Kỹ thuật phát triển cây trồng chuyển gen ở Việt Nam: Phần 1

Chia sẻ: Hoa La Hoa | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:171

Thêm vào BST

Báo xấu

252
lượt xem 73
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Tài liệu Phát triển cây trồng chuyển gen ở Việt Nam của tác giả Lê Trần Bình gồm XI chương, được chia thành hai phần. Phần 1 giới thiệu đến bạn đọc nội dung từ chương 1 đến chương 6. Phần này giới thiệu bạn đọc các vấn đề như: Tổng quan tình hình nghiên cứu trong nước và ngoài nước, đối tượng và phương pháp tạo cây trồng chuyển gen, phân lập gen, hoàn thiện các qui trình chuyển gen vào cây bông vải, tạo cây hông chuyển gen kháng sâu, chuyển gen vào cây hoa cúc.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Kỹ thuật phát triển cây trồng chuyển gen ở Việt Nam: Phần 1

VIÖN KHOA HäC Vµ C¤NG NGHÖ VIÖT NAM Bé S¸CH CHUY£N KH¶O HéI §åNG BI£N TËP Chñ tÞch Héi ®ång: GS.TSKH. §Æng vò minh Phã Chñ tÞch Héi ®ång: GS.TSKH. NguyÔn Khoa S¬n pgs.tskh. NguyÔn T¸c An, pgs.ts. Lª TrÇn B×nh, pgs.tskh. NguyÔn V¨n C , gs.tskh. Vò Quang C«n, ts. Mai H , gs.vs. NguyÔn V¨n HiÖu, gs.TSKH. H Huy Kho¸i, gs.tskh. NguyÔn Xu©n Phóc, gs.ts. Bïi C«ng QuÕ, gs.tskh. TrÇn V¨n Sung, pgs.ts. Ph¹m Huy TiÕn, gs.ts. TrÇn M¹nh TuÊn, gs.tskh. NguyÔn ¸i ViÖt.
Lêi giíi thiÖu ViÖn Khoa häc v C«ng nghÖ ViÖt Nam l c¬ quan nghiªn cøu khoa häc tù nhiªn v c«ng nghÖ ®a ng nh lín nhÊt c¶ n'íc, cã thÕ m¹nh trong nghiªn cøu c¬ b¶n, nghiªn c u v ph¸t triÓn c«ng nghÖ, ®iÒu tra t i nguyªn thiªn nhiªn v m«i tr'êng ViÖt Nam. ViÖn tËp trung mét ®éi ngò c¸n bé nghiªn cøu cã tr×nh ®é cao, c¬ së vËt chÊt kü thuËt hiÖn ®¹i ®¸p øng c¸c yªu cÇu vÒ nghiªn cøu v thùc nghiÖm cña nhiÒu ng nh khoa häc tù nhiªn v c«ng nghÖ. Trong suèt 30 n¨m x©y dùng v ph¸t triÓn, nhiÒu c«ng tr×nh v kÕt qu¶ nghiªn cøu cã gi¸ trÞ cña ViÖn ®C ra ®êi phôc vô ®¾c lùc cho sù nghiÖp x©y dùng v b¶o vÖ Tæ quèc. §Ó tæng hîp v giíi thiÖu cã hÖ thèng ë tr×nh ®é cao, c¸c c«ng tr×nh v kÕt qu¶ nghiªn cøu tíi b¹n ®äc trong n'íc v quèc tÕ, ViÖn Khoa häc v C«ng nghÖ ViÖt Nam quyÕt ®Þnh xuÊt b¶n bé s¸ch chuyªn kh¶o. Bé s¸ch tËp trung v o ba lÜnh vùc sau: Nghiªn cøu c¬ b¶n; Ph¸t triÓn v øng dông c«ng nghÖ cao; T i nguyªn thiªn nhiªn v m«i tr'êng ViÖt Nam. T¸c gi¶ cña c¸c chuyªn kh¶o l nh÷ng nh khoa häc ®Çu ng nh cña ViÖn hoÆc c¸c céng t¸c viªn ®C tõng hîp t¸c nghiªn cøu. ViÖn Khoa häc v C«ng nghÖ ViÖt Nam xin tr©n träng giíi thiÖu tíi c¸c quý ®éc gi¶ bé s¸ch n y v hy väng bé s¸ch chuyªn kh¶o sÏ l t i liÖu tham kh¶o bæ Ých, cã gi¸ trÞ phôc vô cho c«ng t¸c nghiªn cøu khoa häc, øng dông c«ng nghÖ, ® o t¹o ®¹i häc v sau ®¹i häc. Héi ®ång Biªn tËp
