Định lượng cefaclor trong huyết tương chó bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao

TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2013<br /> <br /> ĐỊNH LƯỢNG CEFACLOR TRONG HUYẾT TƯƠNG CHÓ<br /> BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO<br /> Nguyễn Bá Trí*; Nguyễn Văn Thịnh*; Vũ Tuấn Anh*<br /> Nguyễn Hữu Tuấn Dũng**; Phạm Xuân Phong***<br /> TÓM TẮT<br /> ệ<br /> <br /> ệ<br /> ệ<br /> <br /> H<br /> <br /> ử dụ<br /> <br /> o<br /> <br /> x Gemini C18<br /> H<br /> ệ<br /> <br /> H<br /> <br /> ph<br /> <br /> -<br /> <br /> d<br /> <br /> sử dụ<br /> * Từ<br /> <br /> nh kh dụ<br /> H<br /> <br /> hidig<br /> <br /> - 102,97%.<br /> ờng sinh học ê<br /> <br /> ã<br /> c nghiệm.<br /> <br /> ng hiệ<br /> <br /> DETERMINATION OF CEFACLOR IN DOG PLASMA BY HIGH PERFORMANCE<br /> LIQUID CHROMATOGRAPHY<br /> Summary<br /> A sensitive and selective HPLC with detector PDA (263 nm) was developed and validated for<br /> quantitation of cefaclor in dog plasma using cefadroxin as intenal standard. After precipitating protein<br /> in plasma by Pecloric acid and Dicloromethane, cefaclor and internal standar were enluted from<br /> Phenomenex Gemini C18 column (5 m, 250 x 4 mm) at 25C with a mobile phase consisting of 10<br /> mM phosphate buffer (with TBAH (10/90, v/v) at a flow rate of 1.0 ml/min. The lower limit of<br /> quantitation was 0.5 µg/ml with a relative standard deviation of less than 20%. A linear range of 0.5 107.8 µg/ml was established. This HPLC method was validated with between-batch and within-batch<br /> precision of 1.38 - 5.42% and 4.49 - 7.21% respectively. The between-batch and within-batch accuracy<br /> was 88.25 to 101.90% and 90.39 to 102.97% respectively. This validated method is sensitive and<br /> repeatable enough to be used in bioavailability and bioequivalence studies.<br /> * Key words: Cefaclor; Dog plasma; High performance liquid chromatography.<br /> <br /> * Học viện Quân y<br /> ** Đại học Đà Lạt<br /> *** Viện Y học Cổ truyền Quân đội<br /> Người phản hồi (Corresponding): Nguyễn Văn Thịnh (nguyenvanthinh@gmail.com)<br /> Ngày nhận bài: 2/8/2013; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 3/9/2013<br /> Ngày bài báo được đăng: 24/9/2013<br /> <br /> 1<br /> <br /> TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2013<br /> <br /> ĐẶT VẤN ĐỀ<br /> <br /> ì<br /> <br /> theo<br /> ặc hiệu,<br /> <br /> ng d n c a FDA Cefaclor<br /> th hệ<br /> sử dụ<br /> u tr ch<br /> ch ng nhiễm khu n.<br /> Đã<br /> <br /> ts<br /> <br /> cephalosporin<br /> ổr<br /> c<br /> ù<br /> <br /> ê<br /> <br /> trong huy<br /> th , l n [1].<br /> ê<br /> dụ<br /> K<br /> ê<br /> lấ<br /> ờ<br /> ã<br /> phục hồi th tr<br /> nhi u l n ti<br /> ê<br /> K<br /> a ch ph<br /> é<br /> <br /> ng vậ<br /> ê<br /> <br /> KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ<br /> BÀN LUẬN<br /> .