intTypePromotion=1
zunia.vn Tuyển sinh 2024 dành cho Gen-Z zunia.vn zunia.vn
ADSENSE
 » 
 » 

Giáo trình hình thành ứng dụng khả năng cảm thụ truyền nhận kích thích thần kinh thực vật p3

Chia sẻ: Sfdsg Uikulo | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:10

Thêm vào BST
Báo xấu
76
lượt xem 3
download
 
  Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Tham khảo tài liệu 'giáo trình hình thành ứng dụng khả năng cảm thụ truyền nhận kích thích thần kinh thực vật p3', khoa học tự nhiên, nông - lâm phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Giáo trình hình thành ứng dụng khả năng cảm thụ truyền nhận kích thích thần kinh thực vật p3

  1. h a n g e Vi h a n g e Vi XC XC e e F- F- w w PD PD er er ! ! W W O O N N y y bu bu to to k k lic lic C C w w m m w w w w o o .c .c .d o .d o c u -tr a c k c u -tr a c k Trong thú y, thư ng ph i ñ nh lư ng protein trong huy t thanh và tính các ti u ph n c a nó b ng phương pháp ñi n di huy t thanh trên gi y ho c ñi n di trên phi n Axetatcellulo. a. ð nh lư ng protein t ng s trong huy t thanh Có nhi u phương pháp ñ nh lư ng: - ð nh lư ng protein huy t thanh b ng phương pháp cân theo Fleury Nguyên t c: Làm ñông vón protein b ng alcol cao pH thích h p và nhi t ñ sôi. R a t a b ng nư c sôi, ñ tráng b ng alcol, ete, s y khô 1000C r i cân. - ð nh lư ng protein huy t thanh b ng ph n ng Biure Nguyên t c: Cho tác d ng v i sunfat ñ ng và NaoH, protein (có liên k t peptit) t o thành ph c ch t có màu h ng Khúc x k tím. So v i bi u ñ màu ñ tính lư ng protein. - ð nh lư ng protein b ng phương pháp Lâu Ri Nguyên t c: Cơ s c a vi c ñ nh lư ng là kh năng c a nh ng d n xu t ñ ng c a protein có th kh thu c th Folin t o thành nh ng s n ph m có màu. So v i bi u ñ m u ñ tính lư ng protein trong dung d ch. - ð nh lư ng protein huy t thanh b ng khúc x k . Nguyên t c: tia sáng qua môi trư ng d ch th có ñ ñ m nào ñó ñ u b b gãy m t góc ñ nh t ñ nh. Môi trư ng càng ñ m, góc ñ b gãy càng l n. D a vào ñ b gãy ñó (ñ khúc x ) ñ tính ñ ñ m cu môi trư ng ð khúc x c a các d ch th trong cơ th (huy t thanh, d ch th m xu t, d ch th m l u trong các xoang t ch c) v cơ b n ph thu c hàm lương protein trong ñó, và vì v y có th căn c h th ng khúc x c a huy t thanh ñ tính hàm lư ng protein huy t thanh. Ngư i ta dùng khá r ng rãi khúc x k trong vi c ñ nh lư ng protein và các thành ph n c a nó trong huy t thanh. * ð nh lư ng protein huy t thanh b ng khúc x k . ði u ch nh khúc x k : Trư c khi ñ nh lư ng protein huy t thanh ph i cho vài gi t nư c c t lên máy, v ch ño, ñư ng ranh gi i hai mi n t i sáng ph i trùng v i s 0 phía % ( %, ño ñư ng) và 1.3330 phía ghi ch s khúc x và n u v ch ño và ñư ng ranh gi i hai mi n t i sáng không ñúng v i yêu c u trên, thì ph i ñi u ch nh l i máy cho ñúng. Cách ñ nh lư ng Huy t thanh ph i tươi và trong su t. Cho 2 gi t huy t thanh lên máy, ñ y n p lăng kính và ñi u khi n n p sao cho v ch ño và ñư ng ranh gi i 2 mi n t i sáng trùng nhau. ð c s trên máy và tra b ng ñ tính k t qu . Ví d : H s khúc x trên máy là 1,34910 thì hàm lư ng protein tương ng trên b ng là 7,63% ( cũng chính là 7,63 g%). * ð nh lư ng albumin và globulin trong huy t thanh Hoá ch t Dung d ch amôn sunfat bão hoà: 7,54 g ( NH4)2SO4 hoà tan trong 100 ml nư c c t. Axit axetic 0,04 N: 2,28 ml axit axetic b c khói hoà v i nư c c t ñ n 1 lít. Ti n hành L y 4 ng nghi m ñánh s th t 1,2,3 và 4 r i cho vào giá ng nghi m. Cho vào ng 3 và 4 m i ng 1 ml nư c c t; ng 2 và ng 4, m i ng 1 ml ( NH4)2SO4 bão hoà ñ l ng globulin. Cho vào ng 1 và ng 3, m i ng 1 ml axit axetic 0,04 N; ng 1 và ng 2 m i ng . Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Giáo trình Giáo trình Ch n ñoán b nh thú …………………….126
