Điều chế chất đối chiếu damnacanthal và nordamnacanthal từ rễ nhàu (radix morindae citrifoliae) phục vụ công tác nghiên cứu và kiểm nghiệm

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ bản của Số 1 * 2012<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> ĐIỀU CHẾ CHẤT ĐỐI CHIẾU DAMNACANTHAL VÀ NORDAMNACANTHAL<br /> TỪ RỄ NHÀU (RADIX MORINDAE CITRIFOLIAE) PHỤC VỤ CÔNG TÁC<br /> NGHIÊN CỨU VÀ KIỂM NGHIỆM<br /> Dương Hồng Tố Quyên*, Nguyễn Minh Đức**<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Đặt vấn đề - Mục đích nghiên cứu: Rễ Nhàu (Radix Morindae citrifoliae) là một cây thuốc cổ truyền được<br /> dùng cho bệnh nhân ung thư đau lưng, cao huyết áp, đau lưng. Antrquinon trong rễ cây này chủ yếu là<br /> damnacanthal và nor-damnacanthal.<br /> Đối tượng – Phương pháp nghiên cứu: Dùng sắc ký cột chân không và sắc ký cột cổ điển, chúng tôi phân<br /> lập chất nor - damnacanthal và damnacanthal từ cao chiết rễ Nhàu. Dùng HPLC xác định độ tinh khiết và phổ<br /> cộng hưởng từ hạt nhân để xác định cấu trúc hóa học của chất phân lập.<br /> Kết quả: Thu được nor - damnancanthal tinh khiết 99,59% (HPLC) và damnacanthal 99,79% (HPLC)<br /> dùng làm chất chuẩn đối chiếu.<br /> Kết luận: Kết quả của đề tài là cơ sở để điều chế chất đối chiếu nor-damnacanthal và damnacanthal với qui<br /> mô lớn, phục vụ cho công tác nghiên cứu và kiểm nghiệm.<br /> Từ khóa: Điều chế, sắc ký lỏng hiệu năng cao, damnacanthal, nor-damnacanthal.<br /> <br /> ABTRACT<br /> PREPARATION OF DAMNACANTHAL AND NOR – DAMNACANTHAL REFERENCE STANDARD<br /> FROM ROOTS OF MORINDA CITRIFOLIA L., (RUBIACEAE)<br /> Duong Hong To Quyen, Nguyen Minh Duc * Y Hoc TP. Ho Chi Minh<br /> * Vol. 16 - Supplement of No 1 – 2012 : 230 – 234<br /> Background - Objectives: Radix Morindae citrifoliae is a medicinal plant traditionally used to treat<br /> cancer, hypertension., and back pain. The most medicinally valuable antraquinones in the roots this plant is<br /> damnacanthal and nor-damnacanthal<br /> Methods: In this study, we prepatated damnacanthal and nor – damnacanthal from the root of Morinda<br /> citrifolia. By the regular methods as vacuum liquid chromatography (VLC) and colum chromatography (CC), we<br /> obtained damnacanthal and nor-damnacanthal of high purity which can be used as references standar. Chemical<br /> structure and purity of damnacanthal and nor- damnacanthal were determined by conventional methods<br /> (analytical HPLC and NMR).<br /> Results: Nor – damnacanthal 99. 59% (HPLC) and damnacanthal 99. 79% (HPLC) , which can be used as<br /> reference standards, were obtained.<br /> Conclusion: Damnacanthal and nor–damnacanthal can be produced from the roots of Morinda citrifolia by<br /> VLC and CC.<br /> Key words: Preparation, analytical HPLC, damnacanthal, nor-damnacanthal.