Chế tạo Oligochitosan bằng phương pháp chiếu xạ Gamma Co-60 dung dịch Chitosan/H2O2 và khảo sát hiệu ứng gia tăng kích thước lá trên cây dâu tây (Fragaria Vesca L.)

TAÏP CHÍ KHOA HOÏC ÑAÏI HOÏC SAØI GOØN Soá 31 (56) - Thaùng 8/2017<br /> <br /> <br /> <br /> Chế tạo Oligochitosan bằng phương pháp chiếu xạ<br /> Gamma Co-60 dung dịch Chitosan/H2O2 và khảo sát<br /> hiệu ứng gia tăng kích thước lá trên cây dâu tây<br /> (Fragaria Vesca L.)<br /> <br /> Preparation of Oligochitosan by Gamma irradiation onto Chitosan/H2O2 solution<br /> and examining effects of increase in the size of leaves on Strawberry<br /> (Fragaria Vesca L.)<br /> <br /> TS. Đặng Xuân Dự, Trường Đại học Sài Gòn<br /> Dang Xuan Du, Ph.D., Saigon University<br /> <br /> ThS. Trần Thị Anh Thư, Trường THPT chuyên Hùng Vương, Gia Lai<br /> Tran Thi Anh Thu, MSc., Hung Vuong High School, Gia Lai Province<br /> <br /> TS. Lê Công Nhân, Trường Đại học Sài Gòn<br /> Le Cong Nhan, Ph.D., Saigon University<br /> <br /> Tóm tắt<br /> Trong nghiên cứu này, chitosan đã được cắt mạch trong dung dịch chitosan/H2O2 bằng phương pháp<br /> chiếu xạ gamma Co-60. Khối lượng phân tử (Mw) và độ đề axetyl (ĐĐA) của chitosan lần lượt được xác<br /> định bằng phương pháp sắc ký gel thấm qua (GPC) và phương pháp phổ hồng ngoại (IR). Kết quả cho<br /> thấy oligochitosan khối lượng phân tử Mw ~ 7,5 kDa đã được chế tạo một cách hiệu quả bằng phương<br /> pháp chiếu xạ gamma Co-60 dung dịch chitosan/H2O2 ở liều xạ thấp, khoảng 11 kGy. Oligochitosan chế<br /> tạo được có hiệu ứng gia tăng kích thước lá của cây dâu tây. Nồng độ phù hợp của oligochitosan để<br /> phun lên cây dâu tây là khoảng 50 ppm.<br /> Từ khóa: Oligochitosan, bức xạ Gamma, dâu tây.<br /> Abstract<br /> In this study, the degradation of chitosan in the presence of H2O2 solution by gamma irradiation was<br /> investigated. The molecular weight and the degree of deacetylation of chitosan were determined by gel<br /> permeation chromatography (GPC) and infrared spectra (IR), respectively. Results showed that<br /> oligochitosan with molecular weight Mw ~7,5 kDa were preparared efficiently by gamma irradiation in<br /> small doses, ~11 kGy. The obtained oligochitosan imposes effects of increase in the size of leaves of<br /> fracaria vesca L. The appropriate concentration of oligochitosan used to spray onto fracaria vesca L.<br /> trees was 50 ppm.<br /> Keywords: Oligochitosan, Gamma irradiation, Fracaria Vesca L.