Những tác động của Taxol lên việc bảo quản lạnh tế bào trứng bò trưởng thành bằng phương pháp thủy tinh hóa

TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(3SE): 299-305<br /> <br /> NHỮNG TÁC ĐỘNG CỦA TAXOL LÊN VIỆC BẢO QUẢN LẠNH TẾ BÀO<br /> TRỨNG BÒ TRƯỞNG THÀNH BẰNG PHƯƠNG PHÁP THỦY TINH HÓA<br /> <br /> Nguyễn Thị Thương Huyền1,2, Nguyễn Thành Trung1, Nguyễn Vũ Hoàng Linh1,<br /> Lê Thành Long3, Hoàng Nghĩa Sơn3, Phan Kim Ngọc1<br /> (1)<br /> Đại học Khoa học tự nhiên tp. Hồ Chí Minh, (*)thuonghuyen78@yahoo.com<br /> (2)<br /> Đại học Sư Phạm tp. Hồ Chí Minh<br /> (3)<br /> Viện Sinh học nhiệt đới, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam<br /> <br /> TÓM TẮT: Thí nghiệm được thiết kế để đánh giá hiệu quả của Taxol lên sự bảo quản lạnh tế bào trứng<br /> (TBT) bò trưởng thành MII bằng phương pháp thủy tinh hóa sử dụng cọng rạ làm vật mang. TBT ở bò<br /> thành thục (sau 22-24h nuôi) được thủy tinh hóa trong các giọt chất bảo quản lạnh có hoặc không có 1 µM<br /> Taxol (giọt 1: TCM-199, 10% FBS, 5% FCS, 10% ethylene glycol (EG), 10% dimethyl sulfoxide<br /> (DMSO) trong 45 giây; giọt 2: TCM -199, 10% FBS, 5% FCS, 20% ethylene glycol (EG), 20% dimethyl<br /> sulfoxide (DMSO), 0,5 M sucrose trong 25 giây) trong các cọng rạ (0,25 ml, I.M.V, Pháp). Sau rã đông,<br /> các TBT được tiếp tục nuôi ổn định thêm 2h và tiến hành đánh giá các chỉ tiêu về tỷ lệ TBT sống trên<br /> TBT đông lạnh; tỷ lệ TBT sống trên TBT thu hồi và tỷ lệ TBT không bị tổn thương nhân. Kết quả thu<br /> được: tỷ lệ TBT sống so với TBT đem đông lạnh và TBT sống so với TBT thu hồi ở mẫu có xử lý với<br /> Taxol là cao hơn so với mẫu đối chứng (không xử lý với Taxol) (62,74 ± 2,74% so với 59,81 ± 1,75% và<br /> 70,65 ± 2,44% so với 67,66 ± 2,12%, P < 0,05), tỷ lệ TBT không bị tổn thương nhân ở cả hai mẫu xử lý<br /> và không xử lý Taxol không có sự khác biệt (78,14 ± 4,01% so với 77,89 ± 2,13%, P > 0,05). Các kết quả<br /> thu được trong thí nghiệm này cho thấy Taxol giúp tăng tỷ lệ sống của TBT bò MII sau khi đông lạnh và<br /> giải đông, nhưng chưa có tác động rõ rệt lên việc hạn chế sự tổn thương nhân của quá trình bảo quản lạnh.<br /> Từ khóa: bảo quản lạnh, thủy tinh hóa, tế bào trứng bò, Taxol.<br /> <br /> MỞ ĐẦU et al. (2006) [10] kết luận rằng việc xử lý trước<br /> Phương pháp thủy tinh hóa đã thành công bằng Taxol giảm tác hại gây ra bởi quá trình<br /> và được ứng dụng trong công nghệ bảo quản tế thủy tinh hóa đến cấu trúc thoi vô sắc ở thời kì<br /> bào trứng (TBT) của động vật có vú như chuột, giảm phân, và vì thế mà cải thiện sự phát triển<br /> bò, người và ngựa. Tuy nhiên, việc bảo quản TBT lợn sau khi thủy tinh hóa. Hơn nữa, nhóm<br /> lạnh TBT hiện nay vẫn còn gặp nhiều khó khăn. nghiên cứu của Morato et