Lời cảm ơn Cuốn sách chuyên khảo này là tập hợp công trình nghiên cứu hơn 10 năm của nhiều đề tài đề tài và đề án. Tác giả xin đươc trân trọng cám ơn các cá nhân và tập thể khoa học sau đây: (1) PGS.TS. Lê Thị Muội, TS. Nguyễn Trung Nam, Th.S. Lâm Đại Nhân, PGS.TS. Nguyễn Đức Thành, TS. Trần Thanh Thu, ThS. Phạm Bích Ngọc, KS. Bùi Chi Lăng, TS. Nguyễn Hữu Cường, TS. Lê Văn Sơn, TS. Chu Hoàng Hà, TS. Lê Quỳnh Liên và Th.S Bùi Thị Hải Hà thuộc Phòng Công nghệ tế bào thực vật và Phòng Di truyền tế bào thực vật, Viện Công nghệ sinh học tiến hành thực hiện các nội dung chuyển gen thuộc đề tài KHCN.02.01 thuộc Chương trình Công nghệ sinh học giai đoạn 1996 – 2000, nội dung phân lập gen, chuyển gen và đánh giá cây trồng chuyển gen của đề tài KC.04.13, các đề tài và đề án hợp tác quốc tế về chuyển gen ở lúa, ở đu đủ. (2) GS. TS. Nguyễn Văn Uyển và cán bộ thuộc Viện Sinh học nhiệt đới, TS. Trần Thị Cúc Hòa và cán bộ thuộc Viện Lúa Đồng bằng sông Cửu Long, PGS.TS. Vũ Đức Quang và cán bộ thuộc Viện Di truyền Nông nghiệp, TS. Lê Quang Quyến và cán bộ thuộc Viện Nghiên cứu và phát triển cây bông, PGS. TS. Hồ Hữu Nhị và cán bộ thuộc Viện Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp Việt Nam đã chủ trì và tham gia thực hiện các nội dung chuyển gen kháng sâu vào cây hông, chuyển gen cry vào cây lúa bằng công nghệ chuyển gen sạch, chuyển gen giữ hoa lâu tàn vào cây hoa cúc, chuyển
ii Lê Trần Bình gen chịu hạn, gen kháng sâu vào cây bông và đánh giá cây lúa chuyển gen. (3) Ban chủ nhiệm các chương trình Công nghệ sinh hoc 1996‐2000 (KHCN‐02), chương trình Nghiên cứu và phát triển công nghệ sinh học 2001‐2005 (KC04) của Bộ Khoa học và Công nghệ, Tổ chức quốc tế Dịch vụ tiếp nhận và chuyển giao công nghệ sinh học nông nghiệp (ISAAA), Chương trình Hợp tác nghiên cứu cới các nước đang phát triển của Liên minh Châu Âu (INCO‐DC) và Bộ Đào tạo và Nghiên cứu (BMBF) của Cộng hòa Liên bang Đức đã tài trợ cho các nghiên cứu phát triển cây trồng chuyển gen này.