<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> 3<br /> CHẾ TẠO OLIGOCHITOSAN BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHIẾU XẠ GAMMA CO-60 DUNG DỊCH…<br /> <br /> <br /> 1. Mở đầu kết quả chế tạo oligochitosan bằng sự kết<br /> Oligochitosan là polyme có nguồn gốc hợp đồng thời giữa bức xạ gamma Co-60<br /> tự nhiên, là sản phẩm biến tính từ chitosan và H2O2 nhằm giảm liều xạ. Oligochitosan<br /> bằng phản ứng cắt mạch. Oligochitosan tự thu được sau phản ứng cắt mạch được ứng<br /> phân hủy sinh học, là prebiotic có độc tính dụng làm chất gia tăng kích thước lá đối<br /> thấp, có khả năng kháng nấm [6] và kháng với cây dâu tây (Fragaria vesca L), loại<br /> khuẩn [7] [8]. Ngoài ra, oligochitosan còn cây được trồng phổ biến ở cao nguyên Lâm<br /> làm tăng sinh tế bào, tăng cường miễn dịch Đồng, cho hiệu quả kinh tế cao. Kết quả<br /> của cơ thể động vật bằng cách kích thích nghiên cứu là cơ sở để chế tạo các chế<br /> sản sinh bạch cầu, giảm cholesterol trong phẩm kích thích tăng trưởng thực vật có<br /> máu và có tác dụng làm lành các vết nguồn gốc tự nhiên góp phần phát triển nền<br /> thương, vết bỏng [11]. Do có nhiều hoạt nông nghiệp bền vững.<br /> tính sinh học độc đáo, oligochitosan được 2. Thực nghiệm<br /> ứng dụng khá đa dạng trong nhiều lĩnh vực 2.1. Nguyên vật liệu, hóa chất<br /> khác nhau như làm chất điều hòa sinh Chitosan ban đầu được chế tạo từ vỏ<br /> trưởng, phòng trị nấm bệnh thực vật và gia tôm có Mw khoảng 50 kDa, ĐĐA khoảng<br /> tăng khả năng miễn dịch trên động vật... 90%. Dâu tây Labiang (Fragaria vesca L.)<br /> Hoạt tính của oligochitosan thông thường được mua ở tại vườn giống dâu tây xã An<br /> bị chi phối bởi khối lượng phân tử (KLPT, Phú, thành phố Pleiku, Gia Lai. Hydro<br /> Mw) và độ đề axetyl (ĐĐA). Vì vậy, khi peroxit (H2O2) là sản phẩm tinh khiết của<br /> chế tạo oligochitosan từ chitosan ban đầu Merck, Đức. Các hóa chất axit lactic,<br /> thì các thông số này rất được quan tâm etanol, amoniac… được dùng ở dạng tinh<br /> trong quá trình phản ứng. khiết phân tích. Nước cất một lần được sử<br /> Các phương pháp chế tạo oligochitosan dụng cho toàn bộ thí nghiệm.<br /> phổ biến bao gồm: phương pháp hóa học, 2.2. Phương pháp nghiên cứu<br /> phương pháp enzym và phương pháp chiếu 2.2.1. Phương pháp chế tạo oligochitosan<br /> xạ. Phương pháp hóa học có ưu điểm là Hòa tan 5 g chitosan trong dung dịch<br /> điều kiện phản ứng khá đơn giản nên dễ axit lactic 3%, thêm một lượng H2O2 30%<br /> dàng tiến hành với quy mô lớn. Tuy nhiên, và định mức đến 100 mL để thu được dung<br /> hạn chế của phương pháp này là hiệu suất dịch chiếu xạ chứa 5% chitosan và 1%<br /> thấp và có nguy cơ gây ô nhiễm môi H2O2. Tiến hành chiếu xạ đến 11 kGy [5]<br /> trường. Phương pháp enzym có lợi thế là trên nguồn SVST Co-60/B tại trung tâm<br /> cho hiệu suất cao nhưng chi phí lại đắt. Nghiên cứu và Triển khai Công nghệ Bức<br /> Phương pháp chiếu xạ được xem là thân xạ VINAGAMMA, Viện Năng lượng<br /> thiện với môi trường và có thể tiến hành dễ Nguyên tử Việt Nam với