i
Låìi Caím Ån
Được sự phân công của khoa Nông học, trường Đại học Nông Lâm Huế
và được sự đồng ý của cô giáo hướng dẫn TS. Nguyễn Thị Thu Thủy, tôi đã thực
hiện đề tài luận văn “Đánh giá đa dạng di truyền và độ độc tính của các chủng
vi khuẩn Ralstonia solanacearum Smith được thu thập tại các tỉnh phía Nam
Việt Nam”.
Để có thể hoàn thành luận văn này, tôi tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc
đến cô giáo TS. Nguyễn Thị Thu Thủy và cô giáo TS. Trương Thị Hồng Hải là 2
người đã trực tiếp tận tình hướng dẫn tôi trong suốt quá trình thực hiện và viết
đề tài. Với vốn kiến thức được tiếp thu trong quá trình học không chỉ là nền tảng
cho quá trình nghiên cứu đề tài mà còn là hành trang quý báu giúp tôi trưởng
thành hơn trong cuộc sống.
Xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo đã trực tiếp giảng dạy truyền đạt
những kiến thức khoa học chuyên ngành trong thời gian tôi học tập tại trường.
Xin ghi nhận những đóng góp nhiệt tình của các anh chị học viên cao học
trong và ngoài lớp K19, K20, nhóm các em sinh viên K45, K46, K47, các bạn ở
trường THPT Lê Hồng Phong đã giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện đề tài. Có
thể khẳng định sự thành công của luận văn này, trước hết thuộc về công lao của
tập thể. Đặc biệt là sự quan tâm, động viên khuyến khích từ phía gia đình và người
bạn tốt đồng hành Trần Thị Bảo Ngà. Nhân đây, tôi xin được bày tỏ lòng biết ơn
sâu đậm đến tất cả mọi người.
Mặc dù đã cố gắng rất nhiều song do buổi đầu mới làm quen với công tác
nghiên cứu khoa học trong phòng thí nghiệm cũng như hạn chế về kỹ năng thao
tác nên không thể tránh khỏi được những thiếu sót nhất định. Tôi rất mong nhận
được sự đóng góp của quý thầy cô và các bạn đồng nghiệp để luận văn được
hoàn chỉnh hơn.
Tôi xin chân thành cảm ơn!
Huế, ngày 20 tháng 7 năm 2015
Học viên
Phạm Thanh Bình
PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the watermark
ii
LỜI CAM ĐOAN
Để hoàn thiện công trình nghiên cứu này chúng tôi đã tiến hành các công việc
liên quan từ xử lý mẫu, phân lập mẫu, chạy PCR đánh giá đa dạng di truyền tại phòng
Công nghệ Sinh học, phòng thí nghiệm Bệnh cây và thực hiện thí nghiệm lây nhiễm
tại nhà lưới của Bộ môn Bảo vệ thực vật, trường Đại học Nông lâm Huế. Đây là thành
quả tập thể nhóm nghiên cứu của chúng tôi.
Tất cả số liệu, thông tin trong luận văn này được chúng tôi ghi nhận từ thực tế
nghiên cứu. Vì vậy tôi cam đoan tất cả số liệu ở trong luận văn này là chính xác và
khách quan, có tính khoa học cao và chưa từng được công bố ở trên một luận văn cao
học nào khác.
Huế, ngày 20 tháng 7 năm 2015
Học viên
Phạm Thanh Bình
PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the watermark
iii
MỤC LỤC
MỞ ĐẦU .............................................................................................................. 9
1. ĐT VN Đ ................................................................................................... 9
2. MC TIÊU NGHIÊN CU ............................................................................ 10
3. NGHA KHOA HC V THC TIN ..................................................... 10
4. NHNG ĐIM MI CA Đ TI ............................................................... 10
Chương 1. TỔNG QUAN CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU ............................ 11
1.1. CÂY C CHUA........................................................................................... 11
1.1.1. Giá trị dinh dưỡng ..................................................................................... 11
1.1.2. Tình hình sản xuất cà chua trên thế giới ................................................... 12
1.1.3. Tình hình sản xuất cà chua ở Việt Nam .................................................... 12
1.1.4. Các bệnh thường gặp trên cây cà chua ...................................................... 13
1.1.5. Thiệt hại do bệnh héo xanh vi khuẩn gây ra trên cà chua ......................... 14
1.2. TÌNH HÌNH NGHIÊN CU VI KHUẨN RALSTONIA SOLANACEARUM
............................................................................................................................. 15
1.2.1. Vi khuẩn Ralstonia solanacearum ............................................................ 16
1.2.2. Các nghiên cứu về vi khuẩn Ralstonia solanacearum trên thế giới ......... 19
1.2.3. Nghiên cứu về vi khuẩn Ralstonia solanacearum ở trong nước .............. 20
1.3. TÌNH HÌNH NGHIÊN CU V BỆNH HÉO XANH VI KHUẨN .......... 21
1.3.1. Triệu chứng bệnh ...................................................................................... 21
1.3.2. Nguyên nhân gây bệnh và điều kiện phát sinh bệnh ................................. 21
1.3.3. Các phương pháp chẩn đoán, phát hiện bệnh héo xanh vi khuẩn ............. 22
1.3.4. Biện pháp phòng trừ .................................................................................. 22
1.3.5. Các nghiên cứu về bệnh héo xanh vi khuẩn trên thế giới ......................... 26
1.3.6. Các nghiên cứu về bệnh héo xanh vi khuẩn ở trong nước ........................ 27
1.3.7. Các nghiên cứu về bệnh héo xanh vi khuẩn trên cà chua ở Việt Nam ..... 28