al. (2008) [7] chỉ ra<br /> Sự ổn định hệ thống bộ khung tế bào trong suốt rằng việc xử lý với 1 µM Taxol trước và trong<br /> quá trình thủy tinh hóa giúp cải thiện sự sống suốt quá trình thủy tinh hóa giúp ổn định siêu<br /> sót sau giải đông và phát triển tiếp theo. Taxol cấu trúc vi ống và định vị nhiễm sắc thể ở TBT<br /> là chất làm ổn định cấu trúc vi ống. Taxol ưu bò. Trước tình hình trên, nhóm nghiên cứu<br /> tiên kết hợp với protein và có thể thay đổi nhiều chúng tôi tiến hành khảo sát những tác động của<br /> tiến trình tế bào trong cả cơ thể người và chuột. Taxol lên sự thủy tinh hóa TBT bò đã được nuôi<br /> Một trong những tiến trình này liên quan đến sự trưởng thành trong điều kiện phòng thí nghiệm<br /> tương tác với các vi ống. Taxol tương tác với (in vitro).<br /> các vi ống một cách chuyên biệt so với<br /> PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU<br /> colchicine và vinca alkaloid. Trong khi các hợp<br /> chất này làm giảm sự polyme hóa cấu trúc vi Thu nhận và nuôi chín trứng<br /> ống và đẩy mạnh sự tháo xoắn của vi ống thì<br /> Taxol làm tăng tỉ lệ polyme hóa bằng việc giảm Buồng trứng bò được thu nhận từ các lò giết<br /> bớt sự tập trung của vi ống cần cho sự polyme mổ, sau đó được bảo quản trong dung dịch nước<br /> hóa [7]. Taxol được thêm vào dung dịch thủy muối sinh lý (NaCl 0,9%) chứa 50 µg/ml<br /> tinh hóa để cải thiện sự phát triển sau giải đông Gentamycin và chuyển vể phòng thí nghiệm<br /> của TBT chưa trưởng thành ở người [5], TBT trong khoảng 3h với nhiệt độ được duy trì 33-<br /> chuột trưởng thành [8] và lợn [10]. Gần đây, Shi 37oC. Tại phòng thí nghiệm, các buồng trứng<br /> <br /> <br /> 299<br />  Nguyen Thi Thuong Huyen et al.<br /> <br /> được rửa lại trong dung dịch PBS chứa 50 trong 15 phút ở 38,5oC , 5% CO2, độ ẩm 100%<br /> µg/ml Gentamycin đồng thời được cắt bỏ các trước khi được thủy tinh hóa trong cọng rạ.<br /> phần mỡ thừa. Các TBT sẽ được chọc hút từ các Ngoài ra, dung dịch thủy tinh hóa cũng chứa 1<br /> nang có đường kính từ 3-6 mm bằng đầu kim µM Taxol.<br /> 18G. Các TBT có từ 3 lớp tế bào cumulus dày Thủy tinh hóa<br /> bao quanh được chọn cho quá trình nuôi thành<br /> thục (IVM-In vitro maturation). Các TBT được Sau khi tiền xử lý với dung dịch Taxol, các<br /> chọn sẽ được rửa hai lần trong dung dịch DBPS TBT được chuyển vào đĩa nhựa Φ35 chứa môi<br /> 0,1% penicillin/streptomycin và hai lần trong trường C3 (giữ TBT chuẩn bị cho đông lạnh).