<br /> <br /> ê<br /> ô<br /> <br /> tri<br /> ì ậ<br /> <br /> u<br /> n<br /> <br /> s<br /> m cefaclor gi<br /> <br /> ti n<br /> <br /> d<br /> Lấy 0,5 ml huy<br /> <br /> u tr ng/<br /> ê<br /> <br /> chu n/thử<br /> dung d<br /> <br /> g/ml (n i chu n);<br /> <br /> 0,25 ml dung d ch HClO4<br /> <br /> ấy d ch<br /> ọc 0,45 m. D ch lọc thu<br /> ù<br /> <br /> Đ ng vật, Học<br /> n<br /> Ư<br /> <br /> ấ<br /> ử ụ<br /> c cất (HPLCấ<br /> t<br /> <br /> n PA.<br /> <br /> ệ<br /> ng hiệu<br /> ng cao HPLC waters, autosampler, detector<br /> nh UNIVERSAL 320<br /> H<br /> Đ c,), t l<br /> F<br /> I<br /> H Q c).<br /> <br /> ồ<br /> <br /> ọ<br /> <br /> ệ<br /> <br /> t:<br /> <br /> Gemini C18, 5 m, 250 x 4 mm. Nhiệ<br /> ệm phosphat<br /> <br /> c t: 25C. Ph<br /> H<br /> <br /> a TBAH) t lệ 10:90 (v/v).<br /> <br /> T<br /> c 263 nm. Th<br /> chu<br /> <br /> ê<br /> i nồ<br /> <br /> u 50 l. N i<br /> 200 g/ml.<br /> <br /> 2. K<br /> -<br /> <br /> .<br /> <br /> * Độ đặc hiệu, chọn lọc:<br /> <br /> 2. P<br /> <br /> ấ<br /> <br /> ê<br /> <br /> K<br /> <br /> y cung cấp.<br /> <br /> ệ<br /> <br /> ml<br /> <br /> CH2Cl2, l<br /> nổi, lọ<br /> <br /> ô<br /> <br /> ử<br /> <br /> ]<br /> <br /> cefaclor trong huy<br /> <br /> - H<br /> ấ<br /> (Viện Ki m nghiệm Thu<br /> -25o<br /> <br /> ì<br /> <br /> ệ [<br /> <br /> Qua tham kh<br /> <br /> ng<br /> <br /> N<br /> <br /> ê<br /> <br /> tuy<br /> <br /> t lệ thu hồi).<br /> <br /> ô b v<br /> ng cefaclor<br /> ệ<br /> u sinh kh<br /> <br /> NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP<br /> NGHIÊN CỨU<br /> <br /> -H<br /> việ Q<br /> <br /> gi i h<br /> <br /> u huy<br /> huy<br /> <br /> i chu n<br /> <br /> cefadroxil.<br /> <br /> 2<br /> <br /> TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2013<br /> 0.20<br /> 0.50<br /> <br /> 0.40<br /> <br /> AU<br /> <br /> AU<br /> <br /> 0.15<br /> <br /> 0.10<br /> <br /> 0.30<br /> <br /> 0.20<br /> <br /> 0.05<br /> 0.10<br /> <br /> 0.00<br /> <br /> 0.00<br /> <br /> 0.00<br /> <br /> 2.00<br /> <br /> 4.00<br /> <br /> 6.00<br /> Minutes<br /> <br /> 8.00<br /> <br /> 10.00<br /> <br /> 12.00<br /> <br /> 2.00<br /> <br /> 4.00<br /> <br /> 6.00<br /> Minutes<br /> <br /> 8.00<br /> <br /> 10.00<br /> <br /> 12.00<br /> <br /> H×nh 1: S¾c ký ®å mÉu huyÕt t-¬ng tr¾ng (a) vµ s¾c ký ®å mÉu huyÕt t-¬ng chã<br /> chøa cefalor vµ cefadroxin (b).<br /> 5.346<br /> <br /> 10.055<br /> 240.00<br /> <br /> 260.00<br /> <br /> 280.00<br /> <br /> nm<br /> <br /> 220.00<br /> <br /> nm<br /> <br /> 220.00<br /> <br /> 240.00<br /> <br /> 300.00<br /> <br /> 320.00<br /> <br /> 340.00<br /> <br /> 360.00<br /> <br /> 380.00<br /> <br /> 260.00<br /> <br /> 280.00<br /> <br /> 300.00<br /> <br /> 320.00<br /> <br /> 340.00<br /> <br /> 360.00<br /> <br /> 380.00<br /> <br /> 229.1<br /> <br /> 5.35<br /> <br /> 10.06<br /> <br /> 263.3<br /> 262.2<br /> <br /> Hình 2: Phổ hấp thụ c<br /> ê<br /> <br /> ct<br /> <br /> ).