Plumbagin cảm ứng một số đặc điểm Apoptosis của tế bào HepG2

TAP CHI SINH HOC 2014, 36(2): 247­252<br /> Plumbagin cảm ứng một số đặc điểm apoptosis<br />  DOI: 10.15625/0866­7160.2014­X<br /> <br /> <br /> <br /> PLUMBAGIN CẢM ỨNG MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM APOPTOSIS CỦA TẾ BÀO <br /> HepG2<br /> <br /> Bùi Đình Thạch1*, Lê Thành Long1, Hồ Nguyễn Quỳnh Chi3, Nguyễn Khắc Duy3, <br /> Đoàn Chính Chung2, Đỗ Minh Sĩ2, Nguyễn Hữu Hổ1, Ngô Kế Sương1, Hoàng Nghĩa Sơn1<br /> 1<br /> Viện Sinh học Nhiệt đới, Viên Hàn lâm KH & CN Việt Nam, *thachden78@yahoo.com<br /> 2<br /> Trường Đại học Khoa học tự nhiên, ĐHQG Tp. Hồ Chí Minh<br /> 3<br /> Trường Đại học Quốc tế, ĐHQG Tp. Hồ Chí Minh<br /> <br /> TÓM TẮT: Nghiên cứu được thực hiện nhằm xác định mối quan hệ giữa tác động kháng phân  <br /> bào của plumbagin và sự chết theo chương trình của tế bào ung thư biểu mô gan (dòng HepG2)  <br /> khi được xử  lí với plumbagin. Kết quả nghiên cứu cho thấy, mật độ  tế  bào giảm khi nồng độ <br /> plumbagin xử  lý tăng. Tế  bào HepG2 chết khi được xử  lý với plumbagin có một số  biểu hiện  <br /> của sự chết theo chương trình. Một số phương pháp sinh học phân tử được sử dụng để đánh giá  <br /> sự  chết theo chương trình của tế  bào HepG2. Kết quả  nhuộm nhân tế  bào HepG2 với thuốc  <br /> nhuộm acridine orange cho thấy tế  bào  ở  tất cả  các nồng độ  xử  lý đều chứa nhân cô đặc và  <br /> phân mảnh, đây là một đặc điểm quan trọng của sự chết theo chương trình. Phương pháp RT­<br /> PCR được sử  dụng để  đánh giá sự  biểu hiện của hai gene liên quan tới sự  chết theo chương <br /> trình là blc­2 và bax. Khi được xử  lý với plumbagin, sự biểu hiện  ở mức phiên mã của  bax có <br /> khuynh hướng tăng dần trong khi đó sự biểu hiện của  bcl­2 gần như không đổi, điều này chứng  <br /> tỏ plumbagin làm thay đổi sự cân bằng trong quá trình biểu hiện của gene  bax và gene bcl­2 của <br /> tế  bào HepG2. Kết quả  nghiên cứu của chúng tôi cho thấy, khi nồng độ  plumbagin xử lý càng  <br /> tăng, mức độ và tỷ lệ đứt gãy DNA của tế bào HepG2 càng lớn. Do đó, plumbagin có khả năng <br /> cảm ứng sự chết theo chương trình của tế bào HepG2.<br /> Từ khóa: Apoptosis, đứt gãy DNA, HepG2, kháng phân bào, plumbagin.<br /> <br /> MỞ ĐẦU bax, gene kháng apoptosis bcl­2 [11]. Ngoài ra <br /> chúng còn tác động lên các sản phẩm của gene  <br /> Plumbagin   (5­hydroxy­2­methyl­1,   4­<br /> naphthoquinone),   một   quinonoid   được   phân  được   điều   hoà   bởi   NF­ B   bao   gồm  IAP1, <br /> lập từ rễ của cây bạch hoa xà, là một nhân tố  XIAP, TF (nhân tố  khối u) và VEGF (nhân tố <br /> có biểu hiện hoạt tính kháng tế  bào ung thư  tăng trường từ tiểu cầu) [6]. Trong nghiên cứu <br /> [8]. Đặc tính quan trọng và phổ  biến của một  này,   chúng   tôi   tiến   hành   đánh   giá   khả   năng <br /> chất có khả  năng kháng tế bào ung thư là khả  cảm ứng apoptosis của plumbagin