Tách dòng và xác định trình tự gen mã hóa protein vỏ (CP) của virus gây bệnh xanh lùn (CLRDV) trên cây bông

Ngô Mạnh Dũng và Đtg<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> 119(05): 151 - 155<br /> <br /> TÁCH DÕNG VÀ XÁC ĐỊNH TRÌNH TỰ GEN MÃ HÓA PROTEIN VỎ (CP)<br /> CỦA VIRUS GÂY BỆNH XANH LÙN (CLRDV) TRÊN CÂY BÔNG<br /> Ngô Mạnh Dũng1*, Chu Hoàng Hà2, Lê Văn Sơn2<br /> 1<br /> <br /> Trường Đại học Sư phạm, Đại học Thái Nguyên<br /> 2<br /> Viện Công nghệ sinh học, VSAT<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Cây bông là loại cây trồng lấy sợi có tầm quan trọng bậc nhất trên thế giới. Trong khoảng 20 loại<br /> virus gây bệnh trên cây bông, bệnh xanh lùn là bệnh có thể gây thiệt hại nặng nề nhất trên thế giới.<br /> Nguyên nhân gây bệnh xanh lùn đã đƣợc xác định là do virus gây bệnh xanh lùn (Cotton leaf roll<br /> dwarf virus - CLRDV) thuộc họ Luteoviridae, chi Polerovirus gây ra. Trong nghiên cứu này,<br /> chúng tôi đã tiến hành tách dòng và giải trình tự gen mã hóa protein vỏ (CP) của virus gây bệnh<br /> xanh lùn trên cây bông ở Việt Nam, kích thƣớc gen đƣợc phân lập khoảng 606 bp. Trình tự gen CP<br /> phân lập từ CLRDV ở Việt Nam có độ tƣơng đồng 98,2- 99,2% so với các trình tự gen đƣợc công<br /> bố trên ngân hàng gen quốc tế.<br /> Từ khóa: Bệnh xanh lùn, cây bông, CP-CLRDV, E. coli DH5 , RT-PCR<br /> <br /> ĐẶT VẤN ĐỀ*<br /> Trên thế giới, cây bông đƣợc trồng ở nhiều<br /> nƣớc có điều kiện khí hậu nhiệt đới và cận<br /> nhiệt đới và là một trong những loại cây trồng<br /> lấy sợi quan trọng nhất. Trong khoảng 20 loại<br /> virus gây bệnh trên cây bông, bệnh xanh lùn<br /> là bệnh có thể gây thiệt hại nặng nề nhất nhất<br /> trên thế giới [1]. Bệnh xanh lùn đã đƣợc phát<br /> hiện tại nhiều nƣớc trồng bông thuộc Châu<br /> Phi, Châu Á và Nam Mỹ,…<br /> Đối với cây bông ở Việt Nam, bệnh xanh lùn<br /> là bệnh gây thiệt hại nhiều nhất. Bệnh đƣợc<br /> phát hiện lần đầu tiên tại Nha Hố (Ninh<br /> Thuận) vào năm 1984-1985 nhƣng chƣa gây<br /> hại đáng kể. Sau đó tác hại của bệnh tăng dần.<br /> Năm 1991, Ninh Thuận xảy ra đợt dịch đầu<br /> tiên, tại Nha Hố trên 80 ha trồng bông bị bệnh<br /> với tỉ lệ 50-100%, gây thiệt hại hơn 50% sản<br /> lƣợng bông.<br /> <br /> 2010, Distéfano sau khi nghiên cứu hoàn<br /> chỉnh trình tự bộ gen của virus bệnh xanh lùn<br /> trên cây bông, CLRDV, khẳng định đây là<br /> một thành viên mới của chi Polerovirus [5].<br /> Đến nay, đối với cây bông, biện pháp hiệu<br /> quả nhất là sử dụng công nghệ gen trong<br /> phòng chống, tạo ra các giống cây trồng có<br /> khả năng kháng bệnh. Trong nghiên cứu này,<br /> chúng tôi tiến hành tách dòng và giải trình tự<br /> gen mã hóa protein vỏ (CP) của virus gây<br /> bệnh xanh lùn trên cây bông nhằm tạo tiền đề<br /> cho những nghiên cứu tạo cây bông chuyển<br /> gen kháng bệnh virus xanh lùn sau này.