Lời mở đầu Các kỹ thuật tạo giống truyền thống như lai tạo và chọn lọc nhân tạo đã được con người sử dụng hàng ngàn năm qua để tạo ra các cây trồng có đặc tính nông học thích hợp và riêng biệt. Tuy nhiên, những kỹ thuật này đòi hỏi nhiều thời gian và có thể phải trải qua nhiều thế hệ mới có được những tính trạng mong muốn và loại bỏ những tính trạng không mong muốn. Công nghệ sinh học (CNSH) sử dụng kỹ thuật di truyền để biến đổi cây trồng bằng cách đưa trực tiếp những gen có giá trị vào bộ gen của cây nhận (kể cả gen của các loài vốn không có quan hệ họ hàng) và nhanh chóng tạo ra cây trồng biến đổi gen (GMC) mang những đặc tính mong muốn. Hiện nay, CNSH hiện đại và các cây trồng biến đổi gen đang được ứng dụng rộng rãi và đã có những đóng góp đáng kể. Theo thông báo tóm tắt của tổ chức Tổ chức Dịch vụ Quốc tế ứng dụng Công nghệ sinh học vào Nông nghiệp (International Service for the Acquisition of the AgriBiotech Applications, ISAAA) chỉ mới trong thời gian chưa đầy 10 năm, bắt đầu từ 1995 với 0,5 triệu ha cây trồng chuyển gen đầu tiên được gieo trồng, đến năm 2003 đã có đến trên 67 triệu ha và cuối năm 2005 có tới gần 100 triệu ha cây chuyển gen được trồng trên qui mô toàn cầu. Riêng trong giai đoạn 1986 -1997, trên toàn cầu có tới 25000 thử nghiệm trên đồng ruộng đối với các cây trồng biến đổi di truyền. Trong đó, gần 3/4 các cuộc thử nghiệm được tiến hành tại Mỹ, tiếp đến là Canada, châu Âu, châu Mỹ la tinh và châu Á. Các thử nghiệm này tập trung vào 10 loại tính trạng trên đối tượng là 60 loại cây trồng. Đến nay phần lớn các quốc gia ở Đông Nam Á cũng đang nhập cuộc. Ở Việt Nam, lĩnh vực nghiên cứu tạo sinh vật GM đang được tiếp cận, đầu tư và triển khai nghiên cứu. Nhiều gen quý có giá trị ứng dụng như năng suất, chất lượng, chống chịu được phân lập và nghiên cứu nhằm chuyển vào cây trồng. Những vấn đề như: thiết kế vector, hoàn thiện hệ thống tái sinh cây khởi đầu cho nghiên cứu chuyển gen cũng nhận được sự quan tâm của nhiều nhóm tác giả. Một số công trình nghiên cứu chuyển gen chọn lọc và sàng lọc như gen kháng kanamycine, hygromycine, gen mã hóa β- glucuronidase (GUS) vào thuốc lá, lúa cũng được tiến hành nhằm
iv Lê Trần Bình mục đích hoàn thiện các quy trình chuyển gen làm cơ sở cho các bước chuyển gen có giá trị vào các đối tượng cây trồng này v.v.. Các phương pháp chuyển gen khác nhau như dùng súng bắn gen, chuyển gen thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens đã được áp dụng thành công trên một loạt các đối tượng cây trồng quan trọng như: lúa, khoai lang, cà chua, thuốc lá v.v.. Cụ thể là trong Chương trình CNSH giai đoạn 1996 - 2000, Viện Công nghệ sinh học đã thực hiện đề tài cấp Nhà nước có nội dung về chuyển gen ở cây trồng trong đó gen Xa21 kháng bạc lá ở lúa và gen cry đã được chuyển thành công vào giống lúa C71. Trong khuôn khổ chương trình Nghiên cứu và phát triển Công nghệ sinh học giai đoạn 2001 - 2005 Viện CNSH lại tiếp tục chủ trì và thực hiện đề tài KC.04.13 với nội dung “Nghiên cứu áp dụng công nghệ gen để tạo cây chuyển gen nâng cao sức chống chịu sâu bệnh và ngoại cảnh bất lợi”. Ngoài ra, trong khuôn khổ các đề án hợp tác trong nước Viện Công nghệ sinh học đã tiến hành thực hiện với Viện Nghiên cứu và Phát triển cây Bông nội dung chuyển gen kháng sâu vào cây bông vải, với Viện Di truyền Nông nghiệp về phân lập và chuyển gen