Thiết kế vector mang gen HA1 của virus H5N1 sử dụng trong chuyển gen thông qua vi khuẩn A.rhizogenes

Nguyễn Huy Hoàng và Đtg<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> 89(01/2): 147 - 151<br /> <br /> THIẾT KẾ VECTOR MANG GEN HA1 CỦA VIRUS H5N1 SỬ DỤNG TRONG<br /> CHUYỂN GEN THÔNG QUA VI KHUẨN A.RHIZOGENES<br /> Nguyễn Huy Hoàng*, Vũ Thị Như Trang<br /> Đại học Y dược Thái Nguyên<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> H5N1 là một biến chủng của virus cúm A, là nguyên nhân gây ra dịch cúm gia cầm. Để ngăn ngừa<br /> sự lây nhiễm virus, phương pháp phổ biến nhất là tiêm phòng vaccine. Hằng năm, Việt Nam cần<br /> một lượng vaccine rất lớn để tiêm chủng phòng bệnh. Hiện nay, chuyển gen mã hóa các kháng<br /> nguyên nhằm sản xuất vaccine tái tổ hợp vào thực vật, cụ thể là vào các cây trồng là nguồn thức ăn<br /> chính cho con người, động vật nuôi là một trong những hướng đi có triển vọng. Tuy nhiên, xu<br /> hướng sử dụng hệ thống nuôi cấy sinh khối tế bào để sản xuất các dược phẩm sinh học tái tổ hợp<br /> cũng được bắt đầu quan tâm nghiên cứu và ứng dụng. Trong nghiên cứu này, nhằm tạo cơ sở cho<br /> việc sản xuất vaccine A/H5N1 ra môi trường nuôi cấy rễ tơ thuốc lá chuyển gen, chúng tôi đã tiến<br /> hành thiết kế vector chuyển gen HA1 biểu hiện kháng nguyên bề mặt của virus cúm A/H5N1<br /> mang đoạn trình tự tín hiệu giúp cho protein HA1 có thể tiết ra môi trường nuôi cấy. Đoạn gen<br /> HA1 đã được tách dòng và nối với đoạn trình tự tín hiệu, cấu trúc này được ghép nối thành công<br /> vào vector chuyển gen pK7WG2D bằng kỹ thuật lai Gateway.<br /> Từ khóa: biểu hiện gen, HA, vaccine thực vật, H5N1, rễ tơ.<br /> <br /> ĐẶT VẤN ĐỀ*<br /> Cúm gà (avian influenza) là một bệnh truyền<br /> nhiễm cấp tính của các loài chim, kể cả gia<br /> cầm và thuỷ cầm, do các subtype khác nhau<br /> thuộc nhóm virus cúm A gây nên. Do có sức<br /> đề kháng tự nhiên tốt nên một số loài chim<br /> mang virus gây bệnh, nhưng không có biểu<br /> hiện của bệnh. Đây là mối nguy hiểm lan<br /> truyền bệnh cho các loài gia cầm khác. Ngoài<br /> ra, chúng còn là nguồn tàng trữ biến đổi nguồn<br /> gen tạo nên các subtype mới. Các subtype<br /> virus cúm A gây bệnh trên người đều có<br /> nguồn gốc tiến hoá biến thể và biến chủng từ<br /> động vật và sau khi thích ứng trên người thì<br /> gây bệnh, trước đây đã tạo nên những vụ dịch<br /> thảm khốc, rồi biến mất sau một thời gian lại<br /> tái hiện và gây nên đại dịch mới [1, 3].<br /> Để phòng chống sự lây lan mạnh mẽ của đại<br /> dịch cúm gia cầm, hàng năm Việt Nam cần<br /> một lượng vaccine rất lớn để tiêm chủng cho<br /> hàng trăm triệu con gà, vịt. Ngoài những công<br /> nghệ sẵn có, Việt Nam đang tìm kiếm những<br /> công nghệ sản xuất vaccine mới có ý nghĩa<br /> kinh tế, an toàn và hiệu quả cao. Vaccine ăn<br /> được có nguồn gốc từ thực vật sẽ là nguồn<br /> *<br /> <br /> Tel: 0984.434.797; Email: huyhoangytn@gmail.com<br /> <br /> vaccine đáp ứng được các tiêu chí đó, đồng<br /> thời được xem là hướng nghiên cứu mới vì<br /> mục đích chăm sóc sức khỏe cộng đồng phù hợp<br /> với những nước đang phát triển như Việt Nam.