  2. h a n g e Vi h a n g e Vi XC XC e e F- F- w w PD PD er er ! ! W W O O N N y y bu bu to to k k lic lic C C w w m m w w w w o o .c .c .d o .d o c u -tr a c k c u -tr a c k 1ml huy t thanh. ð y kín các ng nghi m b ng nút cao su, r i l c ñ u ( ít nh t 20 l n). L y ng 1 ñem ñun cách thu 3 phút. ð ngu i, tách m ng protein ñông vón ra và l y ph n nư c trong cho ra m t ng ly tâm, ly tâm 5 phút ñ cho th t trong su t. Ly tâm ng th 2 trong 30 phút. L n lư t ño trên máy khúc x k dung d ch trong su t c a ng th 1, ng 2 và các ng 3 và 4 ñư c h s khúc x . ng th nh t ño ñư c h s khúc x c a dung d ch không có protein, vì protein ñã b l ng; ng th 2 – h s khúc x c a albumin, vì globulin ñã l ng. ðo t t c các ng trên cũng ñư c ti n hành tương t như ño huy t thanh trên máy khúc x k và ghi l i s trên khúc x k c a t ng ng. Cách tính: S ño ñư c ng 1,3,4 là ch s khúc x c a nh ng dung d ch không có protein. L y h s khúc x c a ng 2 tr ñi (-) h s khúc x ng 4, r i nhân 2 ( x) s ñư c k t qu h s khúc x c a albumin và nh ng ch t ngoài protein (I). L y h s khúc x c a ng 1 tr ñi h s c a ng 3, r i nhân 2 s ñư c h s khúc x nh ng ch t ngoài protein (II) s ñư c h s khúc x cu albumin. ð tính lư ng ph n trăm albumin trong huy t thanh thì l y h s khúc x c a albumin trên chia cho 0,00177 ( 0,00177 là h s khúc x c a dung d ch albumin 1%). Tính hàm lư ng globulin b ng cách l y h s khúc x c a huy t thanh tr ñi t ng s c a h s khúc x c a nư c c t, h s khúc x c a ng không protein và ng albumin ( ng 1), k t qu thu ñư c chia cho 0,00229 ( là h s khúc x c a dung d ch globulin 1%) s ñư c s gam ph n trăm ( g%) glubulin trong huy t thanh. Ví d : 1. h s khúc x c a nư c 1,3330 2. h s khúc x dung d ch không protein ( ng 1) 1,3345 3. h s khúc x ng albumin ( ng 2) 1,3769 4. h s khúc x c a axit axetic 0,04 ( ng 3) 1,3333 5. h s khúc x c a ( NH4)2SO4 bão hoà ( ng 4) 1,3718 6. h s khúc x c a huy t thanh 1,34873 Thì: 1. 1,3769 – 1,3718 = 0,0057 x 2 = 0,0102 2. 1,3345 – 1,3333 = 0,0012 x 2 = 0,0024 3. 0,0102 – 0,0024 = 0,0078 4. 0,0078 : 0,00177 = 4,50% 5. 0,0102 + 1,3330 = 1,3432 6. 1,34873 – 1,3432 = 0,00553 7. 0,0053 : 0,00229 = 2,41% ( globulin) 8. 4,50 : 0,00229 = 1,8 ( A/G) ý nghĩa ch n ñoán - Protein huy t thanh th p trong các trư ng h p sau: + Do h p th protein vào cơ th thi u: dinh dư ng kém, ñói lâu ngày, b nh m n tính ñư ng tiêu hoá; cơ th c n nhi u protein mà cung c p không ñ như có thai, ti t s a…. + Ch c năng t o protein r i lo n: b nh gan làm gi m quá trình t o albumin. Các trư ng h p thi u máu, trúng ñ c, các b nh c p tính và mãn tính, các quá trình viêm. + Cơ th m t protein: ñái ñư ng, cư ng năng giáp tr ng, s t cao m n tính, ngo i thương, b nh th n,…. + Các trư ng h p ch y máu n ng, b ng di n r ng, tích nư c xoang ng c, xoang b ng. - Protein huy t thanh tăng Do huy t tương cô ñ c: a ch y, nôn m a, ch y máu c p tính,… .Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Giáo trình Giáo trình Ch n ñoán b nh thú …………………….127