<br /> <br /> <br /> Bệnh viện Y học cổ truyền Tp. HCM<br /> ** Khoa Y học cổ truyền - Đại học Y Dược Tp. HCM<br /> Tác giả liên lạc: DS. Dương Hồng Tố Quyên ĐT: 0934452889<br /> <br /> Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền<br /> <br /> Email: toquyen300679@yahoo.com.vn<br /> <br /> 229<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ bản của Số 1 * 2012<br /> <br /> ĐẶT VẤN ĐỀ<br /> Cây Nhàu Núi (Morinda citrifolia L.,<br /> Rubiaceae) được trồng và mọc hoang rất nhiều ở<br /> nước ta(3). Rễ Nhàu được dùng chữa cao huyết<br /> áp, nhức mỏi, đau lưng và lợi tiểu nhẹ (3). Thành<br /> phần hóa học của rễ Nhàu được xác định chủ<br /> yếu chứa nhóm antraquinon: Damnacanthal,<br /> nor-damnacanthal, alizarin, alizarin-1-methyl<br /> ether, rubiadin -1-methyl ether, morindon(2,6).<br /> Một số nghiên cứu gần đây cho thấy<br /> damnacanthal và nor-damnacanthal chiết xuất<br /> từ than và rễ nhàu có tác dụng kháng khối u in<br /> vitro trên mô hình thử nghiệm dòng tế bào L1210 và tế bào B-16 (2). Ngoài ra, damnacanthal<br /> có tác dụng ức chế nhiều loại tế bào tiền ung thư<br /> (7). Các chế phẩm từ Nhàu được sử dụng ngày<br /> càng nhiều trên thị trường. Các phương pháp<br /> dùng kiểm nghiệm cho chế phẩm như quang<br /> phổ, sắc ký lớp mỏng, đặc biệt là sắc ký lỏng<br /> hiệu năng cao đã trở thành phương pháp kiểm<br /> nghiệm tin cậy, hiệu quả. Tuy nhiên, để áp dụng<br /> các phương pháp này cần phải có chất đối<br /> chiếu. Nhưng nước ta thiếu chất chuẩn cần thiết,<br /> đa số các chất chất chuẩn phải mua từ nước<br /> ngoài đắt tiền, nhiều khi không có sẵn như 5 mg<br /> chất chuẩn damnacanthal giá 1.200 USD. Do đó,<br /> đề tài được thực hiện nhằm mục đích điều chế<br /> damnacanthal và nor- damnacanthal từ rễ Nhàu<br /> làm chất đối chiếu phục vụ cho kiểm nghiệm và<br /> tiêu chuẩn hóa chất lượng sản phẩm và nguyên<br /> liệu từ Nhàu.<br /> <br /> NGUYÊN LIỆU - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN<br /> CỨU<br /> Nguyên liệu<br /> Rễ nhàu (Radix Morindae citrifoliae) do công<br /> ty TNHH ADC cung cấp. Rễ nhàu đem rửa<br /> sạch, thái phiến phơi khô rồi tán thành bột thô.<br /> <br /> Hóa chất và trang thiết bị<br /> Hóa chất - Dung môi<br /> Methanol, ethanol, aceton, cloroform, toluen<br /> , ethyl acetate (Trung Quốc), methanot, nước cất<br /> (Merck, Đức). Chất đối chiếu damnacanthal và<br /> <br /> 230<br /> <br /> nor-damnacanthal 99,9% do Ban nghiên cứu<br /> khoa, khoa Dược trường Đại Học Y Dược Tp.<br /> HCM cung cấp.<br /> Trang thiết bị<br /> Cân phân tích Sartorius độ nhạy 0,1 mg<br /> (Nhật bản), bếp cách thủy Menmmert WB.14<br /> (Đức), máy cô quay Buchi R300 (Thụy sĩ), máy<br /> siêu âm Sanorex RK510 H (Pháp), cột sắc ký<br /> bằng thủy tinh (Việt nam), máy sắc ký lỏng hiệu<br /> năng cao Waters 2695 (Mỹ), máy đo phổ hông<br /> ngoại FTIR -820 PC, máy đo phổ cộng hưởng từ<br /> hạt nhân Bruker AV 500 (500MHz), máy soi UV<br /> 2 bước song 254 nm và 365 nm Vilber Lourinat<br /> (Pháp), Bảng mỏng TCL Silica gel 60 F254 và<br /> Silica gel cỡ hạt 0,040-0,063 mm, (Merck, Đức).