<br /> môi trường nuôi chín trứng (C3) gồm TCM-199 Sau đó chuyển các TBT ở đĩa trên vào vi giọt<br /> (M5017, sigma), 10% FBS (sigma), 5% FCS VS1 (TCM-199 + 10% FBS + 5% FCS + 10%<br /> (sigma), 10 IU/ml hCG, 10 IU/ml EGF và DMSO + 10% EG + 1 µM Taxol) giữ cân bằng<br /> 0,2mM Natripyruvate. Lấy khoảng 15-20 TBT 45 giây, tiếp theo chuyển các TBT sang môi<br /> đem nuôi trong các vi giọt môi trường nuôi chín trường thủy tinh hóa trong vi giọt VS2 (TCM-<br /> trứng C3 (100 µl/giọt) được tạo sẵn trong đĩa 4 199 + 10% FBS + 5% FCS + 20% DMSO +<br /> giếng có phủ dầu khoáng (ủ ở 38,5o C, 5% CO2, 20% EG + 0,5M Sucrose + 1 µM Taxol) trong<br /> độ ẩm 100% trong vòng 2h trước khi sử dụng) 25 giây, cuối cùng chuyển các TBT này vào<br /> trong tủ nuôi ở 38,5oC, 5% CO2, độ ẩm 100% cọng rạ trong vòng 25 giây, hàn đầu cọng rạ<br /> trong khoảng 22-24h. Sau thời gian nuôi thành bằng máy ép nhựa sau đó đưa thẳng cọng rạ<br /> thục, các TBT sẽ được đánh giá sự trưởng thành chứa TBT vào bình nitơ lỏng để bảo quản.<br /> về nhân và trưởng thành về tế bào chất. Rã đông<br /> Nhuộm PI (propidium iodide) đánh giá kết Lấy cọng rạ chứa TBT ra khỏi bình nitơ<br /> quả nuôi chín TBT lỏng, để trong không khí 5 giây, nhúng vào<br /> Các TBT sau khi được nuôi trong môi nước ấm 33-35oC, dùng bông gòn tẩm cồn lau<br /> trường nuôi thành thục sẽ được loại các tế bào sạch cọng rạ, dùng kéo cắt một đầu, sau đó cắt<br /> cumulus xung quanh, sử dụng pipette Pasteur đầu còn lại, chuyển TBT vào đĩa nhựa Φ35<br /> được kéo nhỏ ở đường kính khoảng 90-100 µm. trống. Dùng mouth pipette và ống mao quản<br /> Các TBT đã được loại sạch các tế bào cumulus thủy tinh hút TBT từ đĩa Φ35 chuyển qua môi<br /> được cố định trong paraformaldehyde 4% (1% trường RĐ1 (TCM-199 + 10% FBS + 5% FCS +<br /> BSA, 100 mg/100 ml PVA) 40 phút, đặt trong 0,25 M Sucrose) trong khoảng 1,5 phút ở nhiệt<br /> tối ở 4oC. Sau đó, rửa lại 2 lần bằng dung dịch độ phòng. Chuyển tiếp các TBT này sang môi<br /> PBS (1% BSA, 100 mg/100 ml PVA) và ủ trong trường RĐ2 (TCM-199 + 10% FBS + 5% FCS +<br /> dung dịch Triton X-100 0,1% qua đêm. Tiếp tục 0,15M Sucrose), giữ khoảng 1,5 phút ở nhiệt độ<br /> rửa lại 2 lần bằng dung dịch PBS (1% BSA, 100 phòng. Chuyển tiếp TBT qua môi trường RĐ3<br /> mg/100 ml PVA) cho sạch Triton X-100 và (TCM-199 + 10% FBS + 5% FCS), giữ 5 phút ở<br /> nhuộm trong PI nồng độ 30 µg/ml trong 30 phút nhiệt độ phòng. Tiếp tục chuyển TBT vào môi<br /> ở nhiệt độ phòng. Rửa các TBT đã được nhuộm trường nuôi trứng C3 , sau khoảng 3 phút ở nhiệt<br /> 2 lần trong PBS (1% BSA, 100 mg/100 ml độ phòng, rồi chuyển vào tủ nuôi khoảng 2h để<br /> PVA) và cố định lên lame. Các TBT trưởng giúp TBT hồi phục hoàn toàn.