  3. h a n g e Vi h a n g e Vi XC XC e e F- F- w w PD PD er er ! ! W W O O N N y y bu bu to to k k lic lic C C w w m m w w w w o o .c .c .d o .d o c u -tr a c k c u -tr a c k b. ði n di protein huy t thanh Protein huy t thanh bao g m Albumin và Globulin. Dùng phương pháp ñi n di ngư i ta chia các Protein huy t thanh thành 4 phân su t l n: Albumin, α, β và γ - globulin. Do ñi n tích, tính ch t lý hoá khác nhau, N u ñ t protein trong m t t trư ng dòng ñi n m t chi u, chúng s di chuy n, các thành ph n nh ñư c tách ra và có th ñ nh lư ng ñư c t ng ti u ph n m t. Có nhi u phương pháp ñi n di ñưa vào các ch t làm giá khác nhau: ñi n di trên gi y, ñi n di trên th ch, ñi n di trên màng cellulose axet. Trong lâm sàng hi n nay thư ng dùng ñi n di trên màng cellulose axet. * K thu t ñi n di huy t thanh trên gi y: + Gi y ñi n di. + Dung d ch ñ m g m: 1. dung d ch Veronal pH: 8,6 Natri Veronal 15,45 g Axit verronal 2,76 g Nư c c t ñ n 1000 ml N u không ñ t pH = 8,6 thì ph i ñi u ch nh. 2. Dung d ch borat Natri borat : 8,8g Axit boric: 4,65g Nư c c t ñ n 1000ml; pH = 8,6. 3. Dung d ch nhu m: + Bromofenol bleu 1% Bromofenol bleu 1,0g Dichlo th y ngân ( HgCl2) bão hòa trong c n 95 o C 100ml + Bromofenol bleu 0,05 g HgCl2 1,00g Axit axetic glacial 20,00ml Nư c c t v a ñ 100,00ml Cho ít nư c hòa tan HgCl2, r i cho Bromofenol bleu hòa tan, sau ñó cho axit axetic và sau cùng cho nư c ñ n 100ml. 4. Dung d ch r a: 0,5% axit axetic 5. Dung d ch chi t màu: NaOH 0,01N Thao tác: C t gi y ñi n di r ng 2 – 3 cm, dài ñ n ñ u ch u ñ ng dung d ch ñ m; dùng bút chì g ch m t ñư ng kho ng gi a c c âm và c c dương, hơi d ch m t ít v phía c c âm. Nhúng gi y ñi n di và dung d ch ñ m r i ñ t lên gi y l c ñ th m khô. Dùng ng hút b ch c u hút 0,01 – 0,02 ml huy t thanh, v ch nh lên gi y theo ñư ng bút chì ñã v ch s n sao cho huy t thanh làm thành m t ñư ng g n. Cho nh nhàng 2 ñ u gi y vào ch u dung d ch ñ m, ñ y n p l i, ñ 30 phút. ðóng m ch ñi n và ñi u hc nh ñi n th kho ng 8 – 10 Volt cho 1 cm chi u dài và 0,1 mA cho 1 cm chi u r ng băng gi y. Cho máy ch y liên t c trong 4 – 5 gi . T t máy, l y nh ng băng gi y ñem hong khô trong t s y 100 o C trong 10 phút; có th ñ khô trong không khí. Nhu m trong dung d ch bromofenol bleu 1% trong 5 phút ho c trong các dung d ch. C t băng gi y theo t ng thành ph n prrotein r i cho t ng ph n vào dung d ch chi t màu NaOH 0,01N, m i ng 5 ml cho m i thành ph n. Ngâm trong 30 phút cho màu thôi h t. . Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Giáo trình Giáo trình Ch n ñoán b nh thú …………………….128
  4. h a n g e Vi h a n g e Vi XC XC e e F- F- w w PD PD er er ! ! W W O O N N y y bu bu to to k k lic lic C C w w m m w w w w o o .c .c .d o .d o c u -tr a c k c u -tr a c k Sau ñó, so màu v i kính l c màu l c ho c λ = 525 – 595 µm. ng tr ng b ng NaOH 0,01 N. T k t qu so màu tính t l ph n trăm các ti u ph n. Các ti u ph n protein huy t thanh + Anbumin (Albumin): ñư c t ng h p nhu mô gan t ác axit amin. Anbumin có vai trò r t quan tr ng trong vi c gi áp l c th m th u c a máu, như “ch t chuy n v n” các axit béo (lipoprotein), s t (transfer), iot (iodoproteic), các hormon (hormon oestrogen trong các lipoprotein). Các carotenoit (trong lipoprotein), các bilirubin (d ng bilirubinalbumin), calci, axit m t, axit uric, axit béo, các vitamin C, K, P,…và nhi u ch t khác, là các ch t l ñ i v i cơ th như các th thu c,… Trong các trư ng h p b nh, không g p Anbumin tăng, thư ng gi nguyên ho c gi m. Anbumin gi m thư ng th y trong: Suy dinh dư ng, gan t n thương; Anbumin ni u. α- globulin: di chuy n ch m sau Anbumin, g m nhi u lo i prrotein có cùng m t ñi n tích và kích thư c nh . Thư ng có 2 ti u ph n α1 và α2- globulin. + α1- globulin ph n l n do gan t o ra. Nó có nhi m v quan tr ng v n chuy n các vitamin hòa tan trong lipit, ñ ng (Cu), các hormon,… Hypertensinogen