nh và h n ch c a thu c b o v th c ngư i nông dân. Tuy nhiên, th c t tr ng v t i v i lo i vi khuN này, nên các bi n n l c và v ng các nư c trên th gi i nói pháp phòng tr sinh h c b nh héo xanh vi chung và Vi t Nam nói riêng g p r t khuN b ng các vi sinh v t i kháng ã cho n nhi u khó khăn, c bi t là b nh héo xanh th y nhi u h a h n kh quan và là bi n pháp do vi khuN R. solanacearum gây ra trên l c n r t c n thi t thay th các lo i thu c hóa và v ng [3]. nư c ta b nh héo xanh do vi h c b o v th c v t [1, 3]. Bài báo này s khuN ã phát sinh h u h t các a phương n ưa ra nh ng k t qu trong nghiên c u xây có tr ng các cây như: cà chua, v ng, l c, d ng qui trình s n xu t ch phN vi sinh m thu c lá, khoai tây, r t nhi u t nh thành phòng tr b nh héo l c và v ng. như: Hà N i, Vĩnh Phúc, B c Ninh, Thái Nguyên, Thanh Hoá, Ngh An.... có nơi, có lúc b nh ã gây thi t h i n ng t i m c gây II. V T LI U VÀ PHƯƠNG PHÁP ch t 100% cây tr ng. Cho t i nay nh ng NGHIÊN C U
1. V t li u c i ti n: FeCl3 0,5M 15 ml; H2SO4 98% 300 ml; nư c c t 500 ml. - Vi khuN R.solanacearum và n m n F.oxysporum gây b nh héo ư c phân l p - Phương pháp ánh giá tính c c a các t các cây l c và v ng có bi u hi n tri u ch ng vi khuN s d ng theo 10TCN: 216- n ch ng nhi m b nh i n hình [5] m t s 1995 (216-2003) [2]. Thí nghi m chia thành t nh như: Hà N i, Thanh Hoá, Ngh An và 6 công th c: CT1: Công th c i ch ng là Vĩnh Phúc. Các m u t tr ng cây h cà t không nhi m sinh kh i vi khuN CT2: n; ( t, cà chua), cây l c và v ng. t nhi m R. solanacearum (104-105cfu/g); CT3: t nhi m F. oxysporum (104-105bt/g); 2. Phương pháp nghiên c u CT4: t nhi m h n h p các ch ng vi khuN CT5: Là CT2+h n h p vi khuN n; n; - Phương pháp Koch s d ng xác CT6: Là CT3+h n h p vi khuN n. nh m t vi sinh v t: M t vi sinh v t ư c xác nh d a trên phương pháp nuôi III. K T QU VÀ TH O LU N c y trên môi trư ng th ch ĩa, tính s lư ng vi sinh v t trên mililit ho c trên gam m u 1. Tuy n ch n các ch ng vi sinh v t i thông qua s khuN l c phát tri n trong các n kháng s n xu t ch ph m vi sinh ĩa môi trư ng. T các m u t, m u thân cây v ng và - Phương pháp xác nh ho t tính i cây l c kh e các t nh Vĩnh Phúc, Hà kháng vi khuN n m gây b nh: ư c xác n, Tĩnh, Hà N i và Thanh Hóa ã phân l p nh b ng cách o ư ng kính vòng c ch ; ư c 24 ch ng vi khuN n i kháng, ây là ó là vòng tròn trong su t bao quanh khuN n ngu n nguyên li u quý cho vi c tuy n ch n l c ( i v i trư ng h p c y i m) ho c l ch ng có ti m năng cao trong s n xu t ch th ch ( i v i trư ng h p khoan l th ch), phN vi sinh phòng tr b nh héo xanh l c, m nơi mà vi sinh v t gây b nh không sinh v ng. Tiêu chuN ch n l a các ch ng vi n trư ng ư c [4]. khuN n i kháng là ph i có ho t l c i kháng m nh, tác d ng trên nhi u ch ng vi - Phương pháp Salkowsky c i ti n sinh v t gây b nh, n nh lâu dài trong ch (Misra và cs., 1989) s