<br /> <br /> Phương pháp nghiên cứu<br /> Chiết xuất<br /> Chiết bột thô rễ nhàu bằng cách đun hồi lưu<br /> với ethanol 960. Dịch chiết được loại dung môi<br /> dưới áp suất giảm. Cao lỏng thu được hòa với<br /> nước tỷ lệ 1:1 và được chiết phân bố lỏng - lỏng<br /> với ethyl acetat (EtOAc thu dịch chiết, tiến hành<br /> loại dung môi thu được cao ethyl acetat.<br /> Phân lập và tinh chế<br /> Sắc ký cột chân không<br /> Cột được dùng trong sắc ký cột chân không<br /> (VLC) là cột thuỷ tinh kích thước 5 × 30 cm, khối<br /> lượng mẫu 10 g cao ethyl acetat, pha động là hệ<br /> toluen – ethyl acetat với tỷ lệ ethyl acetat tăng từ<br /> 2 – 10 %, khai triển với tốc độ 20 ml/ 5 phút, thể<br /> tích mỗi phân đoạn 50 ml, pha tĩnh là silica gel<br /> cỡ hạt 40 – 63 µm (250g), thể tích hứng ban đầu<br /> là 150 ml sau đó giảm dần. Các phân đoạn hứng<br /> được kiểm tra bằng sắc ký lớp mỏng với hệ<br /> dung môi benzen - cloroform (1:1) và phát hiện<br /> bằng UV bước sóng 365nm và 254nm.<br /> Sắc ký cột cổ điển (CC)<br /> Cột được dùng là cột thủy tinh (4,5 × 50 cm),<br /> pha tĩnh là silica gel cỡ hạt 40-63 µm (100 g), nạp<br /> mẫu ướt bằng cách hòa tan mẫu trong 7 ml<br /> toluen, mẫu nạp là phân đoạn 3 của VLC (4 g).<br /> Pha động ban đầu triển khai với 250 ml EtOAc;<br /> <br /> Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ bản của Số 1 * 2012<br /> sau đó triển khai bằng hệ dung môi là toluen.<br /> Thể tích hứng một lần 30 ml, tốc độ 2 ml/phút.<br /> Kiểm tra các phân đoạn bằng sắc ký lớp mỏng<br /> với hệ dung môi benzen-cloroform (1:1), phát<br /> hiện soi UV 254 nm và thuốc thử KOH 10%<br /> trong methanol.Gom các phân đoạn giống nhau<br /> rồi cô thu hồi dung môi dưới áp suất giảm.Tiếp<br /> tục tiến hành sắc ký cột cổ điển tương tự với các<br /> phân đoạn (4 + 5) của VLC (5,3 g). Pha động ban<br /> đầu triển khai pha động là hệ toluen – ethyl<br /> acetat với tỷ lệ ethyl acetat tăng từ 0 -10%.<br /> Kiểm tra độ tinh khiết: Định lượng bằng sắc ký<br /> lỏng<br /> hiệu<br /> năng<br /> cao<br /> (HPLC)(1).<br /> Xác định cấu trúc: Dùng phổ cộng hưởng từ hạt<br /> nhân (NMR)(4).<br /> <br /> KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN<br /> Bảng 1: Kết quả các phân đoạn VCL từ cao EtOAc<br /> của rễ nhàu<br /> Khối<br /> Phân Toluen:ethy<br /> lượng Thành phần<br /> đoạn<br /> l acetat<br /> (g)<br /> 1<br /> 98 : 2<br /> 0,32<br /> C1 + C2<br /> C1 + C2 +<br /> 2<br /> 97 : 3<br /> 0,38<br /> C3<br /> C3 + C4 +<br /> 3<br /> 95 : 5<br /> 1,4<br /> tạp<br /> C3 + C4 +<br /> 4<br /> 94 : 6<br /> 0,7<br /> tạp<br /> C3 + C4 +<br /> 5<br /> 90 : 10<br /> 1,1<br /> C5<br /> <br /> Ghi chú<br /> <br /> Chủ yếu C3<br /> Chủ yếu C3<br /> Chủ yếu C4<br /> Chủ yếu C4<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Bảng 2: Kết quả các phân đoạn sắc ký cột từ phân<br /> đoạn 3.