cũng trong thành ph n c a α1- globulin. * Tăng α- globulin (thư ng tăng α2) g n li n v i glucoprotein tăng, thư ng ñi kèm theo thay ñ i b ch c u. Các trư ng h p viêm gan do nhi m trùng α- globulin không tăng. * α- globulin gi m trong thi u máu do dung huy t. β- globulin: không ñ ng nh t, di chuy n ch m hơn α- globulin. Các β- globulin ch a nhi u lipit và các ph c h p lipoprotein ñư c t o ra gan. β- globulin tăng trong các b nh gan, hư th n, viêm, phù, ñái ñư ng, các b nh nhi m trùng. γ- globulin: bình thư ng không ch a lipit, không quá 1% h p ch t gluxit g m ph n l n các kháng th và các protein khác có tính ch t kháng th . Nên γ- globulin không thu n nh t. γ- globulin tăng trong t n thương gan mãn tính, các b nh tim m ch. Trong các ch ng viêm, γ- globulin tăng cùng s thay ñ i b ch c u. γ- globulin gi m trong hư th n. N u ñi n di huy t tương còn có ti u ph n fibrrinogen. Fibrrinogen ñư c t o ra ch y u gan; còn có th do t y xương và m t s cơ quan khác. Fibrrinogen có tác d ng làm ñông máu. 6. ð m ngoài protit ð m ngoài protein thư ng chi m lư ng nh kho ng 1 – 2 % lư ng ñ m có trong máu ñ ng v t, còn 98 – 99 % là ñ m trong nh ng ch t protit. ð m ngoài protit g m các ch t: urê, axit uric, creatinin, creatin, amoniac và ñ m trong các axitamin. Urê K t qu thoái bi n các axit amin trong cơ th sinh ra amoniac ( NH3) và m t con ñư ng quan tr ng nh t ñ ch ng ñ c amoniac là t o thành ure gan ( trên 50 % N nư c ti u là c a ure) và ure ñư c th n th i ra ngoài. R i lo n chuy n hóa amoniac ure có liên quan ñ n ch ñ ăn u ng, s thoái hóa các axit amin, tình tr ng gan và th n Tăng ure huy t: B nh th n, nh t là khi viêm th n m n tính. Creatinin và creatin Creatin là ch t do gan và t y t o ra t 3 axit amin : arginin, glyxin. Methionin và ch y u cơ dư i d ng Creatin phosphat OH .Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Giáo trình Giáo trình Ch n ñoán b nh thú …………………….129
  5. h a n g e Vi h a n g e Vi XC XC e e F- F- w w PD PD er er ! ! W W O O N N y y bu bu to to k k lic lic C C w w m m w w w w o o .c .c .d o .d o c u -tr a c k c u -tr a c k NH2 C OH HN = C N CH2 CH3 Creatin Creatinin là s n ph m th y phân Creatin phosphat, có máu và ñào th i ra ngoài theo nư c ti u. Creatinin tăng: các b nh th n và bí ñái. Cư ng năg giáp tr ng, viêm ho i t cơ. Amoniac Amoniac do chuy n hóa proteit gan và t ru t do lên men c a vi khu n. Amoniac tăng trong máu: gan t n thương không chuy n ñư c thành ure * ð nh lư ng ñ m ngoài protit Nguyên t c: ð m trong nư c máu s b dung d ch tiêu hóa toan m ch chuy n thành Amoniac sulfat, r i tác d ng v i Natri hydrõyt thành Amoni hydrroxit. Sau ñó cho tác d ng v i dung d ch Nessler ñ hi n màu. Cũng x lý như v y v i m t dung d ch bi t n ng ñ ñ m trư c, r i suy ra n ng ñ ñ m trong máu. Các ph n ng tóm t t như sau: Ch t có ch a ñ m + H2SO4 (NH4)2SO4 (NH4)2SO4 + 2 NaOH 2 NH4OH + NaSO4 Amoni Hydroxyt NH4OH tác d ng v i dung d ch Nessler ( HgI2 . 2KI )s thành dimercuric amoni iodide ( NH2.Hg2I3) 2 NH4OH NH3 + 2 H2O 2 ( HgI2 . 