<br /> VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP<br /> Vật liệu<br /> Nguồn bệnh virus: Lá bông nghi nhiễm bệnh<br /> xanh lùn do Viện Nghiên cứu và Phát triển<br /> cây bông Nha Hố cung cấp.<br /> <br /> Nguyên nhân gây bệnh xanh lùn là do virus<br /> gây ra. Năm 2005, Correa và cộng sự thông<br /> qua phân lập, xác định và so sánh trình tự của<br /> gen vỏ và một phần của gen RdRp đã khẳng<br /> định đƣợc virus gây bệnh xanh lùn là thuộc<br /> họ Luteoviridae, có khả năng xếp vào chi<br /> Polerovirus và đã đặt tên virus này là Cotton<br /> leafroll dwarf virus (CLRDV) [4]. Đến năm<br /> <br /> Các hóa chất sử dụng trong thí nghiệm đều là<br /> hóa chất tinh khiết dùng trong phòng thí<br /> nghiệm về sinh học phân tử (hóa chất của các<br /> hãng Sigma, Invitrogen, Fermentas…).<br /> <br /> *<br /> <br /> 5‟-CTCGAGTTTTGGATTGTGGAATTGG-3‟<br /> <br /> Tel: 0979 722412, Email: dungmnsptn@gmail.com<br /> <br /> Trình tự các mồi để phân lập gen:<br /> CP-CLRDV-F:<br /> 5‟-AATTCATGAATACGGTCGTGGGTA-3‟<br /> CP-CLRDV-R:<br /> <br /> 151<br /> <br /> Ngô Mạnh Dũng và Đtg<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> Phƣơng pháp<br /> Tách chiết RNA tổng số thực hiện theo<br /> phƣơng pháp của Napoli và cộng sự (1990).<br /> cDNA đƣợc tổng hợp theo kít “RevertAidTM<br /> H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit”<br /> (Fermentas).<br /> Phản ứng cDNA thực hiện trong thể tích 20<br /> l gồm có các thành phần sau: 10 ng - 5 g<br /> RNA tổng số; 250ng mồi ngẫu nhiên. Bổ<br /> sung nƣớc khử ion có xử lý DEPC tới thể tích<br /> 12 l. Ủ 70°C/5 phút, sau đó đặt vào đá. Tiếp<br /> tục bổ sung các thành phần vào ống phản ứng<br /> trên: 4 l đệm RT 5X tổng hợp cDNA; 1 l<br /> riboLock Ribonuclease inhibitor (20u/ l); 2<br /> l dNTP (10 mM). Hỗn hợp sau đó đảo và ly<br /> tâm nhẹ; ủ 25°C/5 phút. Tiếp tục bổ sung 1 l<br /> enzyme RevertAid (200/ l) và thực hiện một<br /> chu trình nhiệt nhƣ sau: 25°C/10‟, 42°C/60‟,<br /> 72°C/10‟, 40°C/10‟.<br /> Các đoạn gen quan tâm<br /> , chu kỳ nhiệt: 94°C /3‟, 25 chu kỳ<br /> gồm 94°C/40s, từ 50-56°C /40s tùy thuộc vào<br /> nhiệt độ bắt cặp của từng cặp mồi,<br /> 72°C/1‟30s, 72°C/10‟ và kết thúc ở 4°C. Sản<br /> phẩm đƣợc kiểm tra trên gel agarose 0,8 % .<br /> động ABI PRIM<br /> 3100 Avant Genetic<br /> Analyzer bằng cách sử dụng bộ hoá chất<br /> bigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing.<br /> KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN<br /> Nhân bản gen của CLRDV bằng RT-PCR<br /> RNA tổng số từ mẫu bông nghi nhiễm bệnh<br /> sau khi tách chiết đƣợc sử dụng làm khuôn để<br /> tổng hợp cDNA nhờ enzyme phiên mã ngƣợc<br /> (Reverse transcriptase) với cặp mồi ngẫu<br /> nhiên dài 6 nucleotide (random primer) (theo<br /> bộ Kit của Fermentas). cDNA sau đó đƣợc<br /> làm mẫu cho phản ứng PCR khuếch đại các<br /> đoạn DNA mang gen mã hoá cho protein vỏ<br /> (CP) của CLRDV với cặp mồi đƣợc thiết kế<br /> đặc hiệu.