suất liều 1,33<br /> dàng với quy mô lớn, tuy nhiên để chế tạo kGy/h. Dung dịch sau khi chiếu xạ được<br /> được oligochitosan thường phải sử dụng trung hòa bằng NH4OH 5%, thêm một<br /> liều xạ cao [2], điều này dẫn đến sản phẩm lượng cồn bằng 6 lần thể tích dung dịch<br /> tạo thành dễ bị cắt mạch nhóm amin và phá mẫu, khuấy đều, sau đó lọc kết tủa và rửa<br /> vỡ vòng glucopyranose [5], làm giảm hoạt sạch bằng cồn [1]. Mẫu sau khi rửa sạch,<br /> tính của oligochitosan. để khô tự nhiên rồi sấy ở nhiệt độ 60°C<br /> Trong bài báo này, chúng tôi trình bày trong 2 giờ.<br /> <br /> 4<br />  ĐẶNG XUÂN DỰ - TRẦN THỊ ANH THƯ - LÊ CÔNG NHÂN<br /> <br /> <br /> 2.2.2. Xác định khối lượng phân tử và được chăm sóc theo quy trình thông<br /> độ đề axetyl của chitosan thường được canh tác tại địa phương, xã<br /> Khối lượng phân tử oligochitosan An Phú, thành phố Pleiku, Gia Lai. Kích<br /> được xác định bằng phương pháp sắc kí gel thước lá của dâu tây được theo đo theo thời<br /> (GPC), trên máy LC-20AB Shimadzu, gian đến 120 ngày tuổi. Sau 120 ngày tuổi,<br /> Nhật, sử dụng detector RID - 10A và cột mỗi lô thí nghiệm được chia làm 5 nhóm,<br /> Ultrahydrogel 250 của hãng Water, Mỹ, mỗi nhóm 8 cây được đo kích thước lặp lại<br /> nhiệt độ vận hành cột là 40°C, pha động là để phân tích thống kê bằng chương trình<br /> đệm axetat CH3COOH 0,25M/CH3COONa SPSS 16.0 và đánh giá sự khác biệt giữa<br /> 0,25M, tốc độ dòng là 1mL/phút. Chất các lô nghiên cứu.<br /> chuẩn được sử dụng là polysacarit Pullulan 3. Kết quả và thảo luận<br /> có khối lượng phân tử (KLPT) khác nhau Mẫu Oligochitosan thu được ở liều xạ<br /> từ 738 đến 380 000 Da [1]. Mẫu ~11 kGy có KLPT Mw ~7,5 kDa. Như vậy,<br /> oligochitosan được chuẩn bị bằng cách hòa KLPT của chitosan đã giảm 85% ở liều xạ<br /> tan trong axit axetic 0,25M với nồng độ khá thấp khi có mặt H2O2 1%. Nguyễn<br /> 0,3% đến khi tan hoàn toàn, thêm muối Quốc Hiến và cộng sự đã cắt mạch<br /> CH3COONa 0,25M sau đó lọc dung dịch chitosan bằng kỹ thuật chiếu xạ. Kết quả<br /> qua màng 0,45μm (Millipore filters). Mẫu thu được oligochitosan có KLPT ~ 10 kDa<br /> oligochitosan này được tiêm vào cột sắc kí cần liều xạ lên đến 100 kGy [2]. Điều này<br /> với thể tích khoảng 50 μl. Dựa vào thời chứng tỏ sự có mặt H2O2 1% trong nghiên<br /> gian lưu và so sánh với đường chuẩn xác cứu của chúng tôi đã làm giảm đáng kể liều<br /> định được KLPT của oligochitosan. xạ cần thiết để chế tạo oligochitosan. Hiện<br /> Độ đề axetyl (ĐĐA) của oligochitosan tượng này được giải thích bằng hiệu ứng<br /> được xác định bằng phương pháp hồng đồng vận (synergistic effect) của H2O2 và<br /> ngoại trên máy FT – IR 8400S, Shimadzu, tia γ trong quá trình cắt mạch. Theo đó, gốc<br /> Nhật. ĐĐA được tính dựa theo