2KI) + 2 NH3 2 ( NH2.Hg2I3) + 4 KI 2 ( NH3.HgI2) NH2.Hg2I3 + NH4I Thu c th Dung d ch Nessler (theo Kock và Mc Meekin c i ti n) L y 22,5 g I2 cho vào 20 ml nư c ñã có s n 30 KI, l c cho tan h t r i cho thêm 30 g th y ngân, l c cho tan. Trong quá trình l c dung d ch s nóng, nên ngâm vào nư c cho ngu i b t. Cho ñ n lúc t ng nư c trong ph n trên h t màu vàng iod. G n L y ph n nư c trong trên r i cho thêm vào 1 ml amidon 1%. Chú ý xem có màu xu t hi n không. N u không có màu xanh xu t hi n ch ng t trong dung d ch còn h p ch t th y ngân 2 ( Hg ++). Thêm dung d ch iod ( n ng ñ như trên ) vào dung d ch nư c trong cho ñ n lúc xu t hi n màu xanh nh t thì thôi. ðưa dung d ch trên pha v i nư c c t t i 200 ml, tr n ñ u. Sau cùng, cho thêm vào 975 ml NaOH 10 % ( n ng ñ h t s c chu n ). Tr n ñ u. B o qu n trong chai nút mài ñ dùng lâu dài. Cách pha 2: Cho 15,0 g KI vào trong 20 ml nư c c t; thêm 20 g iod th y ngân, ngoáy cho tan, r i pha loãng b ng nư c c t ñ n 100 ml, l c, r i pha loãng ñ n 200 ml. Thêm vào 200 ml nư c c t và 993 ml NaOh 10% ( n ng ñ h t s c chu n). ð yên cho l ng c n, dùng ph n nư c trong trên. . Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Giáo trình Giáo trình Ch n ñoán b nh thú …………………….130
  6. h a n g e Vi h a n g e Vi XC XC e e F- F- w w PD PD er er ! ! W W O O N N y y bu bu to to k k lic lic C C w w m m w w w w o o .c .c .d o .d o c u -tr a c k c u -tr a c k Dung d ch Nessler ph i có ñ ki m nh t ñ nh. Thư ng ñi u ch nh như sau : 11 – 11,5 ml dung d ch Nessler c n 20 ml HCl 1N ñ trung hòa ( ch th màu phenolphtalein). N u ñ nh lư ng N ngoài protit thì 1 ml H2SO4 50% c n 9 – 9,3 ml dung d ch Nessler ñ trung hòa. Dung d ch ñ m chu n( 1 ml có 0,03 mgN). S y amoni sulfat (A.R) 1100C trong 30 phút r i ñ vào bình hút m. Cân th t chính xác 0,1415 g amoni sulfat cho vào bình 1 lít, r i thêm vào 1 ml HCl ñ m d c ñ c ch vi khu n phát tri n, r i cho thêm nư c c t ñ n 1000ml. Dung d ch tiêu hóa: Axit phosphoric ( H3PO4) 300ml ð ng sulfat 5% ( CuSO4) 50ml Tr n ñ u và cho thêm H2SO4 ñ c 100 ml. ð yên 1 tu n, L y ph n nư c trong trên, pha g p ñôi b ng nư c c t. V Axit sulfuric 50%   V L y 10 ph n Axit sulfuric 50% và 1 ph n dung d ch trên tr n ñ u ñư c dung d ch tiêu hóa. 1 ml dung d ch này ph i c n 9 – 9,3 ml dung d ch Nesler ñ trung hòa, N u không ph i ñi u hc nh n ng ñ toan c a nó. Các bư c thao tác Tr n ñ u và ñun ng th . Có th cho vào vài h t bi th y tinh. ðun cho ñ n lúc trong ng ñ y khói, ñáy ng t màu ñen sang trong su t. ð cho ngu i. Tr n ñ u, so màu b ng kính l c màu xanh ho c λ = 440 µm Tính 100 E th /E chu n x 0,03 x = mg% Nitơ ngoài protit 0,1 Chú ý: 1. Sau khi cho Nessler vào, dung d ch ñ c có th do: + ð ki m toan c a Nessler không chu n + ðun chưa ñ , dư i ng chưa trong su t. + ð th i gian quá lâu m i so màu. + N ng ñ ñ m ngoài protit quá cao. Nư c c t dùng ñ pha thu c th ph i hoàn toàn không có Nitơ. Cách ch nư c c t không có Nitơ: B d chưng nư c c t hoàn toàn b ng th y tinh. Cho 2000 ml nư c c t, 0,25 ml H2S04 4 N và 2ml thu c tím 1% ( KMnO4) ñem chưng, b ñi m t ph n nư c ñ u và ph n cu i. Sau khi cho Nessler, N u không hi n màu, có th do dung d ch tiêu hóa quá nhi u ho c chưa tiêu hóa xong trong lúc ñun. * ð nh lư ng urê trong máu Urê trong máu sau khi cho tác d ng v i men ureza s chuy n thành amoni cacbonat H2N – CO – NH2 + 2 H2O ( NH4) 2 CO3 ( NH4) 2 CO3 + 2 NaOH Na2CO3 + 2 NH4OH R i cho tác d ng v i dung d ch Nessler s hi n màu. Cũng x lý như v y v i dung d ch chu n ñ tính lư ng urê c n ñ nh lư ng. Thu c th : 1. Dung d ch ñ m chu n (1ml có 0,05 mg N; pha như ph n ñ nh lư ng ñ m ngoài protit) . rư T ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Giáo trình Giáo trình Ch n ñoán b nh thú …………………….131