<br /> Kết quả điện di sản phẩm RT-PCR trên hình 1<br /> cho thấy sản phẩm RT-PCR rất đặc hiệu, chỉ<br /> 152<br /> <br /> 119(05): 151 - 155<br /> <br /> cho một phân đoạn DNA duy nhất với kích<br /> thƣớc tƣơng ứng tính toán lý thuyết. Để có<br /> thể kết luận chính xác các phân đoạn này có<br /> phải là của virus CLRDV hay không, các<br /> phân đoạn này tiếp tục đƣợc dòng hóa bằng<br /> cách gắn vào vector pBT và biến nạp vào tế<br /> bào khả biến E.coli DH5 với mục đích lựa<br /> chọn những dòng khuẩn lạc dƣơng tính, tách<br /> chiết plasmid để xác định trình tự.<br /> bp<br /> <br /> M 1<br /> <br /> 2<br /> <br /> 750<br /> 500<br /> <br /> Hình 1. Kết quả điện di sản phẩm RT-PCR<br /> nhân gen CP của CLRDV<br /> M: Marker 1kb; 1: CLRDV; 2: ĐC âm<br /> <br /> Dòng hóa gen vào vector pBT<br /> Sản phẩm RT-PCR sau khi thôi gel và gắn<br /> vào vector pBT đƣợc biến nạp vào tế bào khả<br /> biến E. coli DH5 . Dựa vào phƣơng pháp<br /> chọn lọc khuẩn lạc xanh trắng và colonyPCR, những dòng khuẩn lạc dƣơng tính đã<br /> đƣợc lựa chọn để tinh sạch phục vụ cho việc<br /> đọc trình tự.<br /> pUC18F/pUC18R là cặp mồi nằm trên vector<br /> pBT, nếu đoạn gen đƣợc chèn vào đúng vị trí<br /> của plasmid thì theo lý thuyết sản phẩm<br /> colony-PCR chọn dòng pBT/CP-CLRDV là<br /> 779 bp (615+164) và so với đối chứng âm<br /> pBT là 164 bp.<br /> Sản phẩm colony-PCR đƣợc điện di ở hình 2<br /> cho thấy, các phân đoạn thu đƣợc cũng có<br /> kích thƣớc tƣơng ứng với tính toán lý thuyết<br /> đã chứng tỏ việc dòng hóa gen vào vector<br /> pBT đã thành công.<br /> Chúng tôi tiếp tục lựa chọn một dòng dƣơng<br /> tính nuôi lỏng để tách chiết plasmid phục vụ<br /> đọc trình tự.<br /> <br /> Ngô Mạnh Dũng và Đtg<br /> <br /> bp<br /> <br /> M 1 2 3<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> 4 5<br /> <br /> 1000<br /> 750<br /> <br /> Hình 2. Kết quả điện di sản phẩm colony-PCR<br /> chọn dòng pBT/CP-CLRDV<br /> M. marker 1kb. 1-4: các khuẩn lạc; 5: ĐC âm<br /> <br /> Xác định trình tự gen của CLRDV<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> 31<br /> 31<br /> 31<br /> 61<br /> 61<br /> 61<br /> 91<br /> 91<br /> 91<br /> 121<br /> 121<br /> 121<br /> 151<br /> 151<br /> 151<br /> 181<br /> 181<br /> 181<br /> 211<br /> 211<br /> 211<br /> <br /> 119(05): 151 - 155<br /> <br /> Gen đƣợc đọc trình tự trên máy đọc tự động<br /> ABI PRIMS 3100 Avant Genetic Analyzer<br /> bằng cách sử dụng bộ hoá chất sinh chuẩn<br /> BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing.<br /> Sau khi đọc trình tự, trình tự này đƣợc so<br /> sánh trong BLAST của NCBI. Kết quả cho<br /> thấy, đoạn gen phân lập đƣợc là đoạn gen CP<br /> của virus CLRDV.