d ng xác nh phN và không gây b nh cho ng v t máu m kh năng sinh t ng h p IAA thô: Các ch ng nóng. T 24 ch ng vi khuN n i kháng trên vi sinh v t ư c nuôi c y trong môi trư ng chúng tôi l a ch n ư c 2 t h p, bao g m có b sung 0,1% Triptophan. Sau th i gian 10 ch ng vi khuN i n hình làm v t li u n nuôi c y, ly tâm, thu ư c d ch trong. Cho trong nghiên c u s n xu t ch phN vi sinh m 2 ml d ch trong vào ng nghi m ch a 8 ml s d ng trong phòng tr b nh héo xanh l c thu c th Salkowsky c i ti n. L c u, và v ng. Trong ó có 8 ch ng i kháng c yên trong 20 phút, sau ó so màu trên máy R. solanacearum và F. oxysporum v i kích v i bư c sóng 530 nm. Hàm lư ng IAA t o thư c vòng c ch t 10-20 mm. ra trong môi trư ng ư c tính toán trên cơ s th IAA chuN Thu c th Salkowsky n. B ng 1. T h p các ch ng vi khu n s d ng trong nghiên c u s n xu t ch ph m vi sinh phòng tr b nh héo xanh l c và v ng (tháng 10-2008, t i Vi n Th như ng ông hóa) Ch Ký hi u Ch ng vi khu n Ho t tính sinh h c Đơn vi đo ho t l c Ho t l c ph m ch ng
Cây Pseudomonas Ps1 ĐKVK & N héo xanh Đư ng kính VƯC (mm) 12; 12 l c fluorescens TS6 ĐKVK & N héo xanh Đư ng kính VƯC (mm) 12; 10 Pseudomonas sp. Pb8 ĐKVK & N héo xanh Đư ng kính VƯC (mm) 16; 16 Bacillus sp. ĐKVK & N héo xanh, Đư ng kính VƯC (mm) 15; 15,5 Bacillus subtilis Ba5.1 KTSTTV, IAA: µg/ml 182 Bacillus megaterium PG kitin Đư ng kính VPGKT (mm) 32 T15 ĐKVK héo xanh Đư ng kính VƯC (mm) 20 Cây Pseudomonas sp. HS10 ĐKVK & N héo xanh Đư ng kính VƯC (mm) 16; 16 v ng Pseudomonas putida CRT ĐKVK héo xanh Đư ng kính VƯC (mm) 20 Bacillus sp. HS8 ĐKVK & N héo xanh, Đư ng kính VƯC (mm) 12; 12 Bacillus velezensis ĐKVK & N héo xanh, Đư ng kính VƯC (mm) 15; 15,5 Bacillus polyfermenticus M KTSTTV IAA: µg/ml 160 PG kitin Đư ng kính VPGKT (mm) 37 CX1 ĐKVK & N héo xanh Đư ng kính VƯC (mm) 15; 15 KVK & N: i kháng vi khuNn và n m. IAA: Indol Acetic Acid. VƯC: Vòng c ch vi khuNn/n m gây b nh. KTSTTV: Kích thích sinh trư ng th c v t. PG: Phân gi i. VPGKT: Vòng phân gi i kitin. Các ch ng vi khuNn l a ch n thu c các c y v ch ti p xúc gi a các ch ng vi khuNn chi Pseudomonas và Bacillus u có ho t tính trên môi trư ng th ch. K t qu cho th y, i kháng cao v i vi khuNn R. solanacearum các ch ng vi khuNn tuy n ch n u phát và n m F. oxysporum gây héo l c, v ng và tri n t t trên cùng m t môi trư ng dinh n nh ho t tính trong nhi u l n thí nghi m. dư ng, không có bi u hi n kìm hãm sinh K t qu minh h a trên hình 1. trư ng gi a các ch ng nghiên c u. K t qu Ti n hành xác nh nh tính tác ng minh h a trên hình 2. tương h gi a các ch ng b ng phương pháp Hình 1. ánh giá ho t l c i kháng vi khuNn Hình 2. N uôi c y v ch các ch ng vi khuNn R. solanacearum và n m F. oxysporum gây tuy n ch n trên cùng môi trư ng dinh dư ng héo xanh l c và v ng B ng 2. nh hư ng c a h n h p vi khu n i kháng n sinh trư ng, phát tri n và kh năng h n ch b nh héo xanh gi ng l c MD7 (thí nghi m nhà lư i, Vi n Th như ng ông hóa 2008) Công th c Cao Tr ng T l cây ch t (%) do cây lư ng khô R. solanacearum F. oxysporum (cm) thân lá (g) CT1: Đ i ch ng 20,8 1,41 - - CT2: Nhi m R. solanacearum 19,3 1,46 87,5 - CT3: Nhi m F. oxysporum 17,8 1,39 - 75,0 CT4: Nhi m h n h p vi khu n 21,7 1,53 - -