<br /> thành sẽ bắt màu đỏ của thuốc nhuộm PI tại Đánh giá sự sống chết của TBT sau đông<br /> vùng nhân và thể cực thứ nhất khi quan sát dưới lạnh và giải đông<br /> kính hiển vi huỳnh quang ở bước sóng 535 nm. Đánh giá sự sống chết của TBT bằng quan<br /> Đông lạnh và giải đông sát hình thái TBT sống có tế bào chất đồng đều,<br /> Tiền xử lý TBT đã nuôi thành thục với Taxol màu sáng, màng trong suốt nhìn rõ, dễ quan sát;<br /> (Sigma) TBT chết có tế bào chất màu đen, không đều<br /> hoặc co lại hay phân mảnh bên trong. Đồng thời<br /> Sau khi nuôi thành thục (22-24h), các TBT tiến hành nhuộm PI theo quy trình nhuộm như<br /> được loại bỏ lớp tế bào cumulus bằng pipette trên để đánh giá sự tổn thương của nhân: TBT<br /> Pasteur, sau đó xử lý với 1 µM Taxol (Sigma)<br /> <br /> 300<br />  TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(3SE): 299-305<br /> <br /> bị tổn thương nhân có đặc điểm là nhân bắt màu tin cậy 95%. Dùng hàm Descriptive Statistic, t-<br /> với thuốc nhuộm PI hoặc nhân bị phân mảnh Test Two-Sample Assuming Equal Variances.<br /> với các điểm bắt màu đỏ nằm phân tán; TBT có<br /> nhân không bị tổn thương thì vùng nhân sẽ bắt KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN<br /> màu đỏ sáng đồng nhất của thuốc nhuộm PI. Kết quả nuôi thành thục TBT<br /> Phương pháp xử lý số liệu Các TBT sau khi nuôi, được đánh giá theo<br /> Tất cả các số liệu trong nghiên cứu được xử độ giãn nở của cumulus và sự xuất hiện thể cực<br /> lý bằng phần mềm Excel phiên bản 2003 ở độ thứ I (hình 1). Kết quả thể hiện ở bảng 1.<br /> <br /> Bảng 1. Kết quả nuôi thành thục tế bào trứng<br /> Số lần thí Tỷ lệ (%) TBT trưởng Số TBT đánh<br /> Số TBT nuôi Tỷ lệ (%) MII (n)<br /> nghiệm thành (n) giá<br /> 82,07 ± 1,77 81,06 ± 2,34<br /> 6 586 232<br /> (481) (188)<br /> P > 0,05<br /> <br /> <br /> a b<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> c d<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 1. Tế bào trứng trước và sau khi nuôi (x20)<br /> a. TBT chọn để nuôi; b. TBT trưởng thành qua giãn lớp cumulus; c. TBT trưởng thành, xuất hiện thể cực thứ<br /> nhất; d. TBT không trưởng thành và chết<br /> <br /> <br /> Qua 6 đợt thí nghiệm, tổng số TBT nuôi là cumulus, lấy 232 TBT đem đánh giá (loại bỏ<br /> 586, trong đó có 481 TBT đạt đến giai đoạn lớp cumulus) thì có 188 TBT xuất hiện thể cực<br /> trưởng thành theo độ giãn nở cumulus với tỷ lệ thứ nhất, chiếm tỷ lệ là 81,06 ± 2,34%. So sánh<br /> là 82,07 ± 1,77%. Trong số những TBT được hai tỷ lệ này cho thấy, không có sự khác biệt về<br /> cho là đã thành thục dựa vào độ giãn nở mặt thống kê (P > 0,05). Như vậy, kết quả đánh<br /> <br /> <br /> 301<br />  Nguyen Thi Thuong Huyen et al.<br /> <br /> giá tỷ lệ đạt thành thục của TBT theo độ giãn nở giờ, sau đó giải đông, đánh giá sống chết bằng<br /> cumulus và theo quan sát thể cực là tương cách quan sát hình thái dưới kính hiển vi. Những<br /> đương nhau. Hiện nay các phòng thí nghiệm trên TBT được cho là sống theo hình thái sau khi<br /> thế giới đều đạt tỷ lệ TBT bò đạt thành thục từ giải đông sẽ đem khảo sát sự tổn thương về<br /> 70-90%. Kết quả trong thí nghiệm này tương nhân