<br /> Kết quả đọc trình tự gen CP của dòng virus<br /> CLRDV-Nha Hố và so sánh với các trình tự<br /> gen của virus CLRDV đã công bố trên ngân<br /> hàng gen thế giới đƣợc thể hiện ở hình 3.<br /> Trình tự gen CP phân lập từ CLRDV ở Việt<br /> Nam có độ tƣơng đồng với các trình tự gen<br /> công bố trên 98%. Trình tự gen CP này giống<br /> 98,2% so với trình tự CP-CLRDV ở<br /> Aghentina và 99,2% trình tự gen CP-CLRDV<br /> ở Braxin.<br /> <br /> 10<br /> 20<br /> 30<br /> ------------------+-------------------+-------------------+A T G A A T A C G G T C G T G G G T A G A A G A A C G A T C CP-CLRDV-Agh<br /> A T G A A T A C G G T C G T G G G T A G A A G A A C G A T T CP-CLRDV Bra<br /> A T G A A T A C G G T C G T G G G T A G A A G A A C G A T T CP-CLRDV VN<br /> 40<br /> 50<br /> 60<br /> ------------------+-------------------+-------------------+A A T G G A A G A A G A C G A C C A C G T A G G C G C A A C CP-CLRDV-Agh<br /> A A T G G A A G A A G A C G A C C A C G T A G G C G C A A C CP-CLRDV Bra<br /> A A T G G A A G A A G A C G A C C A C G T A G G C G C A A C CP-CLRDV VN<br /> 70<br /> 80<br /> 90<br /> ------------------+-------------------+-------------------+A G G C G T C G G C A A A A T C A G C C A G T G G T T G T G CP-CLRDV-Agh<br /> A G G C G T C G G C A A A A T C A G C C A G T G G T T G T G CP-CLRDV Bra<br /> A G G C G T C G G C A A A A T C A G C C A G T G G T T G T G CP-CLRDV VN<br /> 100<br /> 110<br /> 120<br /> ------------------+-------------------+-------------------+G T C C A A G C C C C T C G G A A C A C A C A A C G C A G A CP-CLRDV-Agh<br /> G T C C A A G C C C C T C G G A A C A C A C A A C G C A G A CP-CLRDV Bra<br /> G T C C A A G C C C C T C G G A A C A C A C A A C G C A G A CP-CLRDV VN<br /> 130<br /> 140<br /> 150<br /> ------------------+-------------------+-------------------+A G A C G A C G A A G A C G A G G A G G T C G T A A T A G G CP-CLRDV-Agh<br /> A G A C G A C G A A G A C G A G G A G G T C G T A A T A G G CP-CLRDV Bra<br /> A G A C G A C G A A G A C G A G G A G G T C G T A A T A G G CP-CLRDV VN<br /> 160<br /> 170<br /> 180<br /> ------------------+-------------------+-------------------+A C A G G A G G A C G C A T T C C T G G A G G A C C A G G A CP-CLRDV-Agh<br /> A C A G G A G G A C G C A T T C C T G G A G G A C C A G G A CP-CLRDV Bra<br /> A C A G G A G G A C G C A T T C C T G G A G G A C C A G G A CP-CLRDV VN<br /> 190<br /> 200<br /> 210<br /> ------------------+-------------------+-------------------+G C T T C A A G C G A G A C A T T T G T T T T C T C A A A A CP-CLRDV-Agh<br /> G C T T C A A G C G A G A C A T T T G T T T T C T C A A A A CP-CLRDV Bra<br /> G C T T C A A G C G A G A C A T T T G T T T T C T C A C A A CP-CLRDV VN<br /> 220<br /> 230<br /> 240<br /> ------------------+-------------------+-------------------+G