Bước đầu sử dụng mô hình nuôi cấy tế bào để đánh giá độc tính tế bào của xi măng nha khoa

Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 2 * 2018<br /> <br /> <br /> BƯỚC ĐẦU SỬ DỤNG MÔ HÌNH NUÔI CẤY TẾ BÀO<br /> ĐỂ ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH TẾ BÀO CỦA XI MĂNG NHA KHOA<br /> Trần Xuân Vĩnh*<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Mục tiêu nghiên cứu: Nghiên cứu thực hiện nhằm đánh giá độc tính lên tế bào gốc trung mô tủy xương<br /> người (hBMSCs) của xi măng BiodentineTM bằng phương pháp nuôi cấy tế bào với dịch chiết vật liệu.<br /> Đối tượng và phương pháp: hBMSC được cung cấp bởi nhóm vật liệu y sinh thuộc trường Đại Học Khoa<br /> Học Tự Nhiên Thành Phố Hồ Chí Minh. Dịch chiết BiodentineTM được chuẩn bị và pha loãng theo nồng độ<br /> 100%, 50%, 25%, 12,5% và 6,25%, sau đó đưa vào đĩa 96 giếng có hBMSCs. Đánh giá độc tính tế bào bằng<br /> phương pháp MTT.<br /> Kết quả: Dịch chiết BiodentineTM chưa pha loãng (nồng độ 100%) độc với tế bào hBMSCs. Các nồng độ pha<br /> loãng 50%, 25%, 12,5% và 6,25% không còn độc với tế bào. Phần trăm tế bào sống càng tăng khi nồng độ dịch<br /> chiết của BiodentineTM càng pha loãng.<br /> Kết luận: Từ kết quả thu được, chúng tôi có thể kết luận việc sử mô hình nuôi cấy tế bào với việc pha loãng<br /> dịch chiết vật liệu là phù hợp để đánh giá độc tính của vật liệu lên tế bào. Nồng độ 12,5% và 6,25% là nồng độ lý<br /> tưởng sử dụng để thực hiện các đánh giá tính tương hợp sinh học khác.<br /> Từ khoá: tế bào gốc trung mô tuỷ xương người, BiodentineTM , độc tính tế bào<br /> ABSTRACT<br /> INITIATIVE STUDY OF CYTOTOXICITY OF DENTAL CEMENT BY CELL CULTURE MODEL<br /> Tran Xuan Vinh * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Supplement Vol. 22 - No 2- 2018: 12- 16<br /> <br /> Objective: The study was to evaluate the toxicity of BiodentineTM cement to human Bone Marrow Stem<br /> Cells (hBMSCs) by cell culture with material extracts.<br /> Methods: hBMSCs was produced by Ho Chi Minh City University of Science. BiodentineTM were prepared,<br /> diluted at 100%, 50%, 25%, 12.5% and 6.25%, and added to culture insert plates which was placed into 96 wells<br /> containing culture cells. Cytotoxicity was assessed using MTT method<br /> Results: 100% BiodentineTM extract is toxic to hBMSCs. Diluted concentrations of 50%, 25%, 12.5% and<br /> 6.25% are not toxic to the cells. The percentage of cell vitability increases as the concentration of BiodentineTM<br /> extract decreases.<br /> Conclution: We can conclude that cell culture models with dilution of the material extracts is appropriate to<br /> assess the toxicity of the material to the cell. Concentrations of 12.5% or 6.25% are ideal for other biocompability<br /> evaluations.<br /> Key words: human Bone Marrow Stem Cells, BiodentineTM, Cytotoxicity.<br /> MỞ ĐẦU Số lượng tế bào bị ảnh hưởng sẽ cho biết liều<br /> lượng và độc lực của hoá chất. Thử nghiệm độc<br /> Một vật liệu được coi là “gây độc tế bào” khi tính lên tế bào là một trong các thử nghiệm đầu<br /> nó giải phóng một lượng hoá chất đủ để giết chết tiên trong tiến trình đánh giá tương hợp sinh học<br /> tế bào theo cách trực tiếp hoặc gián tiếp thông của một vật liệu. Ba thử nghiệm tế bào chủ yếu<br /> qua sự ức chế các con đường trao đổi chất chính.