bằng phương pháp nhuộm PI. Trên hình<br /> đối cao và có thể chấp nhận được. ảnh nhuộm, nhân còn nguyên vẹn là những<br /> vùng có hình hoa thị, sáng đều và thường nhỏ<br /> Kết quả đông lạnh, giải đông<br /> hơn thể cực (hình 2). Nếu nhân bị tổn thương<br /> Những TBT sau khi IVM được bảo quản thì sẽ có hình ảnh các đốm sáng nằm rải rác<br /> bằng phương pháp thủy tinh hóa tối thiểu 48 hoặc không có nhân (hình 3).<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> x40 x40<br /> <br /> Hình 2. TBT có nhân không tổn thương Hình 3. TBT có nhân tổn thương<br /> Mũi tên màu trắng là vùng nhân, mũi tên màu xanh là thể cực thứ nhất.<br /> <br /> <br /> Tiến hành so sánh 4 chỉ tiêu (CT) sau giải lạnh (CT2); tỷ lệ TBT sống so với tổng số TBT<br /> đông như sau: tỷ lệ thu hồi (CT1 - chỉ tiêu 1); thu hồi (CT3); tỷ lệ TBT có nhân không bị tổn<br /> Tỷ lệ TBT sống so với tổng số TBT đem đông thương (CT4). Kết quả thể hiện ở bảng 2.<br /> <br /> Bảng 2. So sánh kết quả đông lạnh và giải đông giữa lô thí nghiệm xử lý Taxol và lô đối chứng<br /> Số TBT Tỷ lệ (%) các chỉ tiêu so sánh<br /> Lô thí<br /> đông lạnh<br /> nghiệm TC1 TC2 TC3 TC4<br /> (n)<br /> Không xử lý 88,43 ± 2,04 59,81 ± 1,75 67,66 ± 2,12 77,89 ± 2,13<br /> 249<br /> Taxol (220 TBT) (149 TBT) (149 TBT) (116 TBT)<br /> 88,80 ± 1,91 62,74 ± 2,74 70,65 ± 2,44 78,14 ± 4,01<br /> Xử lý Taxol 188<br /> (167 TBT) (118 TBT) (118 TBT) (92 TBT)<br /> Mức ý nghĩa P > 0,05 P < 0,05 P < 0,05 P > 0,05<br /> <br /> Kết quả bảng 2 cho thấy, tỷ lệ thu hồi TBT ở cả lô thí nghiệm và lô đối chứng cũng là điều<br /> sau giải đông ở lô thí nghiệm và lô đối chứng là tất yếu, vì cả 2 lô đều được bảo quản bằng<br /> tương đương nhau và đạt khoảng 88% (P > phương pháp thủy tinh hóa trong cọng rạ hở và<br /> 0,05). Điều này cho phép khẳng định rằng sau cùng quy trình như nhau. Kết quả này khẳng<br /> khi đông lạnh, khả năng thu hồi lại được số định thêm về kỹ thuật thực hiện thí nghiệm<br /> lượng tế bào trứng là khá cao. Kết quả đạt được trong cả 2 lô không có khác biệt nhau, và không<br /> <br /> 302<br />  TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(3SE): 299-305<br /> <br /> gây ảnh hưởng đến kết quả chung của các chỉ qua hình thái trên hình ảnh nhuộm nhân đạt<br /> tiêu khác trong cả hai lô thí nghiệm. Tuy nhiên, 78,14 ± 4,01% (mẫu đối chứng là 77,89 ±<br /> còn khoảng 12% lượng TBT bị thất thoát trong 2,13%). Kết quả này cao hơn của Saunders và<br /> quá trình thu hồi. Qua quá trình thực hiện thí Parks (1999; 31%) [9]; Morato et al. (2008;<br /> nghiệm, chúng tôi nhận thấy rằng, lượng TBT 46,6%) [7]. Tuy nhiên, kết quả này thấp hơn của<br /> bị mất chủ yếu ở giai đoạn giải đông: ngay khi Eroglu et al. (1998; 86%) [4].