trên dòng tế <br /> năng   cảm   ứng   apoptosis   (chết   theo   chương   bào ung thư HepG2 thông qua những  biến đổi <br /> trình) hoặc gây kháng phân bào. Plumbagin đã  về  hình thái của nhân tế  bào như  sự  cô đặc  <br /> được chứng minh là có khả năng kháng một số  nhân,   sự   phân   mảnh   nhân   cũng   như   sự   cân <br /> dòng tế  bào ung thư  như  ung thư  vú [4], ung   bằng   trong   quá   trình   biểu   hiện   của   một   số <br /> thư  cổ tử cung [5], ung thư tiền liệt tuyến [1]   gene liên quan tới sự chết theo chương trình ở <br /> hay ung thư tuyến tuỵ [2]. Plumbagin tác động  mức phiên mã.<br /> lên   sự   tăng   sinh   của   các   tế   bào   thông   qua <br /> VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU<br /> nhiều con đường truyền tín hiệu và quá trình <br /> này được diễn ra bằng việc tác động lên sự  Nuôi cấy tế bào: tế  bào HepG2 được nuôi <br /> biểu hiện của nhiều gene khác nhau như  hệ  trong môi trường DMEM bổ sung 10% FBS và <br /> thống các gene liên quan tới quá trình apoptosis   1% Pen/Strep; tế  bào HepG2  được  cảm  ứng <br /> capase   1   đến   capase   12,   gene   tiền   apoptosis  bằng plumpagin  ở  các nồng độ  khác nhau 2,5  <br /> <br /> <br /> 247<br />  Bui Dinh Thach et al.<br /> <br /> µM, 5 µM, 10 µM và 20 µM; mật độ tế bào sẽ  chứa tế  bào được rửa bằng nước cất 2 lần. <br /> được   đánh   giá   sau   3   ngày   nuôi   cấy   bằng   Sau đó mẫu tế  bào được nhuộm với acridine  <br /> buồng đếm tế bào (Neubauer hemocytometer). orange 20µg/ml (Sigma) trong 30 phút. Lamen <br /> RT­PCR:  RNA tổng được tách chiết bằng  chứa tế  bào được rửa 2 lần với nước cất và  <br /> phương   pháp   sử   dụng   Trizol   (Intront);   mẫu  được quan sát dưới kính hiển vi huỳnh quang  <br /> RNA tổng được bảo quản trong nước DEPC ở  để  đánh giá sự  phân mảnh của DNA bộ  gene  <br /> ­80oC.   Phương   pháp   RT­PCR   được   sử   dụng  trong tế bào.<br /> để xác định sự biểu hiện của một số gene liên   Số   liệu   thu   được   từ   các   lô   thí   nghiệm <br /> quan   đến   quá   trình   apoptosis   như   bax  (mồi  được phân tích bằng “One way Anova”. Giá trị <br /> xuôi: 5’­GGCCCACCAGCTCTGAGCAGA­3’,  P≤0,05 được đánh giá là có ý nghĩa thống kê.<br /> mồi   ngược:   5’­<br /> KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN<br /> GCCACGTGGGCGTCCCAAAGT­3’),  bcl­2 <br /> (mồi   xuôi:   5’­GTGGAGGAGCTCTT  Ảnh hưởng của plumbagin lên sự tăng sinh <br /> CAGGGA­3’, mồi ngược: 5’­AGGCACCCAG   của tế bào HepG2<br /> GGTGATGCAA)   và   gene  beta­actin  (mồi <br /> Plumbagin   đã   được   chứng   minh   có   khả <br /> xuôi:   5’­GTGGGGCGCCCCAGGACCA­3’, <br /> năng ức chế sự tăng sinh của nhiều loại tế bào <br /> mồi   ngược:   5’­ <br /> ung thư  như  tế  bào ung thư  phổi [7], ung thư <br /> CTCCTTAATGTCACGCACGAT   T­3’).   