  7. h a n g e Vi h a n g e Vi XC XC e e F- F- w w PD PD er er ! ! W W O O N N y y bu bu to to k k lic lic C C w w m m w w w w o o .c .c .d o .d o c u -tr a c k c u -tr a c k 2. Dung d ch phosphat axit di natri ( Na2HPO4): cân 0,89 g phosphat axit di Natri ( Na2HPO4.12 H2O) C.P ) pha v i nư c c t thành 100 ml. 3. Nư c rút glyxerin ureza: L y 5 g b t ñ u tương, thêm vào 100 ml glyxerin, l c 15 phút, ñ trong t m 24 gi . L y ph n nư c trong trên ñ dùng và b o qu n trong t l nh 2 -3 tháng. 4. Natri tungstat 10%; 5. H2SO4 2/3 N; 6. Dung d ch Nessler Thao tác: Dùng ng nghi m nh (15 x 100mm) cho vào 0,5 ml máu tươI toàn ph n, 0,5 ml nư c c t, 0,25 ml phosphat axit di natri và 0,25 ml dung d ch ureaza. Sau khi tr n ñ u ngâm trong c c nư c 37 oC trong 20 phút. L y ra, thêm vào 1,5 ml nư c c t, 1ml Natri tungstat 10% và 1ml H2SO4 2/3 N. Tr n ñ u r i ñem li tâm ho c l c qua gi y, l y ph n nư c trong trên ñưa ñi xét nghi m theo th t các bư c sau: Các ng (ml) Các bư c ng tr ng ng chu n ng th Nư c máu l c 0 0 2,0 Dung d ch chu n ( 0,03 mg N/ml) 0 1,0 0 Nư c c t 8,0 7,0 6,0 Dung d ch Nessler 2,0 2,0 2,0 Tr n ñ u và ñưa so màu ngay. Dùng kính l c màu xanh ho c λ = 440 µm E E thu Tính: Tính: mg% ñ m ure = thu x 0,03 = x 15 E chuan E chuan Chú ý - pH môi trư ng ureza t t nh t là g n trung tính. N u không trung tính thì dùng dung d ch phosphat di Natri ñ ñi u ch nh. - N u dùng b t ureza tinh khi t có th cho tr c ti p vào máu: 0,5 ml máu cho 1 mg ureza. - Trong dung d ch Nessler có thu ngân và các ion kim lo i n ng khác, có th c ch tác d ng c a ureza. Vì v y mà các ng dùng ñ ki m nghi m ph i h t s c s ch. - Sau khi cho dung d ch Nessler vào, N u l v n ñ c r t có th do nhi t ñ trong phòng quá cao gây nên. Có th kh c ph c b ng cách trong bư c hi n màu ngâm các ng vào c c nư c l nh, cho dung d ch Nessler vào hi n màu và so màu ngay. mg% ñ m urê x 2,143 = mg% ure 60 (Vì phân t lư ng ure = 60, trong ñó có 2 nguyên t Nitơ, t ñó ta có: = 2,143 ) 28 - Nư c c t dùng ph i không có Nitơ 7. Cholesterol trong máu Cholesterol trong máu, trong các t ch c cơ, th n kinh, nh t là trong não. Cholesterol t do, Cholesterit ( este) trong th c ăn, qua tiêu hoá ru t non, trong các gi t m h p thu vào máu. Ngu n n i sinh ñư c t ng h p ch y u trong các t bào n n c a gan t các axetyl CoA. Ngoài gan, Cholesterol còn ñư c t ng h p m t s t ch c khác. Gan có vai trò to l n trong vi c ñi u ch nh n ng ñ Cholesterol trong máu. .Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Giáo trình Giáo trình Ch n ñoán b nh thú …………………….132
  8. h a n g e Vi h a n g e Vi XC XC e e F- F- w w PD PD er er ! ! W W O O N N y y bu bu to to k k lic lic C C w w m m w w w w o o .c .c .d o .d o c u -tr a c k c u -tr a c k gan, x y ra quá trình este hoá Cholesterol t o thành Cholesterit (Cholesterol este). Là ngu n Cholesterit ch y u c a huy t tương. Khi t bào gan b t n thương, Cholesterit huy t Cholesterit gi m. T l ñó càng gi m tương gi m, và do ñó, t l : Cholesterol toan phan B nh càng tr m tr ng. Thư ng g p trong các b nh viêm gan nhi m trùng, nhi m ñ c n ng, xơ gan, hoàng ñ n kéo dài…… Riêng Cholesterit ngo i sinh trong các gi t m ñ n gan thì l i thu phân nh men Cholesterol esteraza gan. Sau khi thu phân l i l i este hoá ñ tham gia vào lipoprotein huy t tương. Gan ñóng vai trò ñ c b êt quan tr ng trong các trư ng h p sau: - T o ra 7 – dehydrocholesterol (ti n vitamin D3) ñưa ñ n da, dư i tác d ng c a tia c c tím s bi n thành Vitamin D3 ( cholecanxiferol). - Oxy hoá Cholesterol t o thành các axit m t bài ti t ra ru t và s tái h p thu. Cholesterol bài ti t theo các axit m t ñ n ru t, tr n v i các Cholesterol trong th c ăn. - M t ph n Cholesterol trong ru t không tái h p thu h t s theo phân, có th b oxy b i vi khu n