phương tự do hydroxyl (•OH) được hình thành nhờ<br /> trình [3]: quá trình phân ly bức xạ nước và H2O2 đã<br /> ĐĐA, % = 100 – ([31,92 × (A1320/A1420)] đóng vai trò như là tác nhân oxy hóa mạnh<br /> -12,00). Trong đó, A1320 và A1420 lần lượt là cắt mạch chitosan [12]:<br /> mật độ quang tương ứng tại các đỉnh 1320 H 2O <br /> γ ray<br />  eaq<br /> -<br /> , H • , • OH, H 2O2 , H 2 , H 3O+<br /> (1)<br /> và 1420 cm-1. H 2O2 <br /> γ ray<br />  2 • OH (2)<br /> 2.2.3. Khảo sát hiệu ứng gia tăng kích Ngoài ra, sản phẩm của quá trình phân<br /> thước lá của oligochitosan đối với dâu tây ly bức xạ là e-aq và H• cũng có thể phản ứng<br /> Chuẩn bị 4 lô thí nghiệm được đánh số với H2O2 để gia tăng gốc hydroxyl •OH [9]:<br /> từ 1 đến 4 mỗi lô gồm có 40 cây. Tiến hành e-aq + H 2O2  • OH + OH - (3)<br /> phun oligochitosan có KLPT khoảng 7,5<br /> kDa với các nồng độ 50 ppm, 100 ppm, H • + H 2O2  • OH + H 2O (4)<br /> 150 ppm từ lô 2 đến lô 4. Lô 1 không phun Gốc •OH đóng vai trò là tác nhân bắt<br /> oligochitosan để làm đối chứng. Thời điểm hydro, làm đứt liên kết C – H hình thành<br /> bắt đầu phun oligochitosan là sau khi cây gốc cacbohydrat R•, dẫn đến quá trình<br /> giống được trồng khoảng 1 tuần. Sau đó, chuyển vị và cuối cùng liên kết glycoside<br /> oligochitosan được phun bổ sung vào ngày bị cắt, tạo thành phân tử chitosan có KLPT<br /> thứ 30 và 60 kể từ lần phun đầu tiên. Cây thấp hơn hay oligochitosan [12].<br /> <br /> 5<br /> CHẾ TẠO OLIGOCHITOSAN BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHIẾU XẠ GAMMA CO-60 DUNG DỊCH…<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 1. Phổ FT - IR của chitosan ban đầu (a) và oligochitosan (b)<br /> <br /> Phổ FT - IR của oligochitosan và dao động kéo giãn của C–O–C trong vòng<br /> chitosan ban đầu được thể hiện trên hình 1. glucopyranose và các dao động của liên kết<br /> Kết quả cho thấy cấu trúc chính của β – 1,4 glycoside [10]. Các đỉnh ở 1320 và<br /> oligochitosan thu được (hình 1b) hầu như 1420 cm-1 tương ứng đặc trưng cho dao<br /> không khác biệt so với chitosan ban đầu động kéo giãn của liên kết C–N trong nhóm<br /> (hình 1a). Phổ FT-IR của oligochitosan CH3CONH– (amide III) và dao động biến<br /> xuất hiện hầu hết các đỉnh đặc trưng tiêu dạng của liên kết C–H, đây là hai đỉnh đặc<br /> biểu cho các nhóm liên kết có trong trưng được sử dụng để tính toán sự thay đổi<br /> chitosan ban đầu. Đỉnh ở 1655 và 1595 cm- ĐĐA của chitosan [3]. Từ phổ FT-IR DĐA<br /> 1<br /> đặc trưng cho dao động kéo giãn của liên của oligochitosan được xác định dựa vào<br /> kết C=O trong nhóm –CONH– (amide I) phương trình ở mục 2.2.2 cho giá trị 86%,<br /> và dao động uốn của –NH trong nhóm – giảm khoảng 4% so với chitosan ban đầu.