Chu <br /> biểu bì [3]... thông qua việc cảm  ứng sự  chết <br /> kì phản  ứng: 420C trong 45 phút, 94oC trong 5 <br /> theo chương trình và làm thay đổi mật độ  của  <br /> phút, 40 chu kì: 94oC trong 45 giây, 56oC trong <br /> các tế  bào trên. Trong nghiên cứu này, tế  bào <br /> 45 giây, 72oC trong 45 giây và 72oC trong 10 <br /> HepG2 được cảm  ứng plumbagin  ở  các nồng <br /> phút. Sản phẩm khuếch đại của gene bax, bcl­<br /> độ khác nhau. Sau ba ngày nuôi cấy, mật độ tế <br /> 2, beta­actin có kích thước lần lượt là 479bp,  <br /> bào HepG2 giảm dần khi nồng độ  plumbagin <br /> 304bp và 516bp.<br /> cảm   ứng   tăng   dần.   Mật   độ   tế   bào   HepG2 <br /> Đánh giá sự  phân mảnh của nhân tế  bào:   trung   bình   nồng   độ   2,5   µM   plumbagin   là <br /> tế  bào  được  cố   định  bằng  paraformaldehyde   115,33×104 tế  bào/ml,  ở  nồng độ  này, mật độ <br /> 4% trong 30 phút và rửa bằng dung dịch PBS 2  tế  bào HepG2 tăng so với mật độ  tế  bào ban <br /> lần, mỗi lần 10 phút. Tế  bào được tăng tính  đầu (100×104  tế  bào/ml) sau 3 ngày cảm  ứng <br /> thấm bằng Triton X100 0,1% trong 30 phút và  plumbagin,   điều   đó   cho   thấy   nồng   độ <br /> được rửa 2 lần bằng dung dịch PBS, mỗi lần   plumbagin 2,5 µM chưa ảnh hưởng tới mật độ <br /> 10   phút.   Tế   bào   được   nhuộm   với   acridine  của tế  bào HepG2. Mật độ  trung bình của tế <br /> orange 20 µg/ml (Sigma) trong 30 phút và được  bào HepG2 giảm  ở  nồng độ  plumbagin 5 µM <br /> rửa   bằng   dung   dịch  PBS   2  lần,   mỗi   lần  10   (58×104  tế   bào/ml)   và   10   µM   (57,33×104  tế <br /> phút. Tế  bào được quan sát dưới kính hiển vi   bào/ml)   và   giảm   mạnh   ở   nồng   độ   20µM <br /> huỳnh quang để  đánh giá sự  phân mảnh của  (23,33×104 tế  bào/ml) (bảng 1). Hình 1 mô tả <br /> nhân tế bào. hình   thái   của   tế   bào   HepG2   ở   các   nồng   độ <br /> Comet   assay:  tế   bào   được   tách   bằng  plumbagin cảm ứng. Ở nhóm đối chứng, quần <br /> Trypsin­EDTA   0,25%   (Gibco);   tế   bào   đơn  thể  tế  bào HepG2 phát triển bình thường với <br /> được   huyền   phù   hóa   trong   LMP   agarose  mật độ  cao,  ở  nồng độ  2,5µM, plumbagin bắt <br /> (Sigma) 0,5% và được trải lên lamen; tế  bào  đầu  ức chế  sự  tăng sinh mật độ  của tế  bào  <br /> được  ly giải  bằng dung dịch  ly giải   (2,5 M  HepG2.  Ở  nồng độ  plumbagin 5µM và 10µM, <br /> NaCl;   0,1   M   EDTA,   10   mM   Tris,   1%   triton  mật độ  tế  bào thưa dần và  ở  nồng độ  20µM, <br /> X100, pH 13) trong vòng 1 giờ. Lamen chứa tế  plumbagin làm giảm mật độ tế bào mạnh nhất <br /> bào được điện di  ở  35V trong 20 phút. Lamen  (hình 1). <br /> <br /> Bảng 1. Mật độ tế bào HepG2 sau 3 ngày cảm ứng plumbagin ở các nồng độ khác nhau<br /> <br /> <br /> 248<br />  Plumbagin cảm ứng một số đặc điểm apoptosis<br /> <br /> Nồng độ plumbagin (µM)<br /> Mật độ tế <br /> Đối chứng 2,5 5 10 20<br /> bào (×104)<br /> 137,67±1,76a 115,33±1,45 b<br /> 58,00±1,00 c<br /> 57,33±1,20c 23,33±0,88d<br /> a,b,c,d: Khác biệt có ý nghĩa thống kê (P≤0,05).