<br /> Chuyển gen mã hóa các kháng nguyên tái tổ<br /> hợp vào thực vật cụ thể là vào các cây trồng<br /> là nguồn thức ăn chính cho con người, động<br /> vật nuôi là một trong những hướng đi chính<br /> hiện nay. Tuy nhiên bên cạnh đó, một xu<br /> hướng cũng được bắt đầu quan tâm nghiên<br /> cứu và ứng dụng là sử dụng hệ thống nuôi<br /> cấy sinh khối tế bào để sản xuất các dược<br /> phẩm sinh học tái tổ hợp. So sánh với cây<br /> trồng chuyển gen, nuôi cấy tạo sinh khối tế<br /> bào thực vật có ưu điểm lớn là không đòi hỏi<br /> diện tích canh tác, không chịu ảnh hưởng của<br /> khí hậu, mùa vụ, sản phẩm thu được không<br /> mang các yếu tố độc hại từ thuốc trừ sâu,<br /> thuốc diệt cỏ và rút ngắn được rất nhiều thời<br /> gian trồng trọt. Thêm vào đó, nuôi cấy tế bào<br /> thực vật dễ dàng, môi trường nuôi cấy đơn<br /> giản, rẻ tiền, chủ động, có thể sản xuất một<br /> lượng sinh khối lớn trong khoảng thời gian<br /> ngắn. Đặc biệt hơn cả là ở hệ thống nuôi cấy<br /> lỏng các mô tế bào thực vật việc biểu hiện<br /> dược phẩm sinh học tái tổ hợp ra môi trường<br /> nuôi cấy đơn giản hơn rất nhiều [5]. Khác với<br /> nuôi cấy mô, nuôi cấy sinh khối tế bào thực<br /> vật không định hướng tạo ra cây hoàn chỉnh<br /> 147<br /> <br /> Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên<br /> <br /> http://www.lrc-tnu.edu.vn<br /> <br /> Nguyễn Huy Hoàng và Đtg<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> 89(01/2): 147 - 151<br /> <br /> mà chỉ phát triển các dòng tế bào như nuôi<br /> VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP<br /> cấy mô sẹo, huyền phù tế bào, rễ tơ để tạo<br /> Chủng vi sinh vật và hệ gen<br /> sinh khối lớn các sản phẩm. Trong đó, rễ tơ<br /> Chủng E. Coli DH5α (Invitrogen) được sử<br /> được gây tạo ra bởi quá trình tương tác giữa<br /> dụng để nhân dòng gen.<br /> vi khuẩn đất A. rhizogenes và tế bào vật chủ.<br /> Ưu điểm trong nuôi cấy rễ tơ là có thể sinh<br /> Vector pUC18/Haop mang gen HA biểu hiện<br /> trưởng, phát triển tốt trên các môi trường nuôi<br /> kháng nguyên bề mặt virus cúm A, gen này<br /> cấy không bổ sung các chất kích thích sinh<br /> đã được chuyển mã để tối ưu cho biểu hiện ở<br /> trưởng, khả năng phân nhánh cao, kỹ thuật<br /> thực vật.<br /> nuôi cấy và chuyển gen dễ dàng. Hơn nữa,<br /> các rễ tơ có thể được nuôi cấy tạo sinh khối<br /> Vector pDONRTM221 (Invitrogen) được sử<br /> liên tục, rất có ý nghĩa trong dây chuyền sản<br /> dụng để tạo dòng gen bằng kỹ thuật Gateway.<br /> xuất các chất thứ cấp hay các dược phẩm sinh<br /> Vector chuyển gen thực vật pK7WG2D [6]<br /> học tái tổ hợp được chúng tôi quan tâm<br /> Tổng hợp đoạn trình tự tín hiệu<br /> nghiên cứu.<br /> Calreticulin<br /> Với mục đích tạo cơ sở cho việc sản xuất<br /> vaccine A/H5N1 ăn được, chúng tôi đã tiến<br /> Dựa trên trình tự gen Calreticulin trên<br /> hành nghiên cứu thiết kế vector mang gen<br /> GenBank (mã số Z71395.1), chúng tôi đã tổng<br /> HA1 biểu hiện kháng nguyên HA của H5N1<br /> hợp nhân tạo đoạn trình tự nucleotide mã hóa<br /> và bước đầu tạo dòng rễ tơ chuyển gen ở cây<br /> đoạn peptide tín hiệu Calreticulin (81<br /> thuốc lá. Đây sẽ là nguồn nguyên liệu cơ sở<br /> nucleotide) và thêm trình tự gắn mồi của attB1<br /> để biến nạp và biểu hiện kháng nguyên của<br /> và attB2 ở đầu 5’ và 3’ tương ứng (bảng 1).