Tách protein có hoạt tính kháng tế bào ung thư từ nọc rắn cạp nong Bungarus fasciatus phân bố ở Vĩnh Phúc

TẠP CHÍ HÓA HỌC 57(2e1,2) 95-99 THÁNG 4 NĂM 2019<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Tách protein có hoạt tính kháng tế bào ung thư từ nọc rắn cạp nong<br /> Bungarus fasciatus phân bố ở Vĩnh Phúc<br /> Trần Vũ Thiên1,2, Phạm Đình Chương3, Phùng Văn Trung4, Nguyễn Cửu Khoa1,5,<br /> Utkin Yuri Nicolaevich6, Hoàng Ngọc Anh1,5*<br /> 1<br /> Học viện Khoa học và Công nghệ, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam (VAST), Việt Nam<br /> 2<br /> Trường Đại học Trà Vinh, Việt Nam<br /> 3<br /> Đại học Tôn Đức Thắng, Việt Nam<br /> 4<br /> Trung tâm Nghiên cứu và Chuyển giao công nghệ, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam (VAST)<br /> 5<br /> Viện Khoa học Vật liệu Ứng dụng, VAST, Việt Nam<br /> 6<br /> Viện Sinh hóa hữu cơ Shemyakin-Ovchinnikov, Viện Hàn lâm Khoa học Nga<br /> Đến Tòa soạn 31-01-2019; Chấp nhận đăng 15-3-2019<br /> <br /> <br /> Abstract<br /> The crude venom of Bungarus fasciatus was separated into five fractions by column chromatography on Superdex<br /> HR 75 column. Physiological characterization showed that at the dose 10 µg/mL after 24 h, 48 h and 72 h, crude venom<br /> and, fraction 3 have cytotoxicity effect (MCF7 and A549 cell lines). The fraction 3 was then separated into 4 sub-fractions<br /> (3.1; 3.2; 3.3; 3.4) by RP-HPLC on C18 column. The cytotoxicity of crude venom, fraction 3, and 4 sub-fractions (3.1;<br /> 3.2; 3.3; 3.4) were tested using two cell lines: breast cancer (MCF7) and lung cancer (A549) cell lines. The results<br /> indicated that crude venom, fraction 3, and subfractions 3.3 have cytotoxicity at dose 10 µg/mL, especially cytotoxicity<br /> effect of them clearly at dose 50 µg/mL and 100 µg/mL. Further study showed that the protein (PLA2) isolated from<br /> subfractions 3.3.1 possessed a molecular mass 13090 Da.<br /> Keywords. Snake venom, Bungarus fasciatus, Chromatography, Cytotoxicity effect, Mass-spectrometry.<br /> <br /> <br /> 1. MỞ ĐẦU Từ những nghiên cứu trên cho thấy tiềm năng<br /> chống ung thư của nọc rắn cạp nong B. fasciatus là rất<br /> Hiện nay, xu thế nghiên cứu các độc tố từ các loài lớn. Điều này rất có ý nghĩa trong việc điều trị ung<br /> động vật, nhất là nọc rắn để điều trị ung thư đang rất thư bằng những hợp chất tự nhiên. Những hợp chất<br /> phát triển. Trên thế giới đã có nhiều nghiên cứu về này có hiệu quả cao hơn là những phương pháp xạ trị<br /> khả năng kháng ung thư của nọc rắn Bungarus và đem lại hy vọng cho những bệnh nhân ung thư.<br /> fasciatus như: Một loại L-amino acid từ nọc rắn cạp Tiếp theo những nghiên cứu nọc rắn cạp nong B.<br /> nong tại tỉnh Quảng Tây - Trung Quốc có tên gọi BF- fasciatus Việt Nam, trong bài báo này chúng tôi trình<br /> LAAO, chúng gây độc đối với tế bào ung thư phổi ở bày những nghiên cứu về protein có khả năng kháng<br /> người (A549) trong mô hình in vitro [1]. BF-CT1, một tế bào ung thư tách từ phân đoạn 3 nọc rắn cạp nong<br /> protein được phân lập trong nọc rắn cạp nong, chúng Vĩnh Sơn (Vĩnh Phúc) nhằm tìm kiếm những ứng<br /> gây độc tế bào (cytotoxicity) trong các mô hình thí dụng mới của nó trong y dược.