<br /> <br /> Để  xác  định  những biến  đổi  của  nhân <br /> trong     quá     trình     apoptosis,   phương     pháp  quá   trình   apoptosis   là   gene  bax  và  bcl­2 <br /> nhuộm đơn với thuốc nhuộm acridine orange  [11].   Họ   protein   Bcl­2   bao   gồm   các   protein <br /> được  áp dụng  trong việc đánh  giá  hình  thái   BAX và protein BCL­2 được mã hóa bởi các <br /> của  nhân [9].  Kết quả  nhuộm nhân cho thấy  gene họ  bcl­2. Sự  cân bằng giữa các protein <br /> nhóm tế  bào đối chứng có hình thái nhân bình  tiền apoptosis và protein kháng apoptosis xác <br /> thường đều, màng nhân liên tục và nhân không  định tế  bào sẽ  sống hay chết. Các thành viên <br /> có sự phân mảnh của nhân (hình 2A), trong khi   trong họ  Bcl­2 có chức năng như  là các điểm <br /> đó ở các nhóm xử lý plumbagin đều xuất hiện  kiểm soát quyết định các trạng thái của tế bào <br /> tế bào có sự phân mảnh của nhân. Nhân tế bào   [10].<br /> HepG2   được   cảm   ứng   plumbagin   bị   phân <br /> mảnh và phân tán trong tế  bào chất, quá trình <br /> phân  mảnh  của   nhân  tế   bào  HepG2   diễn  ra  <br /> càng mạnh khi nồng độ  plumbagin cảm  ứng <br /> càng tăng (hình 2).<br /> <br /> Phương   pháp   RT­PCR   được   áp  dụng  để <br /> đánh giá sự  biểu hiện một số  gene liên quan <br /> đến<br />  <br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 1. Tế bào HepG2. A: nhóm tế bào đối chứng. B, C, D, E: tế bào HepG2 được cảm ứng bởi <br /> plumbagin ở nồng độ 2,5, 5, 10, 20 µM.<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> 249<br />  Bui Dinh Thach et al.<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 2. Sự phân mảnh nhân tế bào HepG2. A: tế bào HepG2 không xử lý plumbagin có nhân <br /> nguyên vẹn, không phân mảnh. B, C, D, E: tế bào HepG2 được cảm ứng bởi plumbagin ở nồng <br /> độ 2,5, 5, 10, 20 µM. Quá trình phân mảnh của tế bào HepG2 diễn ra càng mạnh khi nồng độ <br /> plumbagin xử lý càng cao (mũi tên trắng). <br />  <br /> Kết quả  phân tích sự  biểu hiện của gene  tăng nồng độ plumbagin. Sự thay đổi trên dẫn  <br /> kháng   apoptosis  bcl­2  và   gene   tiền   apoptosis  tới cảm  ứng các tế  bào này đi vào quá trình  <br /> bax ở mức phiên mã cho thấy, sản phẩm phiên  apoptosis và biểu hiện một số  đặc điểm của  <br /> mã mRNA của gene  bax  biểu hiện tăng theo  quá trình apoptosis.<br /> nồng   độ   xử   lý   plumbagin,   trong   khi   đó,   sự  Kết quả  phân tích RT­PCR trên phù hợp <br /> biểu   hiện   mRNA   của   gene  bcl­2  gần   như  với các kết quả  đánh giá mức độ  phân mảnh <br /> không thay đổi ở các nồng độ plumbagin (hình  của tế bào chất, sự cô đặc nhiễm sắc chất và <br /> 3).  