ñư ng ru t thành coprostanol. Trong phân luôn có ít Cholesterol và coprostanol. * ð nh lư ng Cholesterol t ng s b ng thu c th Feric chlorua Nguyên t c: Nư c máu ñã lo i protein trong dung d ch nh axit Feric chlorua, có Cholesterol hoà tan trong ñó. Cholesterol trong nư c máu có tác d ng v i axit sulfuric ñ c. Và Fe +++ s thành m t d n xu t màu ñ tím n ñ nh. Cũng x lý như v y v i dung d ch Cholesterol chu n r i suy ra n ng ñ Cholesterol trong huy t thanh. Thu c th : 1. Axit axetic ñ c (A.R) 2. Dung d ch Feric chlorua g c: Cân 840 mg Feric chlorua ( FeCl3.6 H2O) cho vào bình 100ml. Thêm axit axetic ñ c vào, ngoáy cho tan r i cho ti p ñ n 100ml. 3. Dung d ch Feric chlorua dùng: Tr n m t ph n dung d ch Feric chlorua g c r i cho thêm 9 ph n axit axetic ñ c (pha khi dùng). 4. Dung d ch Feric chlorua tr ng: L y 8,5 ml dung d ch Feric chlorua g c r i cho thêm axit axetic ñ c ñ n 100ml. 5. Dung d ch mu i Natri chlorua 0,85%. 6. Dung d ch Cholesterol chu n g c (1ml có 1mg). Cân 100 mg Cholesterol ( A.R.) cho vào bình ñ nh m c 100 ml, dùng axit axetic ñ c hoà tan và pha ñ n kh c 100. 7. Dung d ch Cholesterol chu n dùng (1ml có 0,1 mg). L y 10 ml Cholesterol chu n g c cho vào bình 100ml, thêm 98,5 ml dung d ch Feric chlorua g c, r i thêm axit axetic ñ c ñ n 100 ml ( pha khi dùng). 8. Axit sulfuric ñ c ( A.R). Thao tác:Thao tác: Cho vào ng li tâm 0,05 ml huy t thanh (ho c huy t tương). Thêm 4 ml dung d ch Feric chlorua dùng; v a cho v a l c, ngoáy cho ñ u và ñ yên 10 phút. Ly tâm 2 phút. L y 3ml nư c trong trên cho vào ng nghi m mi ng r ng làm ng th (không ñ nh lư ng). m t ng nghi m khác, cho vào 0,05ml nư c mu i sinh lý, 1ml dung d ch cholesterol chu n (1ml có 0,1 mg) và 3ml dung d ch Feric chlorua tr ng. Hút l y 3ml ñ cho vào ng chu n. Các bư c ti p theo: . Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Giáo trình Giáo trình Ch n ñoán b nh thú …………………….133
  9. h a n g e Vi h a n g e Vi XC XC e e F- F- w w PD PD er er ! ! W W O O N N y y bu bu to to k k lic lic C C w w m m w w w w o o .c .c .d o .d o c u -tr a c k c u -tr a c k Các bư c Các ng, ml ng tr ng ng chu n ng th Nư c máu (4) 0 0 3,0 Dung d ch cholesterol chu n ñã pha (5) - 3,0 0 Dung d ch Feric chlorua tr ng 3,0 0 0 Axit Sulfuric 2,0 2,0 2,0 L c k ngay. ðưa so màu kính l c màu l c ho c λ = 500 µm E Tính: mg% cholesterol = thu x 200 E chuan ð nh lư ng cholesterit (cholesterol este) Nư c máu ñã lo i protit nh h n h p c n axeton, cho digitonin vào s k t h p v i hydroxyl c a cholesterol t do ñ hình thành ph c ch t cholesterol digitonin n ñ nh l ng xu ng ñáy và ñư c tách ra. Sau khi r a s ch ph c ch t k t a s cho tác d ng vưói feric chlorua và ãit sulfuric ñ hi n màu. tính lư ng cholesterol t do. Lư ng cholesterol t ng s tr lư ng cholesterol t do b ng lư ng cholesterit. Thu c th : 1. C n axeton: c n etylic và axeton lư ng b ng nhau. 2. Digitonin 1%: 1g digitonin pha v i c n etylic 50% ñ n 100ml. 3. Cácthu c th khác gi ng ph n ñ nh lư ng cholesterol t ng s . Thao tác: 1. Cho 0,1ml huy t thanh vào ng ly tâm có kh c ñ . 