[5]<br /> nghiệm in vitro và in vivo. Ở mô hình thử nghiệm in<br /> vivo trên tế bào ung thư cổ tử cung ở chuột (EAC), 2. NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN<br /> BF-CT1 đã làm giảm tế bào ung thư đáng kể thông CỨU<br /> qua quá trình đào thải tế bào chết apoptosis so với<br /> nhóm chứng không được điều trị [2]. Cathelicidin-BF 2.1. Nguyên liệu<br /> (BF-30) là một loại peptide kháng khuẩn được phân<br /> lập từ nọc rắn cạp nong B. fasciatus, nó có khả năng 2.1.1. Nọc rắn<br /> kháng tế bào ung thư, chống lại sự di căn và sự hình<br /> thành mạch máu nuôi dưỡng khối u ác tính.[3,4] Nọc rắn cạp nong được thu mua từ Vĩnh Sơn (Vĩnh<br /> <br /> <br /> 95<br /> TCHH, 57(2e1,2), 2019 Hoàng Ngọc Anh và cộng sự<br /> <br /> Phúc) như trong bài.[5] Nọc được đông khô và bảo Mẫu thử nghiệm là các phân đoạn và nọc thô từ rắn<br /> quản ở -20 oC cho đến khi tiến hành nghiên cứu. cạp nong tại Vĩnh Sơn. Sau khi sắc kí và đông khô<br /> được chứa trong các tube 1,5 mL. Pha nọc rắn trên<br /> 2.1.2. Tế bào ung thư với 1 mL PBS 1X trong tủ cấy vô trùng, lắc đều và<br /> lọc qua màng lọc. Nọc rắn trước và sau khi hòa tan<br /> Tế bào ung thư được sử dụng là dòng tế bào ung thư đều được bảo quản trong tủ lạnh ở 4 oC. Khi thí<br /> vú (MCF7) và tế bào ung thư phổi (A549) mua từ nghiệm, pha mẫu với eDMEM bổ sung 2% FBS + 1%<br /> ngân hàng tế bào Mỹ (American Type Culture PS và thử nghiệm ở các giếng đã cấy sẵn tế bào. Ủ<br /> Collection) được vận chuyển về và bảo quản với nhiệt các đĩa ở tủ nuôi cấy, thực hiện khảo nghiệm MTT (3-<br /> độ -96 oC trong nitrogen lỏng ở phòng thí nghiệm (4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium<br /> trường Đại học Quốc tế - Đại học Quốc gia thành phố bromide sau 24 h, 48 h và 72 h.<br /> Hồ Chí Minh.<br /> Bảng 1: Tên các phân đoạn và nồng độ<br /> 2.2. Phương pháp tách và khảo sát tác động kháng cần thử nghiệm<br /> tế bào ung thư của các phân đoạn thứ cấp từ phân<br /> Nồng độ cần<br /> đoạn 3 Tên phân đoạn<br /> thử nghiệm<br /> 2.2.1. Phương pháp tách các phân đoạn thứ cấp từ 1 µg/mL<br /> phân đoạn 3 BF1_VS - BF5_VS 10 µg/mL<br /> Nọc thô BF_VS 50 µg/mL<br /> Để thu các phân đoạn thứ cấp từ phân đoạn 3, chúng 100 µg/mL<br /> tôi đã tiến hành sắc ký lỏng cao áp pha đảo phân đoạn 1 µg/mL<br /> này trên cột phân tích Jupiter C18 (4,6 x 250 mm). 10 µg/mL<br /> BF_3.1_VS - BF_3.4_VS<br /> Cột được rửa bằng gradient tuyến tính của các dung 50 µg/mL<br /> dịch sau: A là 0,1 % TFA trong nước và B là 0,1 100 µg/mL<br /> %TFA trong acetonitril. Tốc độ rửa cột là 1 ml/phút.