CT5: Nhi m R. solanacearum + h n h p vi khu n 21,0 1,55 25,0 - CT6: Nhi m F. oxysporum + h n h p vi khu n 20,1 1,58 - 37,5 LSD (0,05) 4,03 4,80 CV (%) 7,50 3,90 K t qu b ng 2 cho th y khi nhi m 25%, t h p các ch ng vi khuNn i kháng b nh nhân t o t l cây ch t héo do và n m F. oxysporum t l cây ch t ch còn R. solanacearum là 87,5%, do F. oxysporum 37,5%. Trong khi ó công th c nhi m h n là 75%. Nhi m ng th i t h p các ch ng h p vi khuNn, cây l c sinh trư ng, phát tri n vi khuNn i kháng và vi khuNn bình thư ng, cây không b ch t héo. R. solanacearum t l cây ch t ch còn B ng 3. nh hư ng c a h n h p vi khu n i kháng n sinh trư ng, phát tri n và kh năng h n ch b nh héo xanh gi ng v ng V6 (thí nghi m nhà lư i, Vi n Th như ng ông hóa, 2008) Cao Kh i T l cây ch t (%) do Công th c cây lư ng khô (cm) thân lá (g) R. solanacearum F. oxysporum CT1: Đ i ch ng 50,76 105,84 - - CT2: Nhi m R. solanacearum 48,12 98,28 80,0 - CT3: Nhi m F. oxysporum 46,67 95,76 - 72,0 CT4: Nhi m h n h p vi khu n 56,16 123,48 - - CT5: Nhi m R. solanacearum + h n h p vi khu n 55,06 120,96 25,0 - CT6: Nhi m F. oxysporum + h n h p vi khu n 58,15 119,07 - 40,5 LSD (0,05) 3,05 5,35 CV (%) 5,10 3,10 i v i v ng khi nhi m b nh nhân t o t 2. ghiên c u qui trình s n xu t ch l cây ch t héo xanh do R. solanacearum là ph m vi sinh v t i kháng b nh héo cây 80%. Nhi m ng th i t h p các ch ng vi l c và v ng trong phòng thí nghi m khuNn i kháng và vi khuNn R. solanacearum t l cây ch t ch còn 25%, t l cây ch t ch Thí nghi m s d ng các ngu n dinh còn 40,5% t h p các ch ng vi khuNn i dư ng t ng h p và ngu n dinh dư ng t kháng và n m F. oxysporum. Công th c nhiên d ki m, r ti n trong nuôi c y nhân nhi m h n h p ch ng vi khuNn i kháng, sinh kh i các ch ng vi khuNn. K t qu so cây v ng sinh trư ng, phát tri n t t, cây sánh m t các ch ng vi khuNn và ho t không b ch t héo, minh h a b ng 3. N hư tính c a chúng trên các môi trư ng có thành ph n dinh dư ng khác nhau ư c th hi n v y, các ch ng vi khuNn i kháng nghiên trong các b ng 4 và 5. c u có i u ki n s n xu t ch phNm vi sinh s d ng trong phòng ch ng b nh héo l c và v ng. B ng 4. nh hư ng c a ngu n dinh dư ng n s phát tri n c a các ch ng vi khu n