<br /> lấy cọng rạ ra khỏi bình nitơ lỏng, một số cọng Tỷ lệ TBT bò có nhân không bị tổn thương<br /> rạ thường bị nổ do thay đổi nhiệt độ và áp suất ở cả 2 lô thí nghiệm không có sự khác biệt về<br /> một cách đột ngột, lúc này toàn bộ TBT trong mặt thống kê (P > 0,05). Tức là sự tổn thương<br /> cọng rạ không thể thu hồi được. Ngoài ra, khi nhân của TBT bò sau khi bảo quản lạnh ở nhóm<br /> chuyển TBT vào môi trường giải đông thường không xử lý Taxol và nhóm xử lý Taxol là<br /> có hiện tượng bọt khí tạo ra rất nhiều. Chính tương đương nhau. Kết quả này chứng tỏ chưa<br /> những yếu tố này làm cản trở phần nào việc tìm thấy hiệu quả của Taxol trong việc hạn chế tổn<br /> và thu nhận TBT. Đây là khó khăn về mặt kỹ thương về nhân của TBT bò trong quá trình bảo<br /> thuật cần phải khắc phục. quản bằng phương pháp thủy tinh hóa trong<br /> Tỷ lệ trung bình TBT sống so với tổng số cọng rạ. Tuy nhiên, kết quả nghiên cứu của<br /> TBT đem đông lạnh của thí nghiệm đạt 62,74 ± nhóm tác giả Morato et al. (2008) [7] lại cho<br /> 2,74% (mẫu đối chứng là 59,81 ± 1,75%), sự rằng, nếu TBT bò được xử lý với Taxol trước<br /> khác biệt này có ý nghĩa về mặt thống kê (P < khi đem bảo quản bằng phương pháp thủy tinh<br /> 0,05). Điều này chứng tỏ ở lô thí nghiệm không hóa có thể đạt được tỷ lệ về cấu trúc bình<br /> xử lý Taxol cho kết quả tỷ lệ sống theo hình thái thường của thoi vô sắc, vi ống, nhiễm sắc thể<br /> thấp hơn so với nhóm có xử lý Taxol. Kết quả tương đương với các TBT tươi. Như vậy, kết<br /> này chứng tỏ Taxol có tác động lên khả năng quả của thí nghiệm này chưa thấy được vai trò<br /> sống của TBT trong quá trình bảo quản lạnh. của Taxol đối với nhân TBT. Điều này có thể<br /> Nhưng khi xét tỷ lệ các TBT sống so với được giải thích do việc khảo sát sự tổn thương<br /> những TBT thu hồi được sau giải đông cho kết nhân chủ yếu thông qua hình ảnh chụp dưới<br /> quả là 70,65 ± 2,44% so với mẫu đối chứng là kính hiển vi huỳnh quang, dựa vào độ phát sáng<br /> 67,66 ± 2,12% (P < 0,05). Điều này có nghĩa là ở của thuốc nhuộm. Vì vậy, có thể kỹ thuật<br /> lô không xử lý Taxol cho tỷ lệ sống sau giải đông nhuộm chưa thật chuẩn xác nên chưa cho kết<br /> thấp hơn so với lô có xử lý trước với Taxol. Kết quả rõ ràng. Đây là một yếu tố cần khắc phục.<br /> quả này một lần nữa chứng tỏ Taxol có tác động Hiện nay, trong nước chưa có công trình nào<br /> lên khả năng sống của TBT bò trong quá trình công bố về sự tổn thương nhân do quá trình bảo<br /> bảo quản lạnh. Kết quả này cũng phù hợp với các quản lạnh bằng phương pháp thủy tinh hóa.