<br /> Thời gian rửa cột từ 15 % đến 45 % B là 60 phút, kết 2.2.4. Phương pháp khảo nghiệm MTT<br /> quả thu được 4 phân đoạn. Sự có mặt của các<br /> polypeptid và protein trong các phân đoạn sắc ký Thực hiện các thao tác vô trùng cơ bản. Cho đĩa 96<br /> được xác định theo mật độ quang tại bước sóng 254 giếng vào tủ cấy vô trùng, lần lượt cho 10 µL thuốc<br /> nm. Các phân đoạn thứ cấp thu được đem đông khô thử MTT (nồng độ ban đầu 5 mg/mL) vào mỗi giếng<br /> và dùng để khảo sát tác dụng kháng tế bào ung thư theo thứ tự từ trái sang phải và ủ trong tủ nuôi tế bào<br /> của chúng. 4 h. Sau 4 h, tiến hành hút toàn bộ môi trường trong<br /> mỗi giếng bằng micropipette. Hút 100 µL DMSO vào<br /> 2.2.2. Quy trình cấy tế bào vào đĩa 96 giếng mỗi giếng, trộn đều để hòa tan tinh thể formazan trong<br /> mẫu và đọc kết quả ở bước sóng 595 nm. Thực hiện<br /> Thực hiện các thao tác vô trùng cơ bản. Cho bình nuôi lặp lại khảo nghiệm trên 3 lần cho mỗi loại tế bào.<br /> tế bào vào tủ cấy vô trùng, hút bỏ toàn bộ môi trường<br /> cũ. Sau đó, rửa bề mặt nuôi cấy bằng 5 mL PBS 1X 2.3. Phương pháp xác định khối lượng phân tử của<br /> và cắt các tế bào ra khỏi bề mặt nuôi cấy bằng 1,5 mL protein trong phân đoạn thứ cấp<br /> TE 1X từ 3-5 phút trong tủ ấm. Khi tế bào đã hoàn<br /> toàn ra khỏi bề mặt nuôi cấy, trung hòa TE bằng cách Khối lượng phân tử của protein tách ra được xác định<br /> hút 5 mL eDMEM bổ sung 10 % FBS + 1% PS vào trên máy khối phổ MALDI-TOF MS (Bruker<br /> bình, tráng đều. Hút toàn bộ vào falcon 15 mL, ghi Daltonik, Đức).<br /> nhãn và dán parafilm và thực hiện ly tâm 1300<br /> vòng/phút trong 3 phút. 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN<br /> Kết thúc ly tâm, lau cồn 70 % trước khi đem<br /> falcon vào tủ hút, đổ dịch nổi, vuốt nhẹ để phần tế bào 3.1. Làm sạch các phân đoạn thứ cấp từ phân đoạn<br /> dưới đáy bong ra. Tái huyền phù với 5 mL eDMEM 3<br /> bổ sung 10% FBS + 1% PS. Tiến hành đếm và tính số<br /> lượng tế bào cần thí nghiệm bằng buồng đếm hồng Từ phân đoạn 3 chúng tôi đã tiến hành sắc ký lỏng<br /> cầu. Sau đó, pha loãng mật độ và cấy tế bào vào đĩa cao áp pha đảo trên cột phân tích Jupiter C18 (4.6 x<br /> 96 giếng với 7000 tế bào/100 µL/giếng. 250 mm). Kết quả phân đoạn 3 đã tách ra 4 phân đoạn<br /> thứ cấp có hàm lượng có thể khảo sát được (hình 1A).<br /> 2.2.3. Quy trình pha và thử mẫu<br /> <br /> 96<br /> TCHH, 57(2e1,2), 2019 Tách protein có hoạt tính kháng…<br /> <br /> Các phân đoạn này được thu lại, đông khô và khảo sát khảo sát ở nồng độ 100 µg/mL, phần trăm tế bào sống<br /> hoạt tính. của phân đoạn BF3_VS và nọc thô BF_VS giảm đi<br /> đáng kể còn 19,85 % và 18,17 % tương ứng. Ở nồng<br /> độ 1 µg/mL, phần trăm tế bào sống tương đương so<br /> với mẫu chứng (mẫu chỉ có tế bào ung thư MCF7)<br /> (A) (100 %). Sau 72 giờ, các phân đoạn còn lại không<br /> nhận thấy khả năng kháng ung thư trên tế bào ung thư<br /> vú MCF7. Như vậy, sự tăng sinh của tế bào ung thư<br /> MCF7 bị ức chế do hoạt tính của mẫu và khả năng<br /> kháng ung thư của phân đoạn BF3_VS, nọc thô<br /> BF_VS từ rắn cạp nong ở Vĩnh Sơn phụ thuộc vào<br /> nồng độ khảo sát. Ngoài ra, khả năng chống lại các tế<br /> 3.3.1 bào ung thư và làm giảm khả năng di căn của nọc rắn<br /> cạp nong là do thành phần trực tiếp gây độc tế bào là<br /> (B)<br /> phospholipase A2 (PLA2), phân đoạn 3 có khả năng<br /> chống lại sự tăng sinh (anti proliferation) của tế bào<br /> 3.3.2<br /> ung thư.