A C A G T C T C T C G G G A A G T T C C T C A G G A T C A CP-CLRDV-Agh<br /> G A C A G T C T C T C G G G A A G T T C C T C A G G A T C A CP-CLRDV Bra<br /> G A C A G T C T C T C G G G A A G T T C C T C A G G A T C A CP-CLRDV VN<br /> 250<br /> 260<br /> 270<br /> ------------------+-------------------+-------------------+-<br /> <br /> 153<br /> <br /> Ngô Mạnh Dũng và Đtg<br /> 241<br /> 241<br /> 241<br /> 271<br /> 271<br /> 271<br /> 301<br /> 301<br /> 301<br /> 331<br /> 331<br /> 331<br /> 361<br /> 361<br /> 361<br /> 391<br /> 391<br /> 391<br /> 421<br /> 421<br /> 421<br /> 451<br /> 451<br /> 451<br /> 481<br /> 481<br /> 481<br /> 511<br /> 511<br /> 511<br /> 541<br /> 541<br /> 541<br /> 571<br /> 571<br /> 571<br /> 601<br /> 601<br /> 601<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> 119(05): 151 - 155<br /> <br /> A T C A C G T T C G G G C C G T C T T T A T C A G A T T G C CP-CLRDV-Agh<br /> A T C A C G T T C G G G C C G T C T T T A T C A G A T T G C CP-CLRDV Bra<br /> A T C A C G T T C G G G C C G T C T T T A T C A G A T T G C CP-CLRDV VN<br /> 280<br /> 290<br /> 300<br /> ------------------+-------------------+-------------------+C C G G C A T T C A G C A A T G G A A T A C T C A A G G C C CP-CLRDV-Agh<br /> C C G G C A T T C A G C A A T G G A A T G C T C A A G G C C CP-CLRDV Bra<br /> C C G G C A T T C A G C A A T G G A A T G C T C A A G G C C CP-CLRDV VN<br /> 310<br /> 320<br /> 330<br /> ------------------+-------------------+-------------------+T A C C A T G A A T A T A A G A T C T C A A T G G T C T T A CP-CLRDV-Agh<br /> T A C C A T G A A T A T A A G A T C T C A A T G G T C T T A CP-CLRDV Bra<br /> T A C C A T G A A T A T T A G A T C T C A A T G G T C T T A CP-CLRDV VN<br /> 340<br /> 350<br /> 360<br /> ------------------+-------------------+-------------------+T T G G A G T T C A T C T C C G A G G C C T C T T C A A C A CP-CLRDV-Agh<br /> T T G G A G T T C A T C T C C G A G G C C T C T T C A A C A CP-CLRDV Bra<br /> T T G G A G T T C A T C T C C G A G G C C T C T T C A A C A CP-CLRDV VN<br /> 370<br /> 380<br /> 390<br /> ------------------+-------------------+-------------------+T C C T C C G G T T C C A T C T C T T A C G A A G T G G A T CP-CLRDV-Agh<br /> T C C T C C G G T T C C A T C T C T T A C G A A G T G G A T CP-CLRDV Bra<br /> T C C T C C G G T T C C A T C T C T T A C G A A G T G G A T CP-CLRDV VN<br /> 400<br /> 410<br /> 420<br /> ------------------+-------------------+-------------------+C C A C A C T G T A A A T T G T C A A C C C T A T C C T C C CP-CLRDV-Agh<br /> C C A C A C T G T A A A T T G T C A A C C C T A T C C T C C CP-CLRDV Bra<br /> C C A C A C T G T A A A T T G T C A A C C C T A T C C T C C CP-CLRDV VN<br /> 430<br /> 440<br /> 450<br /> ------------------+-------------------+-------------------+A C G A T T A A C A