1.4. ĐÁNH GIÁ ĐA DẠNG DI TRUYN ........................................................ 29
1.4.1 Tổng quan đa dạng sinh học - đa dạng di truyền ....................................... 29
PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the watermark
iv
1.4.2. nghĩa của việc nghiên cứu đa dạng di truyền ........................................ 30
1.4.3. Các phương pháp nghiên cứu đa dạng di truyền ....................................... 30
1.4.4. Các kết quả nghiên cứu về sự đa dạng di truyền của vi khuẩn Ralstonia
solanacearum ...................................................................................................... 36
Chương 2. MỤC TIÊU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 38
2.1. MC TIÊU NGHIÊN CU ......................................................................... 38
2.1.1. Mục tiêu chung .......................................................................................... 38
2.1.2. Mục tiêu cụ thể .......................................................................................... 38
2.2. NỘI DUNG NGHIÊN CU ........................................................................ 38
2.2.1. Đánh giá đa dạng di truyền của các chủng vi khuẩn Ralstonia solanacearum
được thu thập tại các tỉnh phía Nam. ...................................................................... 38
2.2.2. Đánh giá độ độc tính của các chủng vi khuẩn Ralstonia solanacearum
được thu thập tại các tỉnh phía Nam. .................................................................. 38
2.3. ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU V PHẠM VI NGHIÊN CU ........................ 39
2.3.1. Nguồn vi khuẩn Ralstonia solanacearum ................................................. 39
2.3.2. Giống cà chua ............................................................................................ 43
2.3.3. Môi trường nhân tạo .................................................................................. 43
2.3.4. Vật liệu nghiên cứu ................................................................................... 44
2.4. PHẠM VI NGHIÊN CU ........................................................................... 46
2.5. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CU ................................................................ 46
2.5.1. Phương pháp thu mẫu bệnh ....................................................................... 46
2.5.2. Phương pháp phân lập vi khuẩn Ralstonia solanacearum ........................ 46
2.5.3. Phương pháp tách chiết DNA ................................................................... 47
2.5.4. Phương pháp xác định phylotype của vi khuẩn Ralstonia solanacearum 47
2.5.5. Phương pháp đánh giá đa dạng di truyền vi khuẩn Ralstonia solanacearum .. 48
2.5.6. Phương pháp lây nhiễm nhân tạo .............................................................. 49
Chương 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN ............................ 52
3.1. KẾT QUẢ NGHIÊN CU MỘT SỐ ĐC ĐIM HÌNH THÁI KHUẨN
LẠC CA CÁC CHNG VI KHUẨN RALSTONIA SOLANACEARUM ........ 52
PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the watermark
v
3.2. KẾT QUẢ NGHIÊN CU XÁC ĐỊNH VI KHUẨN RALSTONIA
SOLANACEARUM BẰNG CHỈ THỊ PHÂN TỬ .................................................. 55
3.3. KẾT QUẢ TÁCH CHIẾT DNA .................................................................. 57
3.4. KẾT QUẢ NGHIÊN CU XÁC ĐỊNH PHYLOTYPE CA 19 CHNG
VI KHUẨN RALSTONIA SOLANACEARUM ................................................... 58
3.5. KẾT QUẢ PHÂN TÍCH ĐA HÌNH BẰNG KỸ THUẬT RAPD ............... 58
3.6. ĐÁNH GIÁ KIU GEN CA CÁC CHNG VI KHUẨN BẰNG KỸ
THUẬT RAPD .................................................................................................... 60
3.7. ĐÁNH GIÁ MỐI QUAN HỆ DI TRUYN GIA 19 CHNG VI KHUẨN
............................................................................................................................. 62
3.8. ĐÁNH GIÁ DIN BIẾN BỆNH HÉO XANH VI KHUẨN SAU KHI LÂY
NHIM ................................................................................................................. 66
3.9. ĐÁNH GIÁ ĐỘ ĐỘC TÍNH CA CÁC CHNG VI KHUẨN VI CÁC
GIỐNG C CHUA ............................................................................................. 74
3.9.1. Tính kháng của các giống cà chua ............................................................ 74
3.9.2. Độc tính của các chủng vi khuẩn .............................................................. 75
3.9.3. Tương tác giữa tính kháng của các giống cà chua với độc tính của các
chủng vi khuẩn .................................................................................................... 75
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .......................................................................... 78
TÀI LIỆU THAM KHẢO ................................................................................ 80
PHỤ LỤC ........................................................................................................... 88
PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the watermark