<br /> <br /> 3.2.2. Kết quả khảo sát khả năng kháng ung thư vú<br /> của các phân đoạn thứ cấp tách từ phân đoạn 3<br /> (BF3_VS) của nọc rắn cạp nong<br /> Hình 1: Sắc ký lỏng cao áp pha đảo để thu các phân<br /> đoạn thứ cấp từ phân đoạn 3 (A) và toxin sạch 3.3.1 Khảo sát hoạt tính kháng ung thư của 4 phân đoạn thứ<br /> từ phân đoạn thứ cấp 3.3 (B) cấp (BF_3.1_VS – BF_3.4_VS) tách từ phân đoạn 3<br /> (BF3_VS) của nọc rắn cạp nong ở Vĩnh Sơn lên tế<br /> 3.2. Kết quả khảo sát khả năng kháng ung thư lên bào ung thư vú MCF7 sau 72 giờ. Kết quả thí nghiệm<br /> tế bào ung thư vú MCF7 cho thấy, phân đoạn BF_3.3_VS có khả năng kháng<br /> ung thư trên tế bào ung thư vú MCF7 (hình 3). Cụ thể,<br /> 3.2.1. Kết quả khảo sát khả năng kháng ung thư vú phần trăm tế bào ung thư vú MCF7 sống sau khi thử<br /> của nọc thô và các phân đoạn của nọc rắn cạp nong nghiệm với BF_3.3_VS lần lượt là 82 % ở nồng độ<br /> 10 µg/mL, 73% (50 µg/mL), 56,7 % (100 µg/mL). Ở<br /> nồng độ 1 µg/mL, phần trăm tế bào sống tương đương<br /> Chứng với mẫu chứng (mẫu chỉ có tế bào ung thư MCF7)<br /> Lượng tế bào sống (%)<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> (100 %). Ở cùng mốc thời gian 72 h, các phân đoạn<br /> còn lại không nhận thấy khả năng kháng ung thư trên<br /> tế bào ung thư vú MCF7. Như vậy, sự tăng sinh của<br /> tế bào ung thư vú MCF7 bị ức chế do hoạt tính của<br /> mẫu và hiệu quả của phân đoạn BF_3.3_VS tác dụng<br /> Nồng độ (µg/mL) lên tế bào ung thư vú MCF7 tăng theo nồng độ, thể<br /> *р < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001 (p: sai số thống kê) hiện rõ nét ở mốc nồng độ 50 µg/mL, 100 µg/mL.<br /> Hình 2: Kết quả khảo sát khả năng kháng ung thư<br /> của nọc thô và các phân đoạn lên tế bào ung thư vú Chứng<br /> Lượng tế bào sống (%)<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> MCF7 sau 72 h<br /> <br /> Khảo sát hoạt tính kháng ung thư của nọc thô và<br /> các phân đoạn từ nọc rắn cạp nong ở Vĩnh Sơn lên tế<br /> bào ung thư vú MCF7 sau 72 h. Kết quả thí nghiệm<br /> cho thấy, khả năng kháng ung thư của nọc thô và các Nồng độ (µg/mL)<br /> phân đoạn từ nọc rắn cạp nong ở Vĩnh Sơn phụ thuộc<br /> *р < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001<br /> vào nồng độ (hình 2). Cụ thể, ở nồng độ 10 µg/mL<br /> phần trăm tế bào sống khi thử nghiệm với phân đoạn Hình 3: Kết quả khảo sát khả năng kháng ung thư<br /> BF3_VS và nọc thô BF_VS ở mức cao nhất lần lượt<br /> các phân đoạn thứ cấp được tách từ phân đoạn 3<br /> là 82,9 % và 81,23 %. Ở nồng độ 50 µg/mL, phần<br /> (BF3_VS) lên tế bào ung thư vú MCF7 sau 72 h<br /> trăm tế bào sống giảm đi đạt 52,18 % và 61,2 %. Khi<br /> <br /> 97<br /> TCHH, 57(2e1,2), 2019 Hoàng Ngọc Anh và cộng sự<br /> <br /> 3.3. Kết quả khảo sát khả năng kháng ung thư lên µg/mL), 57 % (100 µg/mL). Ở nồng độ 1 µg/mL,<br /> tế bào ung thư phổi A549 phần trăm tế bào sống tương