<br /> được sử dụng là: tiếp xúc trực tiếp, khuếch tán<br /> *Bộ môn Nha khoa cơ sở, Khoa Răng Hàm Mặt, Đại học Y Dược Tp.HCM<br /> Tác giả liên lạc: TS. Trần Xuân Vĩnh ĐT: 0946920818 Email: vinhdentist@yahoo.com<br /> 12 Chuyên Đề Răng Hàm Mặt<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 2 * 2018 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> qua agar và tách chiết (còn được gọi là pha loãng bằng phương pháp nuôi cấy tế bào với dịch chiết<br /> dịch chiết). Việc lựa chọn thử nghiệm nào là tùy vật liệu có nhiều nồng độ khác nhau.<br /> thuộc vào đặc tính của vật liệu, lí do tiến hành ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU<br /> thử nghiệm và khuynh hướng sử dụng vật liệu.<br /> Nghiên cứu In vitro thực hiện trên hBMSC<br /> BiodentineTM là xi măng có thành phần<br /> khi tiếp xúc với dịch chiết BiodentineTM .<br /> calcium silicate được phát triển nhằm cải thiện<br /> những hạn chế của MTA(8). BiodentineTM có thời Tạo khối và pha loãng nồng độ dịch chiết<br /> gian đông cứng ngắn khoảng 12 phút, đặc tính Trộn BiodentineTM theo quy định của nhà sản<br /> cơ học được cải thiện, dễ thao tác(12) và được xuất, cho vật liệu vào khuôn (4x1mm), chờ khối<br /> dùng trong lĩnh vực chữa răng-nội nha như che vật liệu đông, ngâm khối vật liệu vào môi trường<br /> tủy trực tiếp, chất thay thế ngà bên dưới vật liệu DMEM/F12. Sau 24 giờ thu được dịch chiết. Tỷ lệ<br /> trám…Nhiều nghiên cứu thực hiện nhằm đánh diện tích khối vật liệu: thể tích môi trường<br /> giá độc tính của BiodentineTM trên những dòng tế DMEM/F12 là 300mm2: 1ml (theo tiêu chuẩn ISO<br /> bào khác nhau như nguyên bào sợi tủy răng 10993-12:2012). Thu được dịch chiết có nồng độ<br /> người(5), tế bào gốc tủy răng người(1,9), tế bào tủy 100% và pha loãng dịch chiết với các nồng độ<br /> răng chuột(14). Mặc dù BiodentineTM được đề nghị 50%, 25%, 12,5% và 6,25%.<br /> dùng trong điều trị trám ngược, thủng sàn tủy Đánh giá độc tính tế bào bằng phương pháp<br /> nhưng hiện nay số lượng nghiên cứu đánh giá MTT<br /> tác động của BiodentineTM lên vùng quanh chóp<br /> Cấy hBMSCs (P4) trên đĩa 96 giếng. Mỗi<br /> còn hạn chế. Năm 2014, Lee B.N. và cộng sự tiến<br /> giếng có khoảng 5x103 tế bào. Sau 24 giờ, thay<br /> hành đánh giá độc tính của BiodentineTM, MTA<br /> môi trường DMEM/F12 bằng dịch chiết nồng độ<br /> và Bioaggregate khi tiếp xúc với tế bào dòng<br /> 100%, 50%, 25%, 12,5% và 6,25%. Gồm 3 nhóm:<br /> C3H10T1/2(8). Gần đây, có nghiên cứu đánh giá<br /> nhóm tiếp xúc dịch chiết BiodentineTM và nhóm<br /> độc tính trên tế bào hBMSCs của BiodentineTM và<br /> chứng âm và nhóm chứng dương. Tiến hành xác<br /> MM – MTA, MTA(10). Tuy nhiên nghiên cứu này<br /> định % tế bào sống tại các nồng độ dịch chiết.<br /> chỉ đánh giá vật liệu độc hay không độc, mà<br /> chưa xác định nồng độ gây độc với tế bào Xử lý và phân tích số liệu<br /> hBMSCs. Vì vậy chúng tôi thực hiện đánh giá Số liệu được nhập và xử lý bằng chương<br /> độc tính của BiodentineTM trên tế bào hBMSCs trình Microsoft Excel 2010 với phép kiểm Anova<br /> một yếu tố, t-test.<br /> KẾT QUẢ<br /> Bảng 1. Phần trăm tế bào sống khi tiếp xúc với BiodentineTM (BD), chứng âm và chứng dương theo nồng độ<br /> Trung bình(± Độ lệch chuẩn)<br /> Loại vật liệu<br /> Chưa pha loãng Nồng độ 50% Nồng độ 25% Nồng độ12,5% Nồng độ 6,25%<br /> BD 19,500 (±1,162) 70,700 (±3,460) 86,700 (±3,525) 97,500 (±13,011) 100,900 (±2,877)<br /> (-) 100,000 (±9,760) 100,000 (±9,760) 100,000 (±9,760) 100,000 (±9,760) 100,000 (±9,760)<br /> (+) 4,583 (±0,264) 4,583 (±0,264) 4,583 (±0,264) 4,583 (±0,264) 4,583 (±0,264)<br /> BD: BiodentineTM, (-): chứng âm, (+): chứng dương.<br /> Dịch chiết BiodentineTM ở nồng độ chưa pha nồng độ pha loãng 50%, 25% có phần trăm tế bào<br /> loãng (100%) độc với tế bào hBMSCs (phần trăm sống thấp hơn nhóm chứng âm, sự khác biệt có ý<br /> tế bào sống