Ở nhóm đối chứng, sự biểu hiện của gene   sự  phân mảnh của nhân. Quá trình giảm biểu <br /> bcl­2 và gene bax được cân bằng, điều đó giúp  hiện các sản phẩm phiên mã của gene kháng <br /> tế  bào không đi vào quá trình apoptosis. Trong  apoptosis bcl­2 và tăng biểu hiện của gene tiền <br /> khi   đó,   ở   các   nhóm   tế   bào   được   cảm   ứng  apoptosis bax diễn ra tương  ứng với việc một <br /> plumbagin với các nồng độ  khác nhau, sự  cân  số  đặc điểm biến đổi hình thái của quá trình <br /> bằng trong quá trình biểu hiện của gene bcl­2  apoptosis như sự phân mảnh tế bào chất, sự cô <br /> và gene bax bị  thay đổi theo chiều hướng tăng  đặc   nhiễm   sắc   chất   và   sự   phân   mảnh   của  <br /> sự biểu hiện của gene bax ở mức phiên mã khi  nhân diễn ra càng mạnh.<br /> <br /> Bảng 2. Tỷ lệ (%) DNA đứt gãy trong đuôi và tỷ lệ chiều dài đuôi comet/chiều dài comet<br /> Nồng độ plumbagin (µM)<br /> Đối chứng 2,5 5 10 20<br /> Phần trăm DNA  12,46±0,72 a<br /> 32,96±1,47 b<br /> 46,99±3,64 c<br /> 48,66±3,12 c<br /> 65,32±2,56d<br /> trong đuôi comet<br /> Tỷ lệ chiều dài đuôi  0,19±0,01a 0,41±0,03b 0,55±0,03c 0,63±0,02c 0,76±0,04d<br /> comet/chiều dài <br /> comet<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> 250<br />  Plumbagin cảm ứng một số đặc điểm apoptosis<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 3. Sự biểu hiện của gene Bcl­2 và Bax ở mức phiên mã của tế bào HepG2 được cảm ứng  <br /> bởi plumbagin ở các nồng độ khác nhau.<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 4. Sự đứt gãy DNA nhân tế bào HepG2 được cảm ứng bởi plumbagin. A, B, C, D, E: hình <br /> ảnh huỳnh quang của tế bào HepG2 được nhuộm với Acridine Orange. A1, B1, C1, D1, E1: hình <br /> ảnh comet của tế bào HepG2 trong phân tích DNA đứt gãy. <br /> <br /> <br /> Phương pháp điện di tế  bào đơn được sử  đánh   giá   sự   phân   mảnh   của   nhân   tế   bào <br /> dụng để  đánh giá mức độ  đứt gãy DNA nhân  HepG2 khi được cảm ứng bởi plumbagin. Đây <br /> tế   bào   HepG2   khi   được   cảm   ứng   bởi   là những đặc điểm quan trọng liên quan tới sự <br /> plumbagin   (hình   4).   Phương   pháp   này   được  chết theo chương trình của tế  bào, quá trình <br /> đánh giá qua hai thông số  là tỷ  lệ  phần trăm   phân mảnh của nhân cũng như  quá trình đứt <br /> DNA trong đuôi comet và tỷ  lệ chiều dài đuôi  gãy DNA ở tế bào HepG2.<br /> comet/chiều dài comet. Tỷ lệ phần trăm DNA <br /> trong đuôi comet thể hiện lượng DNA đứt gãy  KẾT LUẬN<br /> và tỷ  lệ  chiều dài đuôi comet/chiều dài comet  Plumbagin cảm  ứng sự  biểu hiện các đặc <br /> thể  hiện mức độ  đứt gãy của DNA nhân tế  điểm hình thái cũng như thay đổi sự  cân bằng  <br /> bào. Kết quả cho thấy, khi nồng độ  càng cao,   trong biểu hiện một số gene liên quan tới quá <br /> lượng DNA đứt gãy trong nhân tế  bào HepG2   trình chết của tế bào HepG2.<br /> càng lớn (bảng 2), nồng độ  plumbagin 20 µM <br /> cảm  ứng lượng DNA đứt gãy nhiều nhất.  Ở  TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> nồng độ plumbagin 5 µM và 10 µM plumbagin, <br /> lượng DNA đứt gãy trong nhân tế  bào HepG2   1. Aziz M. H., Dreckschmidt N. E., Verma A. <br /> như  nhau. Kết quả   đánh giá tỷ  lệ  chiều dài  K.,   2008.  