Kí hi u M t đ t bào (cfu/ml) c a các ch ng vi khu n tuy n ch n trong môi trư ng TT ch ng King B Pseu SX1 SX2 SX3 SX4 8 9 8 8 9 7 1 Ps1 2,2 x 10 1,6 x10 2,4 x 10 2,9 x 10 4,2 x 10 9,8 x 10 8 9 8 8 9 7 2 TS6 3,1 x10 1,3 x10 2,0 x 10 5,2 x 10 3,4 x 10 7,8 x 10 8 8 7 7 8 7 3 Pb8 4,4 x 10 2,5 x 10 1,2 x 10 2,6 x 10 6,0 x 10 4,0 x 10 8 8 8 8 8 8 4 Ba5.1 6,0 x10 1,1 x10 1,8 x10 8,3 x10 6,9 x10 1,1 x10 5 T15 2,1 x 109 1,4 x108 8,5 x107 4,2 x109 3,8 x109 1,4 x108 8 6 HS10 2,5 x 10 2,5 x 109 2,5 x109 2,6 x10 9 4,6 x10 9 2,9 x108 8 9 8 8 9 8 7 CRT 2,0 x10 1,5 x10 1,4 x10 2,0 x10 1,4 x10 2,7 x10 8 8 8 8 8 8 8 HS8 3,4 x10 2,5 x10 1,3 x10 4,5 x10 3,2 x10 2,5 x10 8 8 8 8 8 8 9 M 5,6 x 10 2,0 x10 4,6 x10 5,4 x10 5,0 x10 1,8 x10 8 8 7 7 8 7 10 CX1 2,6 x 10 1,2 x10 1,0 x 10 2,4 x 10 4,6 x 10 5,0 x 10 Chú thích: * SX1, SX2, SX3, SX4: Là các môi trư ng ch a g ư ng mía, d ch nư c chi t u, có b sung m t s ch t dinh dư ng và khoáng ch t. * KingB, Pseu: Là hai môi trư ng c hi u cho nuôi c y các ch ng thu c chi Bacillus và Pseudomonas. B ng 5. nh hư ng c a ngu n dinh dư ng n ho t tính i kháng c a các ch ng vi khu n Đư ng kính vòng c ch vi khu n R. solanacearum gây b nh héo xanh cây l c, TT Kí hi u ch ng v ng (D-d)(mm) King B Pseu SX1 SX2 SX3 SX4 1 Ps1 11 12 11 11 12 10 2 TS6 12 12 11 12 12 10 3 Pb8 16 14 14 14 16 14 4 Ba5.1 15 14 15 15 15 14 5 T15 18 20 18 18 19 18 6 HS10 16 16 16 16 16 16 7 CRT 18 20 18 19 20 18 8 HS8 12 10 11 11 11 10 9 M 15 14 14 14 14 14 10 CX1 15 14 13 14 15 13 K t qu b ng 4 và 5 cho th y, các kháng cao nh t (kích thư c vòng phân gi i ch ng vi khuNn nghiên c u u phát tri n t 15-20 mm) so v i các môi trư ng khác. t t trong môi trư ng c hi u có ngu n g c Ch t mang là giá th mà ó vi sinh v t t nhiên (nư c chi t u, g ư ng) cho trú ng , m b o t m t theo yêu c u t ng ch ng trên các môi trư ng. Trên môi trong quá trình t khi s n xu t n lúc s trư ng s n xu t SX3 t t c các ch ng u d ng. ã ti n hành nghiên c u so sánh kh có m t t bào cao ho c tương ương khi năng t n t i c a các ch ng vi khuN tuy n n nuôi c y trên môi trư ng c hi u. K t qu ch n trên các n n ch t mang khác nhau như tương t khi so sánh ho t tính sinh h c c a than bùn, than bùn b sung xơ d a, phân các ch ng vi khuNn nghiên c u trên các môi giun, phân compost, mai cua, t x hi m. trư ng nuôi c y khác nhau. Như v y có th Trên cơ s ó ã l a ch n lo i ch t mang l a ch n môi trư ng SX3 cho nhân sinh phù h p cho nghiên c u s n xu t ch phN m vi sinh cho cây l c, v ng là ch t mang than kh i các ch ng vi khuN l a ch n n s n bùn b sung g ư ng và t x hi m. xu t ch phN cho cây l c v ng, vì môi m trư ng này v a m b o m t t bào cao Ch t mang s d ng làm ch phN ư c m (t 108-109/ml), v a m b o ho t tính i x lý v i các công o n:
Nghi n nh → Trung hòa pH → Ph i môi trư ng nhân sinh kh i VSV, xác nh tr n g ư ng, t x hi m → i u ch nh i u ki n lên men nhân sinh kh i, l a ch n, N → óng gói → Kh trùng m x lý ch t mang. K t qu ã xây d ng ư c 2 quy trình công ngh s n xu t ch phN vim Trên cơ s t ng h p các k t qu nghiên sinh v t phòng tr b nh héo cây l c và c u v công ngh s n xu t ch phN vi sinh m v ng và ư c tóm t t trong sơ 1 và 2. như: Tuy n ch n b ch ng gi ng vi sinh v t s d ng cho s n xu t ch phN l a ch n m, SƠ Đ 1. QUI TRÌNH S N XU T CH PH M VSV SƠ Đ 2. QUI TRÌNH S N XU T CH PH M VSV Đ I KHÁNG B NH HÉO XANH CÂY L C Đ I KHÁNG B NH HÉO XANH CÂY V NG Ch t mang Ch ng gi ng VSV Ch t mang Ch ng gi ng VSV X lý thô X lý thô (nghi n, sàng, Lên men c p 1 Lên men c p 1 (nghi n, sàng, lo i b t p ch t) lo i b t p ch t) Lên men c p 2 Lên men c p 2 Trung hòa pH Trung hòa pH Tr n g đư ng, Tr n g đư ng, đ t x hi m, ph đ t x hi m, ph gia gia Thu sinh kh i Thu sinh kh i Đóng gói, kh Đóng gói, kh trùng Ph i tr n Ph i tr n trùng Ki m tra m t đ t Ki m tra m t đ t Ch ph m VSV1 Ch ph m VSV2 bào VSV, t p nhi m bào VSV, t p nhi m Ki m tra t p B o qu n s d ng Ki m tra t p B o qu n s d ng nhi m nhi m Ch phN VSV1 s d ng cho cây l c; m Ch phNm VSV2 s d ng cho cây v ng, IV. K T LU N là s n phNm lên men c p hai nhân sinh Phân l p, tuy n ch n, nghiên c u và ánh kh i vi sinh v t và ph i tr n v i ch t giá ho t tính sinh h c, kh năng i kháng mang. M t t bào m i lo i vi khuNn t b nh héo xanh vi khuN do R. solanacearum n 109 cfu/g và ư c b o qu n i u ki n và b nh héo do n m F. oxysporum. Trong i u nhi t phòng trong i u ki n râm mát, ki n t h p các ch ng vi khuN cho th y, h n n s ch s , không g n nơi ch a ch t c h p các ch ng vi khuN s d ng s n xu t ch n hóa h c, thu c tr sâu. S d ng t t trong phN vi sinh cho l c (PS1, TS6, Pb8, Ba51, m T15) và ch phN cho v ng (HS10, CRT, m vòng 3 tháng. HS8, M, CX1) u có th t n t i t t cùng nhau
và có th s d ng trong s n xu t ch phNm vi sinh cho cây l c và v ng. Xây d ng ư c qui trình s n xu t ch phNm VSV1 i kháng s d ng cho cây l c và VSV2 i kháng s d ng cho cây v ng. Các ch phNm vi sinh ch a h n h p ch ng VSV i kháng b nh do R. solanacearum và F. oxysporum có m t t bào m i ch ng t 109 cfu/g, th i gian b o qu n 3 tháng nhi t phòng. TÀI LI U THAM KH O 1 Lê hư Ki u, Ph m Công Minh, Tr n Quang Minh và guy n g c Cư ng, 2005. Quy trình s n xu t ch phNm vi khuNn i kháng VK58 phòng ch ng b nh héo xanh cà chua, T p chí Khoa h c và Công ngh , t p 43, s 5, tr. 47-54. 2 10TCN: 216-1995 (216-2003): Kh o nghi m hi u l c phân bón trên ng ru ng i v i cây tr ng. 3 guy n Văn Vi t và cs., 2003. K t qu nghiên c u phòng tr b nh héo xanh vi khuN h i l c b ng gi ng kháng b nh n vùng t c n và t d c, 2001-2002. Tuy n t p các Công trình Khoa h c K thu t Nông nghi p, Nhà xu t b n Nông nghi p, 74-79. 4 10TCN 714-2006: Phương pháp ánh giá ho t tính i kháng c a vi sinh v t có kh năng i kháng vi khuN n Ralstonia solanacearum gây b nh héo xanh cây tr ng c n. 5 Black L.L., Green S.K., Hartman G.L., Poulos J.M., 1991. Pepper Diseases: A Field Guide. Asian Vegetable Research & Development Center, AVRDC Publication No.31-347, 98pp. gư i ph n bi n: guy n Văn Vi t
T¹p chÝ khoa häc vµ c«ng nghÖ n«ng nghiÖp ViÖt Nam 8