<br /> Phân<br /> đoạn<br /> 3.1<br /> 3.2<br /> 3.3<br /> 3.4<br /> <br /> Toluen<br /> Khối<br /> Thành phần Ghi chú<br /> (ml)<br /> lượng (g)<br /> 500<br /> 1,3<br /> C3<br /> 300<br /> 0,87<br /> C3 + ít tạp Chủ yếu C3<br /> 300<br /> 1,7<br /> C3 + C4 + tạp Chủ yếu C3<br /> 200<br /> 0,4<br /> C4 + tạp<br /> Chủ yếu C4<br /> <br /> Kiểm tra các phân đoạn bằng sắc ký lớp<br /> mỏng. Gom các phân đoạn giống nhau rồi cô<br /> thu hồi dung môi dưới áp suất giảm. Phân<br /> đoạn 3.1 kết tinh lại trong toluen nóng thu<br /> được tinh thể hình kim ngắn màu vàng nghệ<br /> (N1) có khối lượng 1, 2 g. Phân đoạn 3.4 kết<br /> tinh lại trong toluen nóng thu được 0, 25 g<br /> tinh thể hình kim dài màu vàng tạm gọi chất<br /> N2.Tiến hành tương tự với 3, 5 g chất từ phân<br /> đoạn (4+5) thu được 5 phân đoạn kết quả<br /> sau:Phân đoạn 4.1 và 4.4 đem cô thu hồi dung<br /> môi rồi kết tinh lại trong toluen nóng. Phân<br /> đoạn 4.1 thu được 0,4 g tinh thể chất N1. Phân<br /> đoạn 4.4 thu được 1,2 g tinh thể chất N2.<br /> <br /> Kiểm tra độ tinh khiết chất N1 bằng HPLC<br /> Điều kiện sắc ký: cột Prontosil C8 (100 x 4,6<br /> m kích thước hạt 3 m, pha động MeOH-H2O<br /> (80:20), nhiệt độ cột 250C, tốc độ dòng 0,80 ml/<br /> phút, phát hiện UV 248 nm. Cân chính xác 1mg<br /> chất N1 hòa tan hoàn toàn vào 1 ml pha động,<br /> lọc qua màng lọc 0,45 m, thể tích bơm 10 µl.<br /> <br /> Kiểm tra các phân đoạn bằng sắc ký lớp<br /> mỏng. Từ phân đoạn 2, thu được chất N1 màu<br /> vàng nghệ, kết tinh lại trong toluen nóng thu<br /> được khối lượng 250 mg, phân đoạn 3 có khối<br /> lượng 1,4 g, phân đoạn (4 + 5) khối lượng 1, 8<br /> g. Tiến hành tương tự như trên, dùng 2 cột<br /> VLC phân tách 20 g cao EtOAc của rễ nhàu.<br /> Kết quả thu được chất N1 có khối lượng 400<br /> mg, phân đoạn 3 có khối lượng 2,6 g, (4 + 5)<br /> khối lượng 3, 5 g.<br /> <br /> Kết quả các phân đoạn từ sắc ký cột cổ điển<br /> Dùng sắc ký cột cổ điển tiếp tục phân lập<br /> đơn chất từ các phân đoạn 3 và (4+5).<br /> <br /> Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền<br /> <br /> Hình 1: Sắc ký đồ HPLC chất N1<br /> Bảng 3: Kết quả định lượng chất N1 bằng HPLC<br /> Lần thử<br /> nghiệm<br /> 1<br /> 2<br /> <br /> Diện tích Hàm lượng Các thông số thống<br /> đỉnh<br /> (%)<br /> kê<br /> Trung<br /> bình<br /> 99,59%<br /> 4167311<br /> 99.59<br /> SD = 0.033<br /> 4166903<br /> 99.58<br /> <br /> 231<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ bản của Số 1 * 2012<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> 3<br /> 4<br /> 5<br /> 6<br /> <br /> 4163909<br /> 4167311<br /> 4167706<br /> 4167311<br /> <br /> 99.60<br /> 99.59<br /> 99.55<br /> 99.59<br /> <br /> RSD = 0,02%<br /> <br /> Chất N1 có độ tinh khiết 99,59% dựa vào độ<br /> tinh khiết sắc ký.<br /> <br /> Kiểm tra cấu trúc chất N1 bằng NMR.