<br /> virus trong cây trồng.<br /> Bảng 1. Các cặp mồi và trình tự nucleotide sử dụng trong nghiên cứu<br /> Tên<br /> <br /> Trình tự DNA<br /> 5’<br /> GGGGAGCTCGATCAGATCTGCATTGGAT<br /> HA1_SacI_F<br /> 3’<br /> HA1_HindIII_R<br /> 5’<br /> GGAAGCTTTTACCTTCTTTCTCTCTGTGG<br /> 3’<br /> <br /> Chú thích<br /> Cặp mồi nhân đoạn gen<br /> HA1, thêm trình tự cắt<br /> enzyme hạn chế SacI vào<br /> mồi xuôi và HindIII vào<br /> mồi ngược<br /> <br /> Đoạn tín hiệu Calreticulin<br /> 5’ AAGAAGGAGATATATACCATGGCTACT<br /> (Cal - 81 bp) được tổng hợp<br /> CAACGAAGGGCAAACCCTAGCTCTCTCC<br /> nhân tạo, thêm trình tự gắn<br /> Calreticulin ATCTAATTACTGTATTCTCTCTGCTCGTCG<br /> mồi của attB1 ở đầu 5’ và<br /> CTGTCGTCTCCGCTGAGCTCTCTAGAAAG<br /> trình tự gắn mồi của attB2 ở<br /> CTT 3’<br /> đầu 3’<br /> Cặp mồi nhân đoạn<br /> Calreticulin đồng thời tạo vị<br /> 5’GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGG<br /> trí tái tổ hợp attB, đoạn gen<br /> CTCATTTAACTTTAAGAAGGAGATATATA<br /> attB1_SP<br /> này sử dụng để ghép nối<br /> CC<br /> attB2_SP_MCS<br /> vào vector pDONRTM221<br /> GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGG<br /> bằng kỹ thuật Gateway<br /> TCAAGCTTTCTAGAGAGCTC 3’<br /> MCS mang trình tự cắt<br /> SacI, XbaI, HindIII<br /> Trình tự các đoạn nucleotide được tổng hợp tại công ty MWG, CHLB Đức và công ty Epoch<br /> Biolabs, Hoa Kỳ.<br /> 148<br /> <br /> Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên<br /> <br /> http://www.lrc-tnu.edu.vn<br /> <br /> Nguyễn Huy Hoàng và Đtg<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> Dòng hóa đoạn trình tự tín hiệu Cal vào<br /> pDONRTM221 bằng kỹ thuật Gateway<br /> Kỹ thuật Gateway là một kỹ thuật dòng hóa<br /> phổ biến, dựa vào điểm đặc hiệu trong hệ<br /> thống tái tổ hợp của phage I. Kỹ thuật<br /> Gateway cho phép chuyển đoạn DNA giữa<br /> các vector tách dòng khác nhau trong khi vẫn<br /> duy trì định hướng chính và cấu trúc đọc. Kỹ<br /> thuật này là một phương pháp có hiệu quả cao<br /> cho việc tách dòng có định hướng của các sản<br /> phẩm PCR. Kỹ thuật này gồm có hai loại<br /> phản ứng LR và BP (Invitrogen). Trong<br /> nghiên cứu này sử dụng cặp mồi attB1_SP và<br /> attB2_S_MCS để nhân đoạn trình tự tín hiệu<br /> Cal tạo mang trình tự tái tổ hợp attB1&2.<br /> Phản ứng BP được thực hiện giữa sản phẩm<br /> PCR trên và vector pDONRTM221 mang<br /> dưới sự xúc tác bởi hỗn hợp enzym BP<br /> ClonaseTM, kết quả tạo vector tiếp nhận<br /> pENTR 221/cal. Phản ứng được thực hiện<br /> theo hướng dẫn của bộ kit Gateway® Cloning<br /> (Invitrogen) có cải tiến cho phù hợp với điều<br /> kiện phòng thí nghiệm.<br /> Ghép nối đoạn gen HA1 vào vector tiếp<br /> nhận pENTR221/cal<br /> Đoạn gen HA1 được nhân lên bằng PCR từ<br /> plasmid pUC18/HAop với cặp mồi đặc hiệu<br /> HA1_Sacl_F và HA1_HindIII_R theo chu<br /> trình: 95oC - 3 phút, 30 chu kì ( 95oC - 30<br /> giây, 570C - 30 giây,72oC - 1 phút 30 giây),<br /> 72oC - 10 phút và phản ứng kết thúc sau khi<br /> mẫu được làm lạnh đến 10oC.