Plumbagin,   a   medicinal   plant­<br /> đuôi comet/chiều dài comet cho thấy, khi nồng  derived naphthoquinone, is a novel inhibitor <br /> độ plumbagin cảm  ứng tăng thì tỷ lệ này càng  of   the   growth   and   invasion   of   hormone­<br /> tăng  ở  tế  bào HepG2 (bảng 2), tỷ  lệ  này cao  refractory prostate cancer. Cancer Res,  68: <br /> nhất   ở   tế   bào   HepG2   được   cảm   ứng   bởi  9024­9032.<br /> plumbagin   nồng   độ   20  µM.   Trong  khi   đó,   ở  2. Chen  C. A.,  Chang  H. H., Kao C. Y., Tsai <br /> nồng   độ   5   µM   và   10   µM,   tỷ   lệ   này   tương  T. H., Chen Y. J., 2009. Plumbagin, isolated <br /> đương nhau. Kết quả  này cho thấy, khi nồng  from   Plumbago   zeylanica,   induces   cell <br /> độ   plumbagin   cảm   ứng   càng   tăng,   quá   trình  death   through   apoptosis   in   human <br /> phân mảnh DNA thành các đoạn nhỏ  diễn ra  pancreatic   cancer   cells.   Pancreatology,   9: <br /> càng   mạnh,   điều   này   phù   hợp   với   kết   quả  797­809.<br /> <br /> <br /> 251<br />  Bui Dinh Thach et al.<br /> <br /> 3. Hazra   B.,   Sarkar   R.,   Bhattacharyya   S.,  hydroxy­2­methyl­1,4­naphthoquinone) <br /> Ghosh   P.   K.,   Chel   G.,  Dinda   B.,   2002.  suppresses   NF­kappaB   activation   and   NF­<br /> Synthesis of plumbagin derivatives and their  kappaB­regulated   gene   products   through <br /> inhibitory   activities   against   Ehrlich   ascites  modulation of p65 and IkappaBalpha kinase <br /> carcinoma in vivo and Leishmania donovani  activation,   leading   to   potentiation   of <br /> Promastigotes  in   vitro.   Phytother   Res,  16:  apoptosis   induced   by   cytokine   and <br /> 133­137. chemotherapeutic   agents. J.  Biol.  Chem., <br /> 4. Kuo   P.   L.,   Hsu   Y.   L.,   Cho   C.   Y.,   2006.  281: 17023­17033. <br /> Plumbagin   induces   G2­M   arrest   and  9. Steve M. N., Christopher J. L., Leonard A. <br /> autophagy   by   inhibiting   the  L.,   2006.   Simultaneous   labeling   of <br /> AKT/mammalian   target   of   rapamycin  projecting   neurons   and apoptotic state, J. <br /> pathway in breast cancer cells. Mol Cancer  Neurosci Methods, 161(2): 281­284.<br /> Ther, 5:3209­3221 10. Van   Delft   M.   F., Wei   A.   H., Mason   K. <br /> 5. Nair S., Nair R. R., Srinivas P., Srinivas G.,  D., Vandenberg C. J., Chen L., Czabotar P. <br /> Pillai M. R., 2008. Radiosensitizing effects  E., Willis S. N., Scott C. L., Day C. L., Cory <br /> of   plumbagin   in   cervical   cancer   cells   is  S., Adams J. M.,  Roberts A. W., Huang D. <br /> through   modulation   of   apoptotic   pathway.  C.,   2006.  The   BH3   mimetic   ABT­737 <br /> Mol Carcinog, 47: 22­33. targets   selective   Bcl­2   proteins   and <br /> 6. Proudfoot   A.   E.,   2002.   