<br /> Phổ 1H-NMR (500MHz, CDCl3), 13C-NMR<br /> (125 MHz, CDCl3 và DEPT (125 MHz, CDCl3)<br /> cho cho các tín hiệu đặc trưng: 15 tín hiệu<br /> carbon trong đó có 5 carbon bậc 4, tất cả đều<br /> cộng hưởng ở vùng trường thấp, có 2 carbon<br /> carbonuyl đặc trưng nhóm quinon(C 186,7,<br /> 181,3 ppm), 2 nhóm thế trên nhân thơm (C 169,1,<br /> 168,1 ppm). Trong 5 nhóm carbon bậc 3, có 4<br /> carbon có dịch chuyển carbon và proton trùng<br /> nhau thành 2 nhóm (C 134,7, H 7,84 ppm, 2H,m<br /> và C 127,7, H 8,30 ppm, 2H, m) đặc trưng của<br /> cấu trúc vòng thơm đối xứng.<br /> Bảng 4: Dữ liệu phổ 13C-NMR của chất N1 (125<br /> MHz, CDCl3 so với 13C-NMR của nor-damnacanthal<br /> chuẩn theo tài liệu (5)<br /> Vị trí<br /> =C(1)-O>C(2)=<br /> =C(3)-O=C(4)H=C(5)H=C(6)H=C(7)H=C(8)H>C(9)=O<br /> >C(10)=O<br /> >C(11)=<br /> >C(12)=<br /> >C(13)=<br /> >C(14)=<br /> -C(15)HO<br /> -OH(C(1))<br /> -OH(C(3))<br /> <br /> C chuẩn C của N1<br /> 168,1<br /> 168,1<br /> 112,1<br /> 112,1<br /> 169,1<br /> 169,1<br /> 109,4<br /> 109,4<br /> 127,8<br /> 127,7<br /> 127,0<br /> 127,0<br /> 134,8<br /> 134,7<br /> 134,7<br /> 134,7<br /> 186,7<br /> 186,8<br /> 181,3<br /> 181,3<br /> 133,3<br /> 133,3<br /> 133,2<br /> 133,2<br /> 109,0<br /> 109,1<br /> 139,5<br /> 139,4<br /> 193,9<br /> 193,8<br /> <br /> H chuẩn<br /> <br /> H củaN1<br /> <br /> 7,33(s)<br /> 8,30(m)<br /> 8,30(m)<br /> 7,84(m)<br /> 7,84(m)<br /> <br /> 7,26(s)<br /> 8.30(m)<br /> 8.30(m)<br /> 7,82(m)<br /> 7,82(m)<br /> <br /> Hình 2: Sắc ký đồ HPLC chất N2<br /> Bảng 5 : Kết quả định lượng chất N2 bằng HPLC<br /> Lần thử<br /> nghiệm<br /> 1<br /> 2<br /> 3<br /> 4<br /> 5<br /> 6<br /> <br /> Diện tích Hàm lượng Các thông số<br /> đỉnh<br /> (%)<br /> thống kê<br /> 3762954<br /> 99,74<br /> 3771021<br /> 99,95<br /> Trung bình 99,79%<br /> 3767205<br /> 99,85<br /> SD = 0,083<br /> RSD = 0,07%<br /> 3762954<br /> 99,74<br /> 3762879<br /> 99,69<br /> 3762938<br /> 99,74<br /> <br /> Chất N2 tinh khiết 99,79% dựa vào độ tinh<br /> khiết sắc ký.<br /> <br /> Kiểm tra cấu trúc chất N2 bằng NMR.<br /> Phổ 1H-NMR (500MHz, CDCl3), 13C-NMR<br /> (125 MHz, CDCl3 và DEPT (125 MHz, CDCl3)<br /> cho cho các tín hiệu đặc trưng giống với phổ<br /> NMR của chất damnacanthal chuẩn.<br /> Bảng 6: Dữ liệu phổ 13C-NMR của chất N2 (125<br /> MHz, CDCl3 so với 13C-NMR của damnacanthal<br /> chuẩn theo tài liệu (5)<br /> <br /> 12,67(s)<br /> 14,05(s)<br /> 10,5(s)<br /> <br /> 12,65(s)<br /> 14,2(s)<br /> 10,48(s)<br /> <br /> Cấu trúc chất N1 là nor – damnacanthal<br /> (C15H8O5.<br /> <br /> Kiểm tra độ tinh khiết chất N2 bằng HPLC<br /> <br /> 232<br /> <br /> Điều kiện sắc ký tương tự như của chất N1<br /> nhưng dùng cột Supelcosil LC 18 (250 x 4,6<br /> mm), kích thước hạt 5 m, pha động là MeOHH2O (60:40).