<br /> Sản phẩm tổng hợp gen trên và<br /> pENTR221/cal được cắt tạo đầu sole bằng 2<br /> enzyme giới hạn (SacI & HindIII), nối ghép<br /> tạo pENTR221/cal/HA1 và biến nạp vào tế<br /> bào khả biến E.coli DH5α. Vector tái tổ hợp<br /> pENTR221/cal/HA1 được kiểm tra bằng<br /> phương pháp colony-PCR và cắt kiểm tra<br /> bằng enzyme hạn chế SacI & HindIII. Xác<br /> định trình tự gen HA1 bằng máy phân tích<br /> trình tự tự động ABI PRISM 3100 Avant<br /> Genetic Analyzer theo nguyên lí của Sanger<br /> với bộ kit BigDye Terminator v. 3.2 Cycle<br /> Sequencing.<br /> <br /> 89(01/2): 147 - 151<br /> <br /> Thiết kế vector chuyển gen thực vật bằng<br /> kỹ thuật Gateway<br /> Phản ứng LR được thực hiện giữa vector tiếp<br /> nhận pENTR221/cal mang trình tự tái tổ hợp<br /> attL1&2 và vector đích pK7WG2D mang trình<br /> tự tái tổ hợp attR1&2 dưới sự xúc tác bởi hỗn<br /> hợp enzym LR ClonaseTM II theo hướng dẫn<br /> của bộ kit Gateway® Cloning (Invitrogen).<br /> Vector chuyển gen pK7WG2D/cal/HA1 (hình<br /> 1) được kiểm tra bằng phương pháp PCR và cắt<br /> enzyme giới hạn.<br /> KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN<br /> Kết quả dòng hóa đoạn trình tự tín hiệu<br /> Cal vào pDONRTM221 bằng kỹ thuật<br /> Gateway<br /> Với mục đích “dẫn” protein tái tổ hợp tiết ra<br /> môi trường nuôi cấy lỏng rễ tơ ở cây thuốc lá,<br /> chúng tôi thiết kế đoạn trình tự tín hiệu tiết<br /> calreticulin nối với gen HA1 ở đầu 5’. Đoạn<br /> trình tự tín hiệu này được phân lập từ<br /> Nicotiana plumbaginifolia họ hàng gần với<br /> thuốc lá (Nicotiana tabacum) - cây nhận gen<br /> chuyển, điều này nhiều khả năng làm tăng hiệu<br /> quả của quá trình tiết protein tái tổ hợp [2].<br /> Để tạo điều kiện cho thiết kế vector chuyển<br /> gen ở thực vật bằng kỹ thuật Gateway ở các<br /> thí nghiệm tiếp theo, đoạn trình tự tín hiệu<br /> Cal được tạo vị trí tái tổ hợp attB bằng<br /> phương pháp PCR sử dụng cặp mồi attB1_SP<br /> và attB2_SP_MCS (Bảng 1). Đoạn trình tự<br /> trên được ghép nối vào vector pDONRTM221<br /> bằng kỹ thuật Gateway theo nguyên lý và<br /> phương pháp như đã miêu tả ở phần phương<br /> pháp nghiên cứu. Kết quả của quá trình ghép<br /> nối đoạn gen Cal vào pDONRTM221 được xác<br /> định bằng biến nạp sản phẩm nối ghép gen<br /> vào tế bào E.Coli. Sau đó, chọn các khuẩn lạc<br /> để kiểm tra bằng phương pháp colony-PCR<br /> với cặp mồi M13. Nếu vector mang gen ngoại<br /> lai, kiểm tra sản phẩm PCR sẽ nhận được<br /> băng DNA có kích thước khoảng 0,4bp. Kết<br /> quả kiểm tra sản phẩm PCR đã khẳng định<br /> đoạn trình tự Cal đã được ghép nối vào<br /> pDONRTM221 tạo vector tiếp nhận<br /> pENTR221/cal.