kháng bọ hà vào cây khoai lang. Cũng trong khuôn khổ hợp tác khoa học với nước ngoài Viện Công nghệ sinh học cùng Trường Đại học Tự do Brussel, Bỉ; Trường Đại học Tổng hợp Valencia, Tây Ban Nha và Viện CIRAD Monpellier, Pháp nghiên cứu chuyển gen chịu hạn vào cây lúa, với Viện Max Plank về Sinh lý thực vật phân tử Golm, Đức chuyển gen chất lượng vào lúa; hợp tác với các quốc gia ASEAN là Thái Lan, Indonesia, Malaysia và Philippin về chuyển gen kháng virus đốm vòng vào cây đu đủ v.v.. Nhằm giới thiệu những kết quả ban đầu của quá trình nghiên cứu về lĩnh vực nêu trên, cuốn sách này được biên soạn như một tài liệu chuyên khảo dành cho cán bộ nghiên cứu, sinh viên và giảng viên, cán bộ quản lý và những người quan tâm đến lĩnh vực phát triển cây trồng chuyển gen ở Việt Nam.
Gi i thích t ng và ch vi t t t Ch vi t G c t ti ng Khái ni m ti ng Gi i ngh a t t Anh Vi t Dichlorophenoxy 2,4-D Ch�t di�t c� acetic acid Ammonium APS persulfate ARNase Ribonuclease AS Asetosyringone Adenosine ATP triphosphate An toàn sinh ATSH h�c Bc Bacillus cereus bp base pair Bacillus Bt thuringiensis �o�n gen kh�i Cauliflower ��ng c�a virus CaMV35S- Mosaic Virus 35S gây b�nh P Promotor kh�m � cây xúp lơ Gen mã hoá protein tinh th� ��c t� di�t cry Crystal gene Gen cry côn trùng c�a vi khu�n Bacillus thuringiensis Deoxyribonucleic Axit DNA acid Deoxyribonucleic
vi Lê Tr n Bình Ethylene Diamine Axit Ethylene EDTA Tetraacetace Diamine Acid Tetraacetate Ethidium Et-Br Bromide Bi�n ��i v�t li�u di truy�n Geneticallty GM Bi�n ��i di truy�n c�a sinh v�t Modified b�ng công ngh� sinh h�c Cây tr�ng ��c bi�n ��i di Genetically truy�n b�ng Cây tr�ng bi�n GMC Modified Crops công ngh� sinh ��i gen (GMC) h�c – Cây tr�ng chuy�n gen Cơ th� s�ng ��c bi�n ��i di truy�n b�ng Genetically Cơ th� s�ng bi�n công ngh� sinh GML Modified Living ��i gen h�c – Cơ th� Organism (GML) s�ng chuy�n gen, t�ơng ��ơng GMO Gentically Sinh v�t bi�n ��i Sinh v�t GMO Modified gen chuy�n gen Organism (GMO) Green GFP Flourescent Protein glutamine GS synthase -Glucuronidase gen mã hoá - gus gene Glucuronidase Isopropylthio-�- IPTG D-galactoside Kb Kilobase
Gi i thích t ng và ch vi t t t vii KDa Kilo dalton Km Kanamycine LB Luria & Bertani Môi tr��ng Murashige & nuôi c�y theo MS Skoog Medium Murashige & Skoog V�n b�n Materia Transfer MTA chuy�n giao Agreement v�t li�u 1 Napthye Acetic NAA Acid Nopaline NOS-P Synthase Promotor Gen mã hoá Neomycine neomycine nptII phosphotransfera phosphotransfe se II gene rase II Polymerase Ph�n �ng chu�i PCR Chain Reaction polymerase K� thu�t t�o phân t� DNA Recombinant K� thu�t DNA tái rDNA m�i thông qua DNA technique t� h�p c�t và ghép các �o�n DNA Reverse RT-PCR Transcriptase PCR Sodium dodecyl sulfate – �i�n di bi�n tính SDS- polyacrylamide trên gel PAGE gel polyacrylamide electrophoresis Transfer- T-DNA DNA=DNA chuy�n
viii Lê Tr n Bình Tumor inducing Plasmit gây Ti-plasmid plasmitd kh�i u th�c v�t Protein ��c Vegetative protein sinh sinh ra trong VIP insecticidal d��ng di�t côn pha phát tri�n protein trùng sinh d��ng c�a vi khu�n Vùng gây ��c Vir Virulence Region có kh� n�ng t�o kh�i u 5-bromo-chloro- X-gal 3-indolyl-�-D- galactosidase 5-bromo-4- X-gluc chloro-3-indolyl glucuronide Khái ni�m liên quan ��n m�c �� gây �nh ATSH Biosafety An toàn sinh h�c h��ng c�a ��i t��ng t�i các h� sinh v�t và h� sinh thái.