A A T T C G G A A T C A C C A A G A A T CP-CLRDV-Agh<br /> A C G A T T A A C A A A T T C G G A A T C A C C A A G A A C CP-CLRDV Bra<br /> A C G A T T A A C A A A T T C G G A A T C A C C A A G A A C CP-CLRDV VN<br /> 460<br /> 470<br /> 480<br /> ------------------+-------------------+-------------------+G G G A G G A A G C A A T T T G C G G C G T C T T T C A T C CP-CLRDV-Agh<br /> G G G A G G A A G C A A T T T G C G G C G T C T T T C A T C CP-CLRDV Bra<br /> G G C A G G A A G C A A T G T G C G G C G T C T T T C A T C CP-CLRDV VN<br /> 490<br /> 500<br /> 510<br /> ------------------+-------------------+-------------------+A A T G G A C A G G A A T G G C A T G A C A C C T C C G A G CP-CLRDV-Agh<br /> A A T G G A C A G G A A T G G C A T G A C A C C T C C G A G CP-CLRDV Bra<br /> A A T G G A C A G G A A T G G G A T G A C A C C T C C G A G CP-CLRDV VN<br /> 520<br /> 530<br /> 540<br /> ------------------+-------------------+-------------------+G A C C A A T T C A G A A T C T T A T A C A A A G G C A A T CP-CLRDV-Agh<br /> G A C C A G T T C A G A A T C T T A T A T A A A G G C A A T CP-CLRDV Bra<br /> G A C C A G T T C A G A A T C T T A T A T A A A G G C A A T CP-CLRDV VN<br /> 550<br /> 560<br /> 570<br /> ------------------+-------------------+-------------------+G G T T C C T C G T C G A T A G C T G G C T C T T T T A A G CP-CLRDV-Agh<br /> G G T T C C T C G T C G A T A G C T G G C T C T T T T A G G CP-CLRDV Bra<br /> G G T T C C T C G T C G A T A G C T G G C T C T T T T A G G CP-CLRDV VN<br /> 580<br /> 590<br /> 600<br /> ------------------+-------------------+-------------------+G T C A C A A T T C G G T G C C A A T T C C A C A A T C C A CP-CLRDV-Agh<br /> G T C A C A A T T C G G T G C C A A T T C C A C A A T C C A CP-CLRDV Bra<br /> G T C A C A A T T C G G T G C C A A T T C C A C A A T C C A CP-CLRDV VN<br /> -----------A A A T A G<br /> CP-CLRDV-Agh<br /> A A A T A G<br /> CP-CLRDV Bra<br /> A A A T A G<br /> CP-CLRDV VN<br /> <br /> Hình 3. Kết quả đọc trình tự và so sánh gen CP-CLRDV phân lập ở Việt Nam (CP-CLRDV VN) với các<br /> trình tự đã được công bố ở Braxin (CP-CLRDV Bra) và Aghentina (CP-CLRDV Agh).<br /> <br /> 154<br /> <br /> Ngô Mạnh Dũng và Đtg<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> KẾT LUẬN<br /> Gen mã hóa protein vỏ (CP) của virus gây<br /> bệnh xanh lùn trên cây bông ở Việt Nam đã<br /> đƣợc phân lập với kích thƣớc 779 bp. Trình tự<br /> gen CP phân lập từ CLRDV ở Việt Nam có<br /> độ tƣơng đồng 98,2-99,2% so với các trình tự<br /> gen đƣợc công bố trên ngân hàng gen quốc tế.<br /> TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> 1. Brown J K, (1992), Viral Diseases, In: Hillocks<br /> R J (ed.) Cotton Diseases, CBA International,<br /> Wallingford, 275-329.