đương với mẫu chứng<br /> (mẫu chỉ có tế bào ung thư A549) (100%). Ở cùng<br /> 3.3.1. Kết quả khảo sát khả năng kháng ung thư phổi mốc thời gian sau 72 h, các phân đoạn còn lại không<br /> của nọc thô và các phân đoạn của nọc rắn cạp nong nhận thấy khả năng kháng ung thư trên tế bào ung thư<br /> phổi A549. Như vậy, hiệu quả kháng ung thư của phân<br /> Khảo sát hoạt tính kháng ung thư của nọc thô và các đoạn BF_3.3_VS trên tế bào ung thư phổi A549 tăng<br /> phân đoạn từ nọc rắn cạp nong ở Vĩnh Sơn lên tế bào theo nồng độ, thể hiện rõ nét ở mốc nồng độ 50<br /> ung thư phổi A549 sau 72 h (hình 4). Kết quả thí µg/mL, 100 µg/mL.<br /> nghiệm cho thấy, khả năng kháng ung thư của phân<br /> đoạn BF3_VS và nọc thô BF_VS phụ thuộc vào nồng<br /> độ khảo sát. Cụ thể, ở nồng độ 10 µg/mL phần trăm Chứng<br /> tế bào sống khi thử nghiệm với phân đoạn BF3_VS<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Lượng tế bào sống (%)<br /> và nọc thô BF_VS ở mức cao nhất lần lượt là 71 % và<br /> 78,12 %. Ở nồng độ 50 µg/mL, phần trăm tế bào sống<br /> giảm đi đạt 49,18 % và 51,6 %. Khi khảo sát ở nồng<br /> độ 100 µg/mL, phần trăm tế bào sống giảm đi đáng<br /> kể còn 16 % và 18 %. Ở nồng độ 1 µg/mL, phần trăm<br /> tế bào sống tương đương so với mẫu chứng (mẫu chỉ Nồng độ (µg/mL)<br /> <br /> có tế bào ung thư A549) (100 %). Ở cùng mốc thời *р < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001<br /> gian sau 72 h, các phân đoạn còn lại không nhận thấy<br /> khả năng kháng ung thư trên tế bào ung thư phổi Hình 5: Kết quả khảo sát khả năng kháng ung thư<br /> A549. Như vậy, sự tăng sinh của tế bào ung thư phổi các phân đoạn thứ cấp được tách từ phân đoạn 3<br /> A549 bị ức chế do hoạt tính của mẫu và khả năng (BF3_VS) lên tế bào ung thư phổi A549 sau 72 h<br /> kháng ung thư của phân đoạn BF3_VS và nọc thô<br /> BF_VS phụ thuộc vào nồng độ khảo sát. 3.4. Xác định khối lượng phân tử của protein tách<br /> ra<br /> <br /> Chứng<br /> Phân đoạn 3.3 được làm sạch lại bằng phương pháp<br /> sắc ký lỏng cao áp pha đảo và thu được một protein<br /> Lượng tế bào sống (%)<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> sạch 3.3.1 (hình 1B). Bằng phương pháp khối phổ<br /> MALDI-TOF MS chúng tôi đã xác định khối lượng<br /> phân tử của protein 3.3.1 là 13090 Da, đó là<br /> phospholipase A2. So với các protein khác tách từ nọc<br /> rắn cạp nong B. fasciatus thì khối lượng phân tử<br /> Nồng độ (µg/mL)<br /> (KLPT) của toxin 3.3.1 khác so với BF-LAAO (70<br /> kDa), BF-CT1 (13 kDa), BF-30 (3637 Da). So sánh<br /> *р < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001 với ngân hàng dữ liệu protein thì chưa có protein có<br /> Hình 4: Kết quả khảo sát khả năng kháng ung thư KLPT như của 3.3.1, hy vọng protein 3.3.1 là một<br /> của nọc thô và các phân đoạn lên tế bào ung thư phổi protein mới.<br /> A549 sau 72 h Cấu trúc bậc một của toxin 3.3.1 này sẽ được xác<br /> định trong nghiên cứu tiếp theo.