M cl c L I C M ƠN .................................... Error! Bookmark not defined. L IM Đ U .................................... Error! Bookmark not defined. GI I THÍCH VÀ T NG VÀ CH VI T T T Error! Bookmark not defined. Chương g 1.T 1 T NG QUAN TÌNH HÌNH NGHIÊN C U TRONG NƯ C VÀ NGOÀI NƯ C. Error! Bookmark not defined. 1.1. Tình hình nghiên c u trong nư c ......... Error! Bookmark not defined. 1.2. Tình hình nghiên c u ngoài nư c ........ Error! Bookmark not defined. Chương 2. Đ I TƯ NG VÀ PHƯƠNG PHÁP T O CÂY TR NG CHUY N GEN .................... Error! Bookmark not defined. 2.1. L a ch n ñ i tư ng cây tr ng ñ chuy n gen ............. Error! Bookmark not defined. 2.1.1. Các gi ng cây tr ng ñã dùng làm ñ i tư ng chuy n gen ............................................. Error! Bookmark not defined.
x Lê Tr n Bình 2.1.2. Các lo i sinh ph m, v t tư và hóa ch t ................. Error! Bookmark not defined. 2.2. Sưu t p gen t các ngu n khác nhau ... Error! Bookmark not defined. 2.3. Phân l p gen ........................... Error! Bookmark not defined. 2.3.1. Gi i thi u chung ........... Error! Bookmark not defined. 2.3.2. Phân l p gen thông qua nhân b n DNA b ng PCR ................................................ Error! Bookmark not defined. 2.3.3. Phân l p gen thông qua sàng l c Thư vi n cDNA hay phân tích transcriptomic Error! Bookmark not defined. 2.3.4. Phân l p gen thông qua phân tích proteomic ....... Error! Bookmark not defined. 2.4. Các nhóm gen có giá tr ñang ñư c s d ng............... Error! Bookmark Bookmark not defined. 2.4.1. Gen công c ................. Error! Bookmark not defined. 2.4.2. Gen kháng b nh cây tr ng .......... Error! Bookmark not defined. 2.4.3. Gen kháng côn trùng có h i ........ Error! Bookmark not defined. 2.4.4. Gen b t d c ñ c ........... Error! Bookmark not defined. 2.4.5. Gen ngư c ch ng chín nhũn và làm chín ch m... Error! Bookmark not defined. 2.4.6. Gen ch ng ch u ñi u ki n sinh thái b t l i ............ Error! Bookmark not defined. 2.4.7. Gen có giá tr y - dư c.. Error! Bookmark not defined. 2.4.8. Bi n ñ i gen nh m tăng cư ng s bi u hi n........ Error! Bookmark not defined. 2.5. Phương pháp bi n n p gen vào th c v t ... Error! Bookmark not defined. 2.5.1. Đi u ki n cho chuy n gen th c v t Error! Bookmark not defined.