<br /> CONH– (amide II). Đỉnh phổ nằm trong Như vậy, kết hợp đồng thời tia γ với H2O2<br /> vùng 3200 – 3500 cm-1 đặc trưng cho dao ở nồng độ thấp khoảng 1% có thể chế tạo<br /> động kéo giãn của liên kết N–H trong nhóm oligochitosan ở liều xạ khá thấp khoảng 11<br /> amine và liên kết O–H. Các đỉnh ở 1072, kGy. Oligochitosan thu được có ĐĐA giảm<br /> 1028, 1153 và 893 cm-1 lần lượt đặc trưng không đáng kể và cấu trúc hầu như không<br /> cho dao động kéo giãn của liên kết C–O, thay đổi so với chitosan ban đầu.<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 2. Ảnh hưởng của nồng độ oligochitosan đến chiều dài lá<br /> <br /> 6<br />  ĐẶNG XUÂN DỰ - TRẦN THỊ ANH THƯ - LÊ CÔNG NHÂN<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 3. Chiều dài của lá dâu tây 120 ngày tuổi ở lô đối chứng (a) và lô 2 (b)<br /> <br /> Hình 2 mô tả sự thay đổi kích thước của so với các lô còn lại. Kết quả quan sát sơ bộ<br /> lá dâu tây từ 75 đến 120 ngày tuổi. Kết quả cũng cho thấy kích thước lá dâu tây sau 120<br /> cho thấy ở nồng độ 50 ppm của ngày tuổi ở lô 2 được phun oligochitosan với<br /> oligochitosan (lô 1), kích thước lá dâu tây có nồng độ 50 ppm cũng tương đối lớn hơn so<br /> sự phát triển theo thời gian tương đối tốt hơn với lô đối chứng (hình 3).<br /> <br /> Bảng 1. Chiều dài trung bình của lá dâu tây (cm) sau 120 ngày tuổi ở các lô khác nhau<br /> Nhóm Lô đối chứng 1 Lô 2 Lô 3 Lô 4<br /> (8 cây/nhóm) (50 ppm) (100 ppm) (150 ppm)<br /> 1 7,7 8,4 7,4 7,9<br /> 2 7,4 8,3 7,5 8,0<br /> 3 7,8 8,5 7,2 7,5<br /> 4 7,7 7,9 7,5 7,6<br /> 5 7,6 8,0 7,3 7,8<br /> Trung bình 7,6 ± 0,2 a 8,2 ± 0,3 b 7,4 ± 0,1 c 7,8 ± 0,2 a<br /> <br /> Kết quả phân tích ANOVA số liệu Lô 1 tương ứng với nồng độ 50 ppm cho<br /> trên bảng 1 cho thấy kích thước lá ở các lô giá trị trung bình khác biệt có ý nghĩa so<br /> khác nhau có ý nghĩa thống kê (p = 0,00). với lô đối chứng (p = 0,00). Điều này<br /> Trong đó, lô 4 tương ứng với nồng độ 150 chứng tỏ nồng độ 50 ppm cho hiệu quả gia<br /> ppm của oligochitosan có giá trị không tăng kích thước lá tốt hơn so với các lô<br /> khác biệt so với lô đối chứng (p = 0,342). còn lại.<br /> <br /> <br /> 7<br /> CHẾ TẠO OLIGOCHITOSAN BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHIẾU XẠ GAMMA CO-60 DUNG DỊCH…<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 4. Ảnh hưởng của nồng độ oligochitosan đến chiều rộng lá dâu tây<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 5. Chiều rộng của lá dâu tây 120 ngày tuổi ở lô đối chứng (a) và lô 2 (b)<br /> <br /> <br /> Ảnh hưởng của nồng độ oligochitosan độ 150 ppm cho chiều rộng kích thước lá<br /> đến sự gia tăng chiều rộng kích thước lá thấp hơn so với lô đối chứng. Nguyên<br /> được thể hiện trên hình 4. Kết quả cho nhân của vấn đề này vẫn chưa rõ cần được<br /> thấy độ rộng kích thước lá của lô 1 lớn nghiên cứu thêm. Tuy nhiên, theo nhận<br /> hơn đáng kể so với các lô còn lại. Quan định của chúng tôi có thể do oligochitosan<br /> sát sơ bộ cũng cho thấy lô 2 tương ứng với là kháng sinh thực vật [9] khi được sử<br /> nồng độ 50 ppm cho chiều rộng kích dụng ở liều cao (150 ppm) có thể gây ngộ<br /> thước lá lớn hơn so với lô đối chứng (hình độc cho cây dẫn đến ức chế sự phát triển<br /> 5). Trong khi đó, lô 4 tương ứng với nồng lá của dâu tây.<br /> <br /> 8<br />  ĐẶNG XUÂN DỰ - TRẦN THỊ ANH THƯ - LÊ CÔNG NHÂN<br /> <br /> <br /> Bảng 2. Chiều rộng trung bình của lá dâu tây (cm) sau 120 ngày tuổi ở các lô khác nhau<br /> <br /> Nhóm Lô 2 Lô 3 Lô 4<br /> Lô đối chứng 1<br /> (8 cây/nhóm) (50 ppm) (100 ppm) (150 ppm)<br /> 1 7,7 8,4 7,4 7,9<br /> 2 7,4 8,3 7,5 8,0<br /> 3 7,8 8,5 7,2 7,5<br /> 4 7,7 7,9 7,5 7,6<br /> 5 7,6 8,0 7,3 7,8<br /> Trung bình 6,2 ± 0,2 a 6,9 ± 0,3 b 6,4 ± 0,3 a 5,9 ± 0,2 a<br /> <br /> Kết quả phân tích ANOVA số liệu ở 4. Kết luận<br /> bảng 2 cho thấy chiều rộng kích thước lá Oligochitosan có KLPT ~ 7,5 kDa đã<br /> trên lô khác nhau có ý nghĩa (p = 0,00). được chế tạo hiệu quả bằng phương pháp<br /> Kiểm định LSD (least significant chiếu xạ dung dịch chitosan 5%, H2O2 1%<br /> difference) cho thấy chiều rộng của lá trên ở liều xạ khá thấp, khoảng 11 kGy. Cấu<br /> lô 2 và các lô còn lại khác nhau có ý nghĩa trúc chính của oligochitosan thu được hầu<br /> (p = 0,00). Trong khi đó, chiều rộng của lá như không khác biệt so với chitosan ban<br /> trên lô đối chứng so với lô 3 (p = 0,164) và đầu. ĐĐA của oligochitosan giảm khoảng<br /> lô 4 (p = 0,064) là không khác nhau. 4%. Oligochitosan KLPT khoảng 7,5 kDa<br /> Ngoài ra, chiều rộng của lá trên lô 2 và lô có hiệu ứng gia tăng kích thước lá đối với<br /> 3 là khác nhau (p = 0,003). Điều này dâu tây. Nồng độ phù hợp của<br /> chứng tỏ nồng độ 50 ppm của oligochitosan để phun lên cây dâu tây là<br /> oligochitosan có khả năng gia tăng chiều khoảng 50 ppm.<br /> rộng kích thước lá hiệu quả hơn so với ở TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> 100 ppm.<br /> 1. Đặng Xuân Dự, Đinh Quang Khiếu, Diệp<br /> Từ kết quả phân tích ảnh hưởng của<br /> Khanh, Nguyễn Quốc Hiến. “Nghiên cứu<br /> nồng độ oligochitosan đến hiệu quả gia hiệu ứng đồng vận dung Co – 60 và H2O2 cắt<br /> tăng kích thước lá dâu tây chúng tôi nhận mạch chitosan chế tạo oligochitosan”, Tạp<br /> thấy ở nồng độ phù hợp, khoảng 50 ppm, chí Hóa Học, 51(2C), 627-631 (2003).<br /> oligochitosan có khả năng gia tăng kích 2. Nguyễn Quốc Hiến, Lê Hải, Lê Quang Luân,<br /> thước lá đối với dâu tây. Ở những nồng độ Trương Thị Hạnh, Phạm Thị Lệ Hà. “Nghiên<br /> lớn hơn, hiệu quả gia tăng kích thước lá cứu chế tạo oligochitosan bằng kỹ thuật bức<br /> giảm. Cơ chế kích thích và ức chế khả năng xạ”, Tạp chí Hóa học, 38(2), 22-44 (2000).