<br /> 149<br /> <br /> Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên<br /> <br /> http://www.lrc-tnu.edu.vn<br /> <br /> Nguyễn Huy Hoàng và Đtg<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> Thiết kế vector pENTR221/cal/HA1<br /> HA1 là một trong ba tiểu phần cấu tạo nên<br /> protein HA, cho phép nhận biết tế bào đích<br /> của động vật có xương sống và hoàn thành<br /> quá trình nhận biết bằng cách gắn kết với thụ<br /> thể chứa sialic acid của những tế bào này [4,<br /> 7]. Đoạn gen HA1 được nhân lên từ<br /> pUC18/HAop bằng phương pháp PCR với<br /> cặp mồi đặc hiệu HA1_SacI_F và<br /> HA1_HindIII_R. Kết quả điện di thu được<br /> đoạn DNA đặc hiệu, rõ, có kích thước khoảng<br /> 1000 bp đúng theo tính toán lý thuyết (978<br /> bp) khi thiết kế mồi (hình 1A).<br /> Để tạo điều kiện ghép nối gen HA1 trực tiếp<br /> vào pENTR221/cal, sản phẩm PCR trên được<br /> tinh sạch để loại bỏ các thành phần không<br /> mong muốn trước khi cắt bằng cặp enzyme<br /> hạn chế SacI và HindIII. Đoạn gen HA1 này<br /> được nối ghép vào vector pENTR221/cal đã<br /> tiền xử lý với cùng cặp enzyme trên và nhân<br /> dòng trong tế bào E.coli DH5α. Kết quả của<br /> quá trình biến nạp được kiểm tra bằng<br /> phương pháp tách chiết plasmid để cắt kiểm<br /> tra (hình 1B). Kết quả trên điện di đồ cho thấy<br /> 2 băng DNA có kích thước khoảng 978bp và<br /> 2544 bp, tương ứng với kích thước của gen<br /> HA1 và vector đúng như tính toán lý thuyết.<br /> Bên cạnh đó, kết quả giải trình tự gen cho thấy,<br /> dòng gen lựa chọn có mang chính xác trình tự<br /> đoạn tín hiệu Cal nối với trình tự gen HA.<br /> Thiết kế vector chuyển gen<br /> Cấu trúc gen chứa HA1 và trình tự tín hiệu<br /> Cal được chuyển vào vector pK7WG2D [6]<br /> <br /> 89(01/2): 147 - 151<br /> <br /> bằng kỹ thuật Gateway theo mô tả ở phần<br /> phương pháp và vật liệu nghiên cứu.<br /> Kết quả kiểm tra vector tái tổ hợp bằng PCR<br /> và cắt enzyme hạn chế SacI/HindIII cho thấy<br /> sản phẩm PCR với cặp mồi đăc hiệu<br /> HA1_SacI_F/HA1_HindIII_R có kích thước<br /> khoảng 978 bp (hình 2A), sản phẩm cắt<br /> vector pK7WG2D/cal/HA1 bằng SacI/HindIII<br /> thu được 4 đoạn gen kích thước khoảng<br /> 434bp, 978 bp, 1201bp và 11159 bp kích<br /> thước này phù hợp với tính toán theo lý<br /> thuyết (Hình2B). Như vậy, cấu trúc gen HA1<br /> đã được thiết kế thành công vào vector<br /> chuyển gen thực vật pK7WG2D. Dòng<br /> plasmid số 1 đã được lựa chọn cho biến nạp<br /> vào Agrobacterium rhizogenes ATCC15834<br /> để tạo dòng rễ tơ chuyển gen.<br /> <br /> M<br /> <br /> 1<br /> <br /> M<br /> <br /> 2<br /> <br /> 2,5bp<br /> 1kb<br /> <br /> A<br /> <br /> B<br /> <br /> Hình 1. Kết quả nhân đoạn gen HA1 bằng PCR (A)<br /> và kiểm tra cấu trúc vector ENTR221/cal/HA1 (B).<br /> M: thang DNA chuẩn 1kb; 1: sản phẩm PCR của<br /> HA1; 2: sản phẩm cắt bằng enzyme SacI/HindIII<br /> <br /> 10 kb<br /> 1 kb<br /> 1 kb<br /> <br /> 0,5 kb<br /> <br /> bp<br /> A<br /> <br /> B<br /> <br /> Hình 2. Điện di kiểm tra vector tái tổ hợp pK7WG2D/cal/HA1 bằng PCR (A) và cắt bởi enzyme cắt hạn<br /> chế SacI/HindIII (B). M: thang chuẩn 1kb; giếng 1 - 10: mẫu vector tái tổ hợp tách từ các dòng khuẩn lạc<br /> <br /> 150<br /> <br /> Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên<br /> <br /> http://www.lrc-tnu.edu.vn<br /> <br /> Nguyễn Huy Hoàng và Đtg<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> KẾT LUẬN<br /> Đã thiết kế thành công vector chuyển gen<br /> thực vật pK7WG2D/cal/HA1 mang cấu trúc<br /> gen HA1 nối với trình tự tín hiệu Cal để dẫn<br /> HA1 tái tổ hợp tiết ra môi trường nuôi cấy rễ<br /> tơ cây thuốc lá chuyển gen. Vector chuyển<br /> gen đã được biến nạp vào A.rhizogenes ATCC<br /> 15834 để tạo rễ tơ cây thuốc lá chuyển gen.