M cl c xi 2.5.2. Các phương pháp bi n n p gen vào th c v t ...... Error! Bookmark not defined. 2.5.3. M c ñích chuy n gen vào m t s cây tr ng nư c ta ................................................ Error! Bookmark not defined. 2.6. Phương pháp phân tích th c v t mang gen bi n n p .. Error! Bookmark not defined. 2.6.1. Phương pháp phân tích tính kháng thu c ............ Error! Bookmark not defined. 2.6.2. Phương pháp phân tích hóa t bào ... Error! Bookmark not defined. 2.6.3. Phương pháp phân tích b ng k! thu t sinh h c phân tử ................................................ Error! Bookmark not defined. 2.6.4. Phương pháp phân tích ch c năng sinh h c c"a gen chuy n .......................... Error! Bookmark not defined. 2.7. Sơ b v ý nghĩa kinh t - xã h i c"a nh$ng nghiên c u v cây tr ng chuy n gen .............. Error! Bookmark not defined. Chương Ch g 3. 3. PHÂN PH L P GEN ............ Error! Bookmark not defined. 3.1. Phân l p gen vip ...................... Error! Bookmark not defined. 3.1.1. Gi i thi u v gen vip ..... Error! Bookmark not defined. 3.1.2. Phát hi n protein vip2, vip3 b ng lai mi%n d ch .... Error! Bookmark not defined. 3.1.3. K t qu tinh ch protein vip2 ....... Error! Bookmark not defined. 3.1.4. Phân l p gen vip3 và thi t k vector chuy n gen . Error! Bookmark not defined. 3.1.5. Xây d ng thư vi n genomic c"a Bt.AB51 di t u trùng b hà ............................. Error! Bookmark not defined. 3.2. Phân l p gen Pi-1(t) và gen Pi-2(t) kháng b nh ñ o ôn Error! Bookmark not defined.
xii Lê Tr n Bình 3.2.1.Căn c khoa h c và th c ti%n c"a vi c tìm ki m gen kháng b nh ñ o ôn ........ Error! Bookmark not defined. 3.2.2. Phân l p gen Pi-2(t)...... Error! Bookmark not defined. 3.2.3. Phân l p gen Pi-1(t) kháng ñ o ôn .... Error! Bookmark not defined. 3.3. Phân l p gen t cây ñu ñ"....... Error! Bookmark not defined. 3.3.1. Nguyên li u thí nghi m . Error! Bookmark not defined. 3.3.2. Phương pháp nghiên c u ........... Error! Bookmark not defined. 3.3.3. Phân l p gen CP t PRSV .......... Error! Bookmark not defined. 3.3.4. Thi t k vector chuy n gen mang gen CP c"a PRSV ................................................ Error! Bookmark not defined. 3.3.5. Bi u hi n gen CP c"a PRSVN trong E.coli ........... Error! Bookmark not defined. Chương Ch 4.. HOÀN THI N CÁC QUI TRÌNH CHUY N GEN VÀO CÂY BÔNG V I ................ Error! Bookmark not defined. 4.1. Cơ s khoa h c và th c ti%n c"a vi c chuy n gen vào cây bông v i................................... Error! Bookmark not defined. 4.2. Hoàn thi n h th ng nuôi c y mô và tái sinh cây bông n vitro ph c v chuy n gen ...... Error! Bookmark not defined. 4.2.1.Tái sinh cây bông b ng phương pháp t o ña ch i Error! Bookmark not defined. 4.2.2.Tái sinh cây bông qua phôi soma Error! Bookmark not defined. 4.3. Xây d ng qui trình chuy n gen qua ng ph n b ng vi tiêm .......................................................... Error! Bookmark not defined.