<br /> 3.3.2. Kết quả khảo sát khả năng kháng ung thư phổi<br /> của các phân đoạn thứ cấp tách từ phân đoạn 3 4. KẾT LUẬN<br /> (BF3_VS) của nọc rắn cạp nong<br /> Từ phân đoạn 3 (thu được bằng sắc ký lọc gel nọc cạp<br /> Khảo sát hoạt tính kháng ung thư của 4 phân đoạn thứ nong Bungarus fasciatus), bằng phương pháp sắc ký<br /> cấp (BF_3.1_VS – BF_3.4_VS) được tách từ phân lỏng cao áp pha đảo đã tách ra được 4 phân đoạn thứ<br /> đoạn 3 (BF3_VS) của nọc rắn cạp nong ở Vĩnh Sơn cấp (3.1; 3.2; 3.3; 3.4).<br /> lên tế bào ung thư phổi A549 sau 72 h (hình 5). Kết Khảo sát hoạt tính kháng tế bào ung thư cho thấy:<br /> quả thí nghiệm cho thấy, phân đoạn BF_3.3_VS có nọc thô, phân đoạn 3 và phân đoạn thứ cấp 3.3 có hoạt<br /> khả năng kháng ung thư trên tế bào ung thư phổi tính kháng tế bào ung thư vú (MCF7) và ung thư phổi<br /> A549. Cụ thể, phần trăm tế bào ung thư phổi A549 (A549) ở nồng độ 10 µg/mL sau 72 giờ, thể hiện rõ<br /> sống sau khi thử nghiệm với phân đoạn BF_3.3_VS rệt ở nồng độ 50 µg/mL và 100 µg/mL. Như vậy, hiệu<br /> lần lượt là 89 % ở nồng độ 10 µg/mL, 71,2 % (50 quả kháng ung thư của nọc thô, phân đoạn 3 và phân<br /> <br /> 98<br /> TCHH, 57(2e1,2), 2019 Tách protein có hoạt tính kháng…<br /> <br /> đoạn thứ cấp 3.3 tăng khi tăng nồng độ. acts through apoptosis, modulation of PI3K/AKT,<br /> Từ phân đoạn thứ cấp 3.3 đã thu đươc một protein MAPKinase pathway and cell cycle regulation,<br /> 3.3.1 sạch, khối lượng phân tử của protein này được Toxicon, 2013, 74, 138-150.<br /> xác định là 13090 Da, đó là phospholipase A2. 3. Wang Y., Zhang Z., Chen L., Guang H., Li Z.<br /> Cathelicidin-BF, a Snake Cathelicidin-Derived<br /> Lời cảm ơn. Nghiên cứu này được hỗ trợ bởi Quỹ Antimicrobial Peptide, Could Be an Excellent<br /> Nghiên cứu Cơ bản Nga (đề tài mã số 18-54-54006) Therapeutic Agent for Acne Vulgaris, PLOS ONE,<br /> 2011, 6(7), e22120.<br /> và bởi Viện Hàn lâm khoa học và Công nghệ Việt<br /> Nam (đề tài mã số QTRU01.03/18-19) . 4. Yipeng Wang, Jing Hong, Xiuhong Liu, Snake<br /> Cathelicidin from Bungarus fasciatus Is a Potent<br /> TÀI LIỆU THAM KHẢO Peptide Antibiotics, PLOS ONE, 2008, 3(9), e3217.<br /> 5. Tran Vu Thien, Le Thi Thuy Lien, Nguyen Thi Thuy<br /> 1. Ji-Fu Wei, Hai-Wei Yang, Purification, Trang, Vo Phung Nguyen, Nguyen Duc Tuan, Nguyen<br /> characterization and biological activities of the L- Cuu Khoa, Utkin Yuri, Hoang Ngoc Anh, Anti-<br /> amino acid oxidase from Bungarus fasciatus snake nociceptive and anti-inflammatory effects of isolated<br /> venom, Toxicon, 2009, 54, 262-271. fractions from venom Bungarus fasciatus distributed<br /> 2. Bhattacharya, T. Das, A. Biswas, A cytotoxic protein in Vinh Phuc, Y Hoc TP. Ho Chi Minh, 2017, 21(1),<br /> (BF-CT1) purified from Bungarus fasciatus venom 523-530.<br /> <br /> <br /> Liên hệ: Hoàng Ngọc Anh<br /> Viện Khoa học Vật liệu Ứng dụng,<br /> Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam<br /> TL29, Phường Thạnh Lộc, quận 12, Thành phố Hồ Chí Minh<br /> E-mail: hnanh52@yahoo.com<br /> Điện thoại: +84- 945875569.<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> 99<br />