<br /> <br /> Vị trí<br /> <br /> H chuẩn<br /> <br /> =C(1)-O>C(2)=<br /> =C(3)-O=C(4)H=C(5)H=C(6)H=C(7)H=C(8)H>C(9)=O<br /> >C(10)=O<br /> >C(11)=<br /> <br /> 166,7<br /> 118,5<br /> 166,6<br /> 113,1<br /> 127,4<br /> 127,1<br /> 134,8<br /> 134,0<br /> 187,5<br /> 180,2<br /> 133,6<br /> <br /> C chuẩn<br />  chuẩn<br /> H chuẩn H<br /> N2<br /> N2<br /> 166,7<br /> 118,1<br /> 166.6<br /> 117,4<br /> 7,66(s)<br /> 7,68(s)<br /> 127,4<br /> 8,20(m)<br /> 8,3(m)<br /> 127,1<br /> 8,20(m)<br /> 8,3(m)<br /> 134,9<br /> 7,75(m)<br /> 7,8(m)<br /> 134,8<br /> 7,75(m)<br /> 7,8(m)<br /> 181,9<br /> 180,2<br /> 133,6<br /> <br /> Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ bản của Số 1 * 2012<br /> Vị trí<br /> <br /> H chuẩn<br /> <br /> >C(12)=<br /> >C(13)=<br /> >C(14)=<br /> -C(15)HO<br /> -OMe(16)<br /> =C(1)-O-<br /> <br /> 133,0<br /> 113,0<br /> 145,0<br /> 195,5<br /> 64,7<br /> 166,7<br /> <br /> C chuẩn<br /> H chuẩn<br /> H chuẩn<br /> N2<br /> N2<br /> 132,5<br /> 113,1<br /> 141,7<br /> 195,5<br /> 12,26(s) 12,27(s)<br /> 64,7<br /> 4,13(s)<br /> 4,13(s)<br /> 166.7<br /> <br /> chế chất đối chiếu với qui mô lớn phục vụ công<br /> tác nghiên cứu và kiểm nghiệm.<br /> <br /> TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> 1.<br /> <br /> 2.<br /> <br /> Cấu trúc chất N2 là damnacanthal (C16H10O5.<br /> <br /> KẾT LUẬN<br /> Kết quả nghiên cứu đã xác định phương<br /> pháp ổn định và qui trình chiết xuất, phân lập,<br /> tinh khiết hóa chất damnacanthal và nordamnacanthal từ rễ nhàu. Xác định độ tinh khiết<br /> bằng HPLC và kiểm tra cấu trúc bằng phổ<br /> NMR. Kết quả thu được nor-damnacanthal với<br /> độ tinh khiết 99, 5% (HPLC), damnacanthal tinh<br /> khiết 99, 7% (HPLC) đạt tiêu chuẩn làm chất đối<br /> chiếu. Kết quả nghiên cứu cũng là cơ sở điều<br /> <br /> Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> 3.<br /> 4.<br /> <br /> 5.<br /> <br /> 6.<br /> 7.<br /> <br /> Nguyễn Minh Đức (2006), Sắc ký lỏng hiệu năng cao và một số<br /> ứng dụng vào nghiên cứu, kiểm nghiệm dược phẩm, dược liệu<br /> và hợp chất tự nhiên, NXB Y Học, tr.150 – 155.<br /> Trần Thị Bửu Hoàn (2002), Góp phần nghiên cứu thành phần<br /> hóa học và tác dụng sinh học cây Nhàu, khóa luận tốt nghiệp<br /> dược sĩ Đại học, ĐHYD Tp.Hồ Chí Minh.<br /> Đỗ Tất Lợi (2004), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, NXB<br /> Y học, tr.306 -307.<br /> Nguyễn Kim Phi Phụng (2005), Phổ NMR sử dụng trong phân<br /> tích hữu cơ, NXB Đại học quốc gia, thành phố Hồ Chí Minh, tr.<br /> 87-95.<br /> Do Quoc Viet, Pham Gia Dien, Mai Ngoc Tam, Phan Thi Phi<br /> Phi, Nguyen Hai Nam, you yong jea AndByung- Zun Ahn<br /> (1999), Cytotoxicity of some antraquinones from the stem of<br /> Morinda citrifolia Growing in Viet Nam, Hoa Hoc, 3(37), pp. 9497.<br /> Leitsner E. (1975), Planta Medica, 214-224 [in C.A., (83), pp.<br /> 17545<br /> Hiramatsu T (1993), Introduction of normal phenotypes in RAS<br /> tranformed cells by Damnacanthal from Morinda citrifolia,<br /> Cancer Letter (73), pp.161-166.<br /> <br /> 233<br /> <br />