<br /> gia tăng kích thước lá của oligochitosan lên 3. J. Brugnerotto, J. Lizardi, F. M. Goycoolea,<br /> dâu tây vẫn cần được nghiên cứu thêm. Tuy W. Arguelles – Monal, J. Desbrieres, M.<br /> Rinaudo. “An infrared investigation in<br /> nhiên, việc sử dụng oligochitosan phun<br /> relation with chitin and chitosan<br /> cho dâu tây theo chúng tôi nên tiến hành ở characterization”, Polymer, 42, 3569-3580<br /> liều thấp, với nồng độ nhỏ hơn 100 ppm. (2001).<br /> <br /> 9<br /> CHẾ TẠO OLIGOCHITOSAN BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHIẾU XẠ GAMMA CO-60 DUNG DỊCH…<br /> <br /> 4. G. V. Buxton, C. L. Greenstock, W. P. “Antimicrobial effect of chitooligosaccharides<br /> Helman, A. B. Ross. “Critical review of rate produced by bioreactor”, Carbohydrate<br /> constants for hydrated electron, hydrogen Polymers, 44, 71-76 (2001).<br /> atoms and hydroxyl radical (OH/O-) in 9. S. K. Kim, N. Rajapakse. “Enzymatic<br /> aqueous”, Journal of Physical and Chemical production and biological activities of<br /> Reference Data, 17(2), 513-886 (1988). chitosan oligosaccharides (COS): A review”,<br /> 5. N. N. Duy, D. V. Phu, N. T. Anh, N. Q. Carbohydrate Polymers, 62, 357-368 (2005).<br /> Hien. “Synergistic degradation to prepare 10. J. Kumirstra, M. Czerwicka, Z. Kaczynski,<br /> oligochitosan by  - irradiation of chitosan A. Bychowska, K. Brozowski, J. Thoming, P.<br /> solution in the presence of hydrogen Stepnowski. “Application of spectroscopic<br /> peroxide”, Radiation Physical Chemistry, 80, methods for structural analysis of chitin and<br /> 848-853 (2011). chitosan”, Marine Drugs, 8, 1567-1636<br /> 6. S. Hirano, N. Nagao. “Effects of chitosan, (2010).<br /> pectic acid, lysozyme and chitinase on the 11. J. Shao, Y. Yang, Q. Zhong. “Study on<br /> growth of several phytopathogens”. preparation of oligoglucosamine by oxidative<br /> Agricultural and Biological Chemistry, 53, degradation under microwave”, Polymer<br /> 3065-3066 (1989). Degradation and Stability, 82, 395-398<br /> 7. Y. J Jeon, S. K. Kim. “Effect of antimicrobial (2003).<br /> activity by chitosan oligosaccharides N- 12. P. Ulanski, C. von Sontag. “OH – radical<br /> conjugated with asparagines”, Journal of induced chain scission of chitosan in the<br /> Microbiology and Biotechnology, 11, 281- absence and present of dioxygen”, Journal of<br /> 286 (2001). the Chemical Society, Perkin Transactions, 2,<br /> 8. Y. J. Jeon, P. J. Park, S. K. Kim. 2022-2028 (2000).<br /> <br /> <br /> Ngày nhận bài: 09/7/2017 Biên tập xong: 15/8/2017 Duyệt đăng: 20/8/2017<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> 10<br />