<br /> nghiên cứu của Morato et al. (2008) [7] cho rằng,<br /> KẾT LUẬN<br /> Taxol có khả năng làm ổn định bộ khung TBT,<br /> giảm thiểu sự tổn thương cũng như nâng cao khả Kết quả thí nghiệm của chúng tôi cho thấy,<br /> năng phát triển của TBT đông lạnh. Kết quả này Taxol có tác dụng lên tỷ lệ sống của TBT bò<br /> có phần cao hơn kết quả của Martino et al. (1996, trưởng thành thành thục sau khi bảo quản lạnh,<br /> 34%) [6]. Như vậy, tỷ lệ TBT sống sau giải đông nhưng chưa thấy được tác dụng của Taxol lên<br /> được quan sát bằng hình thái trong nghiên cứu là việc hạn chế sự tổn thương của nhân. Vì vậy cần<br /> có thể chấp nhận được. Tuy nhiên, kết quả này khảo sát các phương pháp đánh giá sự tổn<br /> còn thấp hơn nhiều so với kết quả 83,7%, được thương của nhân ở TBT bò sau khi bảo quản lạnh<br /> Booth et al. (1999) công bố [1]; 86% của Andras bằng các phương pháp nhuộm khác để có kết<br /> Dinnyes et al. (2000) [3]; 89,1% của Morato et luận chính xác hơn về vai trò của hóa chất này.<br /> al. (2008) [7] và đặc biệt là Chian et al. (2004)<br /> [2] thu được tỷ lệ TBT bò sống sau giải đông đạt TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> 92%.<br /> 1. Booth P.J., G. Vajta, A. Hoj, P. Holm, H.<br /> Tỷ lệ nhân không tổn thương theo đánh giá Jacobsen, T. Greve, and H. Callesen, 1999.<br /> <br /> <br /> 303<br />  Nguyen Thi Thuong Huyen et al.<br /> <br /> Full-term development of nuclear transfer bovine oocytes cryopreserved by ultra-rapid<br /> calves produced from open-pulled straw cooling. Biol Reprod, 54(5): 1059-1069.<br /> (OPS) vitrified cytoplasts: work in progress. 7. Morato R., R., D. Izquierdo, J.L.<br /> Theriogenology, 51(5): 999-1006. Albarracin, B. Anguita, M.J. Palomo, A.R.<br /> 2. Chian R.C., M. Kuwayama, L. Tan, J. Tan, Jimenez-Macedo, M.T. Paramio, and T.<br /> O. Kato, and T. Nagai, 2004. High survival Mogas, 2008. Effects of pre-treating in<br /> rate of bovine oocytes matured in vitro vitro-matured bovine oocytes with the<br /> following vitrification. J. Reprod. Dev., cytoskeleton stabilizing agent taxol prior to<br /> 50(6): 685-696. vitrification. Mol Reprod Dev, 75(1): 191-<br /> 3. Dinnyes A., Y. Dai, S. Jiang, and X. Yang, 201.<br /> 2000. High developmental rates of vitrified 8. Park S.E., H.M. Chung, K.Y. Cha, W.S.<br /> bovine oocytes following parthenogenetic Hwang, E.S. Lee, and J.M. Lim, 2001.<br /> activation, in vitro fertilization, and somatic Cryopreservation of ICR mouse oocytes:<br /> cell nuclear transfer. Biol. Reprod., 63(2): improved post-thawed preimplantation<br /> 513-518. development after vitrification using Taxol,<br /> 4. Eroglu A., M. Toner, L. Leykin, and T.L. a cytoskeleton stabilizer. Fertil Steril, 75(6):<br /> Toth, 1998. Cytoskeleton and polyploidy p. 1177-84.<br /> after maturation and fertilization of 9. Saunders K. M., J. E. Parks, 1999. Effects<br /> cryopreserved germinal vesicle-stage mouse of cryopreservation procedures on the<br /> oocytes. J Assist Reprod Genet, 15(7): 447- cytology and fertilization rate of in vitro-<br /> 454. matured bovine oocytes. Biol Reprod,<br /> 5. Fuchinoue K., N. Fukunaga, S. Chiba, Y. 61(1): 178-187.