M cl c xiii 4.3.1. Nguyên lý chung ........... Error! Bookmark not defined. 4.3.2. V t li u và phương pháp nghiên c u. Error! Bookmark not defined. Chương 5. TẠO CÂY HÔNG CHUY N GEN KHÁNG SÂU .. Error! Bookmark not defined. 5.1. Cơ s khoa h c và th c ti%n c"a vi c chuy n gen vào cây hông (Paulownia) .................... Error! Bookmark not defined. 5.2. H th ng tái sinh cây hông ...... Error! Error! Bookmark not defined. 5.2.1. Nguyên li u và phương pháp ...... Error! Bookmark not defined. 5.2.2. Xây d ng h th ng tái sinh cây hông. Error! Bookmark not defined. 5.2.3. Đánh giá kh năng tái sinh cây hông b ng ch t ch n l c PPT ......................... Error! Bookmark not defined. 5.3. Hoàn thi n quy trình chuy n gen vào cây hông ........... Error! Bookmark not defined. 5.3.1. Nguyên li u và phương pháp ...... Error! Bookmark not defined. 5.3.2. K t qu chuy n gen cây hông . Error! Bookmark not defined. Chương 6.. CHUY N GEN VÀO CÂY HOA CÚC Error! Bookmark not defined. 6.1. Cơ s khoa h c và th c ti%n c"a vi c chuy n gen vào cây hoa cúc.................................... Error! Bookmark not defined. 6.2. V t li u và phương pháp ......... Error! Bookmark Bookmark not defined.
xiv Lê Tr n Bình 6.2.1.V t li u ........................... Error! Bookmark not defined. 6.2.2. Phương pháp nghiên c u ........... Error! Bookmark not defined. 6.3. Chuy n gen vào cây hoa cúc .. Error! Bookmark not defined. 6.3.1. Hoàn thi n qui trình nuôi c y mô hoa cúc............ Error! Bookmark not defined. 6.3.2. Chuy n gen thông qua vi khu n A. tumefaciens .. Error! Bookmark not defined.3 Chương Ch g 7. T O DÒNG LÚA INDICA CHUY N GEN .......... Error! Bookmark not defined. 7.1. Căn c khoa h c và th c ti%n c"a vi c chuy n gen vào cây lúa .................................... Error! Bookmark not defined. 7.2. Hoàn thi n quy trình chuy n gen vào lúa và t o dòng lúa bi n ñ i gen kháng r y nâu ..... Error! Bookmark not defined. 7.2.1. N i dung nghiên c u .... Error! Bookmark not defined. 7.2.2. V t li u và phương pháp nghiên c u. Error! Bookmark not defined. 7.2.3. K t qu th c hi n chuy n gen .... Error! Bookmark not defined. 7.3. Chuy n gen cryIA(b,c) kháng sâu và gen Xa21 kháng b nh b c lá vào cây lúa thông qua A. tumefaciens ..... Error! Bookmark not defined. 7.3.1. T o dòng lúa bi n ñ i gen kháng sâu ñ c thân và kháng b nh b c lá thông qua A . tumefaciens và ch n l c b ng Hyg ................ Error! Bookmark not defined. 7.3.2. T o dòng lúa bi n ñ i gen kháng sâu ñ c thân qua trung gian A. tumefaciens và ch n l c b ng mannose ............................................ Error! Bookmark not defined.
M cl c xv Chương Ch ng 8. CHUY N GEN Ở CÂY C ĐU Đ ..... Error! Bookmark not defined. 8.1. Cơ s khoa h c và th c ti%n c"a vi c chuy n gen vào cây ñu ñ" và b nh ñ m vòng ......... Error! Bookmark not defined. 8.1.1. Cây ñu ñ" và b nh ñ m vòng ..... Error! Bookmark not defined. 8.1.2. Gen kháng virus ñ m vòng PRSV ... Error! Bookmark not defined. 8.2. So sánh gen CP c"a các ch"ng PSRV Vi t Nam........ Error! Bookmark not defined. 8.2.1. K t qu phân tích trình t gen CP Vi t Nam ........ Error! Bookmark not defined. 8.2.2. So sánh trình t gen CP c"a các ch"ng PSRV .... Error! Bookmark not defined. 8.2.3. Thi t k vector chuy n gen mang gen CP c"a PRSV Vi t Nam ...................... Error! Bookmark not defined. 8.3. Gen ACO oxydase và tính tr ng chín ch m Error! Bookmark not defined. 8.4. Phân l p gen ACO t qu ñu ñ"........... Error! Bookmark not defined. 8.4.1. Nguyên li u ................... Error! Bookmark not defined. 8.4.2. Phương pháp nghiên c u ........... Error! Bookmark not defined. 8.4.3. K t qu phân l p gen ACO ......... Error! Bookmark not defined. 8.5. Chuy n gen vào cây ñu ñ" ...... Error! Bookmark not defined. 8.5.1. Xây d ng h th ng tái sinh cây t phôi soma ...... Error! Bookmark not defined.