<br /> 2. Cauquil J and Follin J C, (1983), Cotton disease<br /> attributed to viruses or mycoplasmas in Africa<br /> south of the Sahara and in the rest of the world,<br /> Coton et Fibres Tropicales 38, 293-317.<br /> 3. Chaudhry MA, (2002), Impact of Genetically<br /> Engineered Cotton in the World, 2nd Meeting of the<br /> Asian Cotton Research and Development Network<br /> Tashkent, Uzbekistan, November 14-16, 2002.<br /> <br /> 119(05): 151 - 155<br /> <br /> 4. Correa R L, Silva T F, Simoes-Araujo J L,<br /> Barroso P A V, Vidal M S, Vaslin M F S, (2005),<br /> Molecular characterization of a virus from the<br /> family Luteoviridae associated with cotton blue<br /> disease, Arch Virol, 150(7),1357-67.<br /> 5. Distéfano A J, Kresic I B, Hopp H E (2010),<br /> The complete genome sequence of a virus<br /> associated with cotton blue disease, cotton leafroll<br /> dwarf virus, confirms that it is a new member of<br /> the genus Polerovirus. Archives of Virology<br /> (155), 1849-1854.<br /> 6. Junior Osme'rio Pupim, Ivan Schuster, Ronald<br /> Barth Pinto, Ely Pires, Jean-Louis Belot, Piere<br /> Silvie, Luiz Gonzaga Chitarra, Lu‟cia Vieria<br /> Hoffmann and Paulo Barroso, (2008), Inheritance<br /> of resistance to cotton blue disease, Pesq Agropec<br /> Bras 43 (5), 661-665.<br /> 7. Miller WA, Brown MC, Wang S (1997), New<br /> punctuation for the genetic code: luteovirus gene<br /> expression, Seminars in Virology 8, 3-13.<br /> 8. Zhang BH, Fanglin, Yao CB, Wang KB (2000),<br /> “Recent progress in cotton biotechnology and<br /> gentic engineering in China”, Current Science,<br /> 79(1), 37 - 44.<br /> <br /> SUMMARY<br /> CLONING AND SEQUENCING OF THE COAT PROTEIN GENE (CP)<br /> OF COTTON LEAFROLL DWARF VIRUS (CLRDV)<br /> Ngo Manh Dung1*, Chu Hoang Ha2, Le Van Son2<br /> 1<br /> <br /> College of Education - TNU<br /> Insitue of Biotechnology, VAST<br /> <br /> 2<br /> <br /> Cotton (Gossypium hirsutum L.) is an important fiber crop in the world. There are about 20<br /> different viruses cause disease on cotton have been found in the world. Cotton blue disease caused<br /> by Cotton leaf roll dwarf virus (CLRDV, Genus: Polerovirus, Family: Luteoviridae) is a viral<br /> disease of the the most severe damage. In this study, we conducted cloning and sequencing of coat<br /> protein (CP) gene of blue dwarf virus from cotton in Vietnam, gene size about 606 bp. CP gene<br /> sequences isolated from CLRDV in Vietnam have similarities of 98.2 to 99.2% compared with the<br /> published gene sequences on GenBank.<br /> Keywords: leafroll dwarf virus, cotton, CP-CLRDV, E. coli DH5 , RT-PCR<br /> <br /> Ngày nhận bài:22/4/2014; Ngày phản biện:29/4/2014; Ngày duyệt đăng: 5/5/2014<br /> Phản biện khoa học: PGS.TS Nguyễn Thị Tâm – Trường Đại học Sư phạm - ĐHTN<br /> *<br /> <br /> Tel: 0979 722412, Email: dungmnsptn@gmail.com<br /> <br /> 155<br /> <br />