<br /> <br /> ồ m u chu n xuất hiệ<br /> <br /> u<br /> <br /> ô<br /> <br /> tr<br /> b<br /> <br /> t qu phổ hấp thụ c a 2<br /> khẳ<br /> <br /> *<br /> <br /> i i hạn đ nh l<br /> ng 1:<br /> <br /> ng d<br /> <br /> i:<br /> <br /> ụ<br /> <br /> ệ<br /> <br /> ệ<br /> <br /> ồ<br /> Í H I<br /> <br /> DIỆ<br /> M u chu<br /> <br /> STT<br /> Cefaclor (Rt =<br /> <br /> mAU.s)<br /> <br /> )<br /> Cefadroxil (Rt =<br /> <br /> M u tr ng<br /> 6,5 -<br /> <br /> 9,5 -<br /> <br /> 1<br /> <br /> 17211<br /> <br /> 659087<br /> <br /> 2274<br /> <br /> 17455<br /> <br /> 2<br /> <br /> 16927<br /> <br /> 650461<br /> <br /> 1142<br /> <br /> 19307<br /> <br /> 3<br /> <br /> 22751<br /> <br /> 666927<br /> <br /> 2087<br /> <br /> 15586<br /> <br /> 4<br /> <br /> 23499<br /> <br /> 663237<br /> <br /> 1105<br /> <br /> 9195<br /> <br /> 5<br /> <br /> 21023<br /> <br /> 670452<br /> <br /> 1773<br /> <br /> 27034<br /> <br /> ì<br /> <br /> 20282<br /> <br /> SD<br /> <br /> 3069<br /> <br /> RSD(%)<br /> <br /> 15,13<br /> <br /> 3<br /> <br /> TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2013<br /> <br /> ờ<br /> <br /> ồ<br /> RSD = 15,13% (< 20%).<br /> <br /> ,<br /> ,<br /> <br /> *Đ<br /> <br /> ng chu n và ho ng tuy n t nh:<br /> <br /> ng 2:<br /> <br /> ụ<br /> <br /> ệ<br /> <br /> ệ<br /> <br /> ồ<br /> <br /> 0,5<br /> <br /> 1,1<br /> <br /> 1,9<br /> <br /> 4,5<br /> <br /> 10,3<br /> <br /> 19,8<br /> <br /> Diệ<br /> (mAU.s)<br /> <br /> 20771<br /> <br /> 40021<br /> <br /> 65461<br /> <br /> 149551<br /> <br /> 334278<br /> <br /> 647070<br /> <br /> 1594066 3326802<br /> <br /> Diệ<br /> (mAU.s)<br /> <br /> 672315<br /> <br /> 674029<br /> <br /> 676148<br /> <br /> 662605<br /> <br /> 666327<br /> <br /> 674636<br /> <br /> 665180<br /> <br /> 641393<br /> <br /> 0,031<br /> <br /> 0,059<br /> <br /> 0,097<br /> <br /> 0,226<br /> <br /> 0,502<br /> <br /> 0,959<br /> <br /> 2,396<br /> <br /> 5,187<br /> <br /> 99,5<br /> <br /> 107,8<br /> <br /> Nồ<br /> <br /> th<br /> <br /> T lệ diệ<br /> chu n<br /> <br /> n/n i<br /> <br /> ì<br /> *<br /> (Y = aX + b)<br /> <br /> ồi quy<br /> <br /> 49,7<br /> <br /> 107,8<br /> <br /> 2<br /> <br /> Y = 0,04804X + 0,007293; R = 0,999<br /> <br /> Nồ<br /> nh từ<br /> ờng chu n so v i<br /> th c (%)<br /> <br /> 98,3<br /> <br /> 108,4<br /> <br /> 93,2<br /> <br /> 90,9<br /> <br /> 102,9<br /> <br /> 99,1<br /> <br /> (Y: Tỷ lệ diện t ch pic cefaclor/cefadroxil; X: Nồng độ cefaclor trong mẫu).<br /> ồ<br /> <br /> ừ<br /> <br /> ồ<br /> <br /> ệ<br /> <br /> ệ<br /> <br /> I<br /> <br /> ệ<br /> <br /> é<br /> <br /> (n m trong gi i h<br /> é<br /> <br /> -<br /> <br /> ồ<br /> ừ<br /> <br /> - 7,21%.<br /> <br /> ờ<br /> <br /> * Tỷ lệ thu hồi:<br /> <br /> é<br /> nhấ<br /> <br /> -<br /> <br /> i v i nồ<br /> ồ<br /> <br /> -<br /> <br /> thấp<br /> i).<br /> <br /> * Độ đ ng, độ ch nh x c trong ngày và<br /> h c ngày:<br /> Ti<br /> 3 m c nồ<br /> Q<br /> ồ<br /> <br /> ồ<br /> <br /> ệ<br /> <br /> -<br /> <br /> HQ<br /> ấ<br /> ặ<br /> ử<br /> ã<br /> <br /> Q<br /> <br /> Q<br /> ậ<br /> <br /> ọ<br /> <br /> K<br /> <br /> ù<br /> <br /> ấ<br /> <br /> nh t lệ thu hồi c a chất chu<br /> n i chu n b<br /> ệ<br /> c<br /> i chu n từ m u huy t<br /> ê<br /> v i diệ<br /> u pha<br /> ù<br /> ồ<br /> chất chu n<br /> hoặc n i chu<br /> K<br /> ê<br /> ấ<br /> ệ<br /> ồ<br /> cefaclor<br /> =<br /> ệ<br /> ồ<br /> ặ<br /> RSD = 0,5% (< 5%).