Chemokine  efficiently induces apoptosis via Bak/Bax if <br /> receptors:   multifaceted   therapeutic   targets.  Mcl­1 is neutralized. Cancer Cell., 10: 389­<br /> Nat. Rev. Immunol., 2: 106­115. 99.<br /> 7. Rohini   G.,   Srinivasan   S.,   Firdaus   M.,   Raj  11. Yang H., Zhu Y. T., Cheng R., Shao M. Y., <br /> K.,   Mohammad   A.,   Chendil   D.,  2008.  Fu Z. S., Cheng L., Wang F. M. and Hu T., <br /> Anticancer   Mechanism   of   Plumbagin,   a  2010.  Lipopolysacchride­induced   dental <br /> Natural   Compound,   on   Non­small   Cell  pulp   cell   apoptosis   and   the   expression   of <br /> Lung   Cancer   Cells.  Anticancer   Research,  Bax and Bcl­2 in vitro. Brazilian Journal of <br /> 28: 785­792. Medical and Biological Research, 43: 1027­<br /> 1033.<br /> 8. Sandur S. K, Ichikawa H., Sethi G., Ahn K. <br /> S,   Aggarwal   B.   B.,   2006.   Plumbagin   (5­<br /> <br /> <br /> PLUMBAGIN INDUCES APOPTOSIS CHARACTERISTICS IN HepG2 CELLS<br /> <br /> Bui Dinh Thach1, Le Thanh Long1, Ho Nguyen Quynh Chi3, <br /> Nguyen Khac Duy3, Doan Chinh Chung2, Do Minh Si2, <br /> Nguyen Huu Ho1, Ngo Ke Suong1, Hoang Nghia Son1<br /> Institute of Tropical Biology, VAST<br /> 1<br /> <br /> 2<br /> University of Sciences, Ho Chi Minh city<br /> 3<br /> International University, Ho Chi Minh city<br /> <br /> SUMMARY<br /> <br /> This   study   is   to   investigate   the   relationship   between   anti­proliferative   activity   of   plumbagin   and <br /> apoptosis induction of plumbagin on HepG2 cancer cells. The results showed that plumbagin treated HepG2 <br /> cell density was decreased. The apoptotic morphologies were also observed in HepG2 cells after plumbagin <br /> <br /> <br /> 252<br />  Plumbagin cảm ứng một số đặc điểm apoptosis<br /> <br /> treatment.   Nucleus   staining,   RT­PCR   and   comet   assay   were   applied   to   study   apoptotic   morphologies   in <br /> HepG2 cells. Acridine Orange staining results demonstrated that fragmented HepG2 nucleus by plumbagin <br /> was one of the important proves for its   apoptotic induced characteristics.  Bax  transcript  expression was <br /> increased in plumbagin treated HepG2 cells. However, there was no difference of bcl­2 transcripts expression <br /> between plumbagin treated HepG2 and control, suggesting that plumbagin induced a change in  bax and bcl­2 <br /> transcripts   expression   of   HepG2.   Comet   assay   was   applied   to   measure   genomic   DNA   fragmentation   in <br /> HepG2 cells. Fragmented DNA percentage in comet tail and comet tail length were increased in HepG2  <br /> treating with higher plumbagin concentrations. In conclusion, plumbagin showed apoptotic induced activitiy <br /> through morphological changes  in HepG2 cells.  <br /> <br /> Keywords: Antiproliferative, apoptosis, DNA fragmentation, HepG2, plumbagin.<br /> <br /> Ngày nhận bài: 15­5­2013<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> 253<br />