<br /> Nakajo, A. Yagi, and K. Kyono, 2004.<br /> 10. Shi W.Q., S.E. Zhu, D. Zhang, W.H. Wang,<br /> Freezing of human immature oocytes using<br /> G.L. Tang, Y.P. Hou, and S.J. Tian, 2006.<br /> cryoloops with Taxol in the vitrification<br /> Improved development by Taxol<br /> solution. J Assist Reprod Genet, 21(8): 307-<br /> pretreatment after vitrification of in vitro<br /> 309.<br /> matured porcine oocytes. Reproduction,<br /> 6. Martino A., N. Songsasen, S. P. Leibo, 131(4): 795-804.<br /> 1996. Development into blastocysts of<br /> <br /> <br /> EFFECTS OF TAXOL ON IN-VITRO MATURED<br /> BOVINE OOCYTE VITRIFICATION<br /> <br /> Nguyễn Thị Thương Huyền1, 2, Nguyễn Thành Trung1 , Nguyễn Vũ Hoàng Linh1,<br /> Lê Thành Long3, Hoàng Nghĩa Sơn3, Phan Kim Ngọc1<br /> (1)<br /> Ho Chi Minh city University of Science<br /> (2)<br /> Ho Chi Minh city University of Pedagogy<br /> (3)<br /> Intistute of Tropical Biology, VAST<br /> <br /> SUMMARY<br /> <br /> .The experiment was designed to assess the effectiveness of Taxol on cryopreserving bovine MII oocytes<br /> using straws as the carrier system for vitrification. Bovine matured oocytes were vitrified in droplets of<br /> cryoprotectants with or without 1 µM Taxol (droplet 1: TCM-199, 10% FBS, 5% FCS, 10% ethylene glycol<br /> (EG), 10% dimethyl sulfoxide (DMSO) for 45s; droplet 2: TCM-199, 10% FBS, 5% FCS, 20% ethylene<br /> glycol (EG), 20% dimethyl sulfoxide (DMSO), 0.5 M sucrose for 25s) on straws. After thawing, the oocytes<br /> were cultured in IVM medium in 2 hours and oocytes were assessed by ratio of survival oocytes (SO) to<br /> <br /> <br /> 304<br />  TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(3SE): 299-305<br /> <br /> vitrified oocytes (VO); survival oocytes (SO) to colected oocytes (CO) and the proportion of normal nuclear<br /> oocytes (NNO). The results showed that the ratio of SO to VO and SO to CO in Taxol groups were slightly<br /> higher (62.74 ± 2.74% vs. 59.81 ± 1.75% and 70.65 ± 2.44% vs. 67.66 ± 2.12%, P < 0.05); the ratio of NNO<br /> in both taxol-pretreatment groups and non-taxol-pretreatment groups (control) had no significant difference<br /> (78.14 ± 4.01% vs. 77.89 ± 2.13%, P > 0.05). The results of this experiment indicated that taxol pretreatment<br /> affects the survival ratio of vitrified bovine oocytes but there was no significant evidence on preventing<br /> abnormal nuclear oocytes.<br /> Keywords: Bovine oocyte, Taxol, cryopreservation, in vitro maturation, vitrification.<br /> <br /> Ngày nhận bài: 21-6-2012<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> 305<br />