<br /> * Độ ổn đ nh:<br /> Đ ổ<br /> <br /> - 101,90%<br /> <br /> Đ ổ<br /> <br /> ờ<br /> <br /> 4<br /> <br /> TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2013<br /> <br /> ng 3: Đ ổ<br /> <br /> ờ<br /> <br /> .<br /> KẾT QUẢ ĐỊNH LƯỢNG<br /> <br /> GIAI ĐOẠN<br /> <br /> STT<br /> <br /> Chu n g<br /> <br /> N i chu n g<br /> <br /> Nồ<br /> B o qu n l nh<br /> <br /> o<br /> <br /> Sau 6 giờ/25 C<br /> <br /> ê<br /> <br /> Nồ<br /> <br /> Th<br /> <br /> ê<br /> <br /> 1<br /> <br /> 930,95<br /> <br /> X=<br /> <br /> 920,05<br /> <br /> 1002,47<br /> <br /> X=<br /> <br /> 1003,17<br /> <br /> 2<br /> <br /> 920,86<br /> <br /> SD =<br /> <br /> 23,71<br /> <br /> 1022,46<br /> <br /> SD =<br /> <br /> 14,88<br /> <br /> 3<br /> <br /> 941,56<br /> <br /> 1001,57<br /> <br /> 4<br /> <br /> 886,82<br /> <br /> 986,18<br /> <br /> 1<br /> <br /> 942,25<br /> <br /> X=<br /> <br /> 911,08<br /> <br /> 989,77<br /> <br /> X=<br /> <br /> 1000,85<br /> <br /> 2<br /> <br /> 902,98<br /> <br /> SD =<br /> <br /> 20,98<br /> <br /> 990,80<br /> <br /> SD =<br /> <br /> 12,29<br /> <br /> 3<br /> <br /> 902,54<br /> <br /> p=<br /> <br /> 0,59<br /> <br /> 1013,13<br /> <br /> p=<br /> <br /> 0,82<br /> <br /> 4<br /> <br /> 896,56<br /> <br /> G<br /> <br /> ì<br /> <br /> nồ<br /> o qu n l<br /> d ch chu n g<br /> ờ.<br /> Đ ổ<br /> <br /> Th<br /> <br /> 1009,70<br /> <br /> a dung d ch chu n g<br /> ô<br /> ĩ<br /> ch n i chu n g c b n v ng<br /> <br /> i chu n g<br /> ê<br /> ><br /> u kiện nhiệ<br /> <br /> nhiệ<br /> ậy, dung<br /> ng trong<br /> <br /> nh thờ<br /> <br /> ng 4: Đ ổ<br /> <br /> .<br /> (n = 4)<br /> <br /> Chu n g<br /> u<br /> <br /> N i chu n g<br /> <br /> X  SD<br /> <br /> 920,05  23,71<br /> <br /> X  SD<br /> <br /> 1.003,17  0.47<br /> <br /> X  SD<br /> <br /> 970,12  38,48<br /> <br /> X  SD<br /> <br /> 1.027,94  17,16<br /> <br /> p0 - 3<br /> <br /> 0,069<br /> <br /> p0 - 3<br /> <br /> 0,072<br /> <br /> X  SD<br /> <br /> 932,89  38,75<br /> <br /> X  SD<br /> <br /> 1.017,09  9,27<br /> <br /> p0 - 5<br /> <br /> 0,316<br /> <br /> p0 - 5<br /> <br /> 0,163<br /> <br /> * Độ ổn đ nh của mẫu huy t t ơng:<br /> -Đ ổ<br /> nh sau ba chu kỳ ô - ã ô<br /> ng 5: K t qu<br /> ê<br /> ổ<br /> nh c a m u sau 3 chu kỳ ô<br /> <br /> -ã ô<br /> <br /> M u LQC<br /> Nồ<br /> u)<br /> <br /> Th<br /> <br /> M u HQC<br /> ê<br /> <br /> Nồ<br /> <br /> Th<br /> <br /> ê<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1,33<br /> <br /> X=<br /> <br /> 1,37<br /> <br /> 77,99<br /> <br /> X=<br /> <br /> 79,68<br /> <br /> 2<br /> <br /> 1,39<br /> <br /> SD =<br /> <br /> 0,03<br /> <br /> 78,80<br /> <br /> SD =<br /> <br /> 1,52<br /> <br /> 3<br /> <br /> 1,37<br /> <br /> 80,79<br /> <br /> 4<br /> <br /> 1,38<br /> <br /> 81,12<br /> <br /> 16<br /> <br />