xvi Lê Tr n Bình 8.5.2. Chuy n gen vào cây ñu đủ.......... Error! Bookmark not defined. 8.6. Th tính kháng virus trong nhà kính ..... Error! Bookmark not defined. Chương 9. ĐÁNH GIÁ CÂY CHUY N GEN .... Error! Bookmark not defined. 9.1. Yêu c u xã h i và b n ch t khoa h c c"a vi c ñánh giá cây tr ng chuy n gen ............. Error! Bookmark not defined. 9.2. Các phương pháp ñánh giá cây chuy n gen m cñ phòng thí nghi m ..................... Error! Bookmark not defined. 9.2.1. Phương pháp sinh lý th tính kháng kháng sinh .. Error! Bookmark not defined. 9.2.2. Phương pháp sinh hóa . Error! Bookmark not defined. 9.2.3. Phương pháp sinh h c phân t .. Error! Bookmark not defined.39 9.3. Th nghi m cây chuy n gen trong nhà kínhError! Error! Bookmark not defined.2 defined. 9.3.1. T o v t cháy kháng sinh trên lá .. Error! Bookmark not defined.2 9.3.2. Th tính kháng sâu .... Error! Bookmark not defined.3 9.3.3. Th tính ch u h n/m&n Error! Bookmark not defined.5 9.4. Lai t o ñ ki m tra cây chuy n gen ...... Error! Bookmark not defined.5 defined. 9.5. Giám ñ nh GMO ñ i v i g o thành ph m.... Error! Bookmark not defined.7 defined.
M cl c xvii Chương 10.. ĐÁNH GIÁ AN TOÀN SINH H C CÂY CHUY N GEN................ Error! Bookmark not defined. 10.1. Cơ s khoa h c, th c ti%n và xã h i h c c"a vi c ñánh giá an toàn sinh h c ñ i v i GMO...... Error! Bookmark not defined. 10.1.1. Gi i thi u v gen kháng côn trùng ... Error! Bookmark not defined. 10.1.2. T ng quan v ñánh giá an toàn sinh h c c"a gen kháng côn trùng .......... Error! Bookmark not defined. 10.2. Cơ ch qu n lý r"i ro ............. Error! Bookmark not defined. 10.2.1. Quy mô phòng thí nghi m ......... Error! Bookmark not defined. 10.2.2. Quy mô nhà kính ...... Error! Bookmark not defined.0 10.2.3. Quy mô ñ ng ru ng .... Error! Bookmark not defined. 10.3. Các th nghi m ñ ng ru ng Error! Bookmark not defined.1 defined. Chương 11. H I VÀ ĐÁP V CÂY TR NG VÀ TH C PH M CHUY N GEN................ Error! Bookmark not defined. 11.1. Đ&t v n ñ ............................. Error! Bookmark not defined. 11.2. Có ph i cây chuy n gen ñang tr thành ch" ñ c"a nhi u cu c ñ i tho i? ............ Error! Error! Bookmark not defined. 11.3. T i sao l i có kh i ni m k' nguyên m i c i ti n gi ng cây tr ng? ............................ Error! Bookmark not defined. 11.4. Bi n ñ i di truy n là gì? ......... Error! Bookmark not defined. 11.5. Ý nghĩa c"a k! thu t di truy n? .......... Error! Bookmark not defined.