<br /> TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> [1]. Alexander, D.J. (2007), Summary of avian<br /> influenza activity in Europe, Asia, Africa, and<br /> Australasia, 2002-2006. Avian Dis, 51(1 Suppl):<br /> p. 161-6.<br /> [2]. Borisjuk NV, Borisjuk LG, et al. (1999).<br /> "Production of recombinant proteins in plant root<br /> exudates." Nat. Biotechnol. 17(5): 466-469.<br /> <br /> 89(01/2): 147 - 151<br /> <br /> [3]. Bosch, F., M. Orlich, H. Klenk, and R. Root<br /> (1979), The structure of the hemagglutinin: a<br /> determinant for the pathgencity of Influenza virus,<br /> Virology, 95: p. 197-207.<br /> [4]. Chen, L., C. Davis, H. Zhou, N. Cox, and R.<br /> Donis (2008), Genetic compatibility and virulence<br /> of reassortants derived from contemporary avian<br /> H5N1 and human H3N2 influenza A viruses.<br /> PLoS Pathog, 4(5): p. e1000072.<br /> [5]. Doran, P.M. (2000), Foreign protein<br /> production in plant tissue cultures. Curr Opin<br /> Biotechnol, 11(2): p. 199-204.<br /> [6]. Karimi M, Inze D, et al. (2002). "Gateway<br /> vectors for Agrobacterium-mediated plant<br /> transformation." Trends Plant Sci. 7(5): 193-195.<br /> [7]. Zhao, Z., K. Shortridge, M.G. M, Y. Guan,<br /> and X. Wan (2008), Genotypic diversity of H5N1<br /> highly pathogenic avian influenza viruses. J Gen<br /> Virol, 89(9): p. 2182-2193.<br /> <br /> SUMMARY<br /> CONSTRUCTION OF BINARY VECTOR CARRYING HA1 OF H5N1 VIRUS<br /> USING IN PLANT TRANSFORMATION VIA A.RHIZOGENES<br /> Nguyen Huy Hoang*, Vu Thi Nhu Trang<br /> College of Medicine and Pharmacy - TNU<br /> <br /> H5N1 is a sulotyspe of influenza A, commonly called avian flu or bird flu. To prevent the viral<br /> infection, the most common method is vaccination. Currently, there have been many flu A<br /> vaccines available. However, plant-based oral vaccine is targeted by many researchers around the<br /> world because this subunit vaccine can be eaten, easy to administer and more effiective than other<br /> injection vaccines. In this study, we aimed establish a method to transfer HA1 gene encoded<br /> antigens HA from H5N1 into tobacco plant as a very first stage of develop an plant-based<br /> oral vaccine.<br /> With the aim of creating facilities for the production of H5N1 vaccine, creating materials to<br /> produce transgenic plants likeness of virus antigens in the crop. We have studied gene transfer<br /> vector design HA1 expression of surface antigen HA H5N1 virus carrying the signal sequence<br /> may help the HA1 protein secreted outside the culture medium Gateway hybrid technique.<br /> Keywords: H5N1, gene expression, plant vaccine, HA, hairy root.<br /> <br /> *<br /> <br /> Tel: 0984.434.797; Email: huyhoangytn@gmail.com<br /> <br /> 151<br /> <br /> Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên<br /> <br /> http://www.lrc-tnu.edu.vn<br /> <br />