2. Thêm vào 5ml c n axeton l c ñ u, b t kín mi ng ng, ñ im 30 phút. 3. Cho thêm c n axeton ñ toàn dung d ch ñ 5ml, l c ñ u r i ly tâm 5 phút 4. L y 2,5 ml phía trên r i cho vào ng ly tâm khác, r i ñun cách thu b c hơi còn 0,5ml. ðang lúc ng còn nóng cho 0,25ml digitonin 1%. L c ñ u và ñ yên 20 phút. 5. Ly tâm 5 phút, ñ ñI ph n nưop c trong trên. L i thêm 4ml axeton ñ r a c n ñáy k t t a r i l i ly tâm 5 phút. B ñI ph n nư c trong trên và ñ ngư c ng cho ch y h t nư c. Dùng ng này làm ng xét nghi m cholesterol t do. 6. m t ng khác làm xét nghi m cholesterol t ng s . Các bư c ti p như sau: Các bư c Các ng, ml ng cholesterol t ng s ng cholesterol t do Huy t thanh 0,05 0 Dung d ch Feric chlorua dùng 4,00 0 Dung d ch Feric chlorua tr ng 0 0,4 Dùng que thu tinh tr n ñ u, ñ yên 10 phút r i ly tâm 2 phút. L y ph n nư c trong r i theo th t m i ng Nư c trong trên 3,0 3,0 Axit sulfuric ñ c 2,0 2,0 . Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Giáo trình Giáo trình Ch n ñoán b nh thú …………………….134
  10. h a n g e Vi h a n g e Vi XC XC e e F- F- w w PD PD er er ! ! W W O O N N y y bu bu to to k k lic lic C C w w m m w w w w o o .c .c .d o .d o c u -tr a c k c u -tr a c k Tr n ñ u ngay, sau 5-10 phút so màu. ng chu n, ng tr ng,kính l c màu,công th c tính gi ng như ñ nh lư ng cholesterol t ng s . S tìm ñư c là lư ng cholesterol t do và lư ng cholesterol t ng s . ð nh lư ng cholesterol theo Incơ Nguyên t c là cholesterol trong huy t thanh k t h p v i axit axetic ñ c, anhydric axetic và axit sulfuric ñ c cho ph c h p màu xanh lá cây. Màu ph c h p ñ m nh t t l thu n v i lư ng cholesterol trong máu. Cũng x lý như v y v i m t dung d ch cholesterol bi t trư c n ng ñ ñ t ñó, qua so màu b ng quang k , suy ra lư ng cholesterol trong máu; a. Axit axetic ñ c – 1 ph n; b. Anhydric axetic – 5 ph n; c. Axit sulfuric – 1 ph n; Tr n 3 th trên v i nhau theo th t tr n hai th ñ u (a) và (b) trư c, ñ l nh 4o C, r i cho t t axit sulfuric vào. H n h p này luôn ñ trong t l nh, lúc dùng m i l y ra. Dung d ch cholesterol chu n g c: 100mg Cholesterol và chloroform v a ñúng 100ml. L y 10 ml dung d ch g c trên cho vào bình ñ nh m c, r i thêm chloroforrm ñ n 100ml. 1ml dung d ch này có 0,1mg cholesterol. Làm ñ m u: L y 5 ng nghi m khô, s ch và cho các ch t như sau Các ng nghi m Các ch t 1 2 3 4 5 S ml Cholesterol chu n (0,1 mg) 0,5 1 1,5 2 2,5 S ml Cholesterol th c t 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 S lư ng Cholesterol trong 100 ml 50 100 150 200 250 huy t thanh (mg %) Cho c 5 ng vào bình ñun cách thu cho b c hơi h t. Chú ý, chlorform r t d cháy, vì v y lúc ñun ph i h t s c c n th n. Thêm vào m i ng 2,1 ml thu c th , l c ñ u, ñun cách th y 300 C trong 20 phút và so màu ngay sau ñó. V ñ th . Xét ngh êm Dùng 2 ng nghi m khô, s ch và cho vào các ch t sau: ng xét ngh êm ng tr ng Huy t thanh tươi 0,1ml 0 Thu c th 2,0 2,1 Tr n ñ u. ðem cách thu 300 C trong 20 phút và so màu ngay sau ñó b ng quang k , cóng 0,5 cm; kính l c màu ñ . Tính hàm lư ng Cholesterol theo ñ m u. ý nghĩa ch n ñoán Cholesterol tăng gi m theo tu i, theo ch ñ ăn u ng, tăng khi có thai. - Cholesterol toàn ph n tăng: hoàng ñ n do t c m t, hư th n, xơ c ng ñ ng m ch, huy t áp cao. - Cholesterol toàn ph n gi m: Xơ gan n ng, viêm gan nhi m trùng; M t s b nh truy n nhi m n ng và kéo dài; u nang giáp tr ng, suy thư ng th n. . Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Giáo trình Giáo trình Ch n ñoán b nh thú …………………….135
ADSENSE

CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD

THÔNG TIN
TRỢ GIÚP
HỖ TRỢ KHÁCH HÀNG
Theo dõi chúng tôi

Chịu trách nhiệm nội dung:

Nguyễn Công Hà - Giám đốc Công ty TNHH TÀI LIỆU TRỰC TUYẾN VI NA

LIÊN HỆ

Địa chỉ: P402, 54A Nơ Trang Long, Phường 14, Q.Bình Thạnh, TP.HCM

Hotline: 093 303 0098

Email: support@tailieu.vn

Giấy phép Mạng Xã Hội số: 670/GP-BTTTT cấp ngày 30/11/2015 Copyright © 2022-2032 TaiLieu.VN. All rights reserved.

 

Đồng bộ tài khoản
2=>2