Tỉ lệ đột biến alen STR qua giám định huyết thống tại Bệnh viện Truyền máu Huyết học TP. Hồ Chí Minh

Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 4 * 2011<br /> <br /> TỈ LỆ ĐỘT BIẾN ALEN STR QUA GIÁM ĐỊNH HUYẾT THỐNG<br /> TẠI BỆNH VIỆN TRUYỀN MÁU HUYẾT HỌC TP. HỒ CHÍ MINH<br /> Bửu Mật*, Đặng Thị Tố Linh*, Phạm Thị Mỹ Hạnh*, Bùi Thị Phụng*<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Mục tiêu: Khảo sát đột biến alen STR nhằm tránh nhầm lẫn trong biện luận kết quả liên hệ huyết thống.<br /> Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Các trường hợp người Việt Nam đến xét nghiệm DNA huyết<br /> thống tại bệnh viện Truyền Máu Huyết Học TP. HCM từ tháng 4/2010 đến tháng 8/2011. Tất cả các trường<br /> hợp xuất hiện với sự khác biệt 1 alen STR giữa cha/con hoặc mẹ/con được ghi nhận và khảo sát về hiện tượng đột<br /> biến.<br /> Kết quả: Qua khảo sát 9586 alen STR cha và mẹ truyền cho con, chúng tôi ghi nhận có 20 trường hợp đột<br /> biến. Số trường hợp đột biến cha/con cao hơn mẹ/con. Sự đột biến xảy ra ở 12/15 (80%) loci khảo sát. Ở 4 loci<br /> THO1, D21S11, Penta D và TPOX, chúng tôi không ghi nhận đột biến. 95% đột biến xảy ra với cách biệt một<br /> step. Một trường hợp đột biến có thể có sự hiện diện của alen ẩn. Ngoài ra, chúng tôi còn ghi nhận có 1 trường<br /> hợp đột biến với 3 step và 1 trường hợp xảy ra 2 đột biến ở 2 loci khác nhau CSF1PO và D13S1358.<br /> Kết luận: Xác suất liên hệ huyết thống ở tất cả các trường hợp có đột biến đều đạt từ 99,9% đến >99,99%.<br /> Điều này cho thấy khi có 1 đột biến (hoặc rất hiếm 2 đột biến), chúng ta không thể loại bỏ được có sự liên hệ huyết<br /> thống.<br /> Từ khóa: Alen STR, đột biến, tỉ lệ đột biến.<br /> <br /> ABSTRACT<br /> MUTATION RATE OF STR ALLELES THROUGH FORENSIC STUDY AT THE BLOOD<br /> TRANSFUSION HEMATOLOGY HOSPITAL HCMC<br /> Buu Mat, Dang Thi To Linh, Pham Thi My Hanh, Bui Thi Phung<br /> * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 15 - Supplement of No 4 - 2011: 470 - 473<br /> Objective: Mutation of STR alleles has been studied aiming to avoid errors in DNA parentage assessment.<br /> Subjects and Methods: The study covers all DNA parentage testings occurred from may 4/2010 to march<br /> 8/2011; all cases happening with one inconsistency within STR allele between parents and child were studied for<br /> presence of mutation.<br /> Results: A study of 9586 paternal and maternal allele STR transferring to children, has showed 20 cases of<br /> mutation. The overall paternal mutation percentage is higher than that of maternal mutation. Mutations were<br /> observed at 12 among 15 loci studied while there are no mutation at 4 loci THO1, D21S11, Penta D and TPOX.<br /> 95% of mutation occurred with one step. One mutation assumed to be an null allele. On the other hand, we have<br /> recorded one case of mutation with 3 steps, and one case with 2 mutations at 2 different loci CSF1PO and<br /> D13S1358.<br /> Conclusion: The probability of paternity in all cases of mutations has been ranged from 99,9% to more than<br /> 99,99%; thus allowing us to conclude that we cannot exclude the presence of paternity.<br /> Keywords: STRs, mutation, mutation rate.<br /> <br /> * Bệnh viện Truyền Máu Huyết Học TP. HCM<br /> Tác giả liên lạc: PGS. Bửu Mật<br /> <br /> 470<br /> <br /> ĐT: 0918348228<br /> <br /> Email: mtbuu245@yahoo.com.au<br /> <br /> Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 4 * 2011<br /> ĐẶT VẤN ĐỀ<br /> Truy tìm huyết thống đã được thực hiện bắt<br /> đầu từ những năm 1920, với hệ thống kháng<br /> nguyên hồng cầu, tiếp sau đó là hệ thống kháng<br /> nguyên bạch cầu. Ngày nay, với sự hiểu biết về<br /> di truyền gen cùng với những kỹ thuật sinh học<br /> phân tử khảo sát hệ thống STR; chất lượng truy<br /> tìm huyết thống từ đó đã được nâng lên rất<br /> nhiều. Ngày nay, tỉ lệ liên hệ huyết thống cha/<br /> con hay mẹ/con đạt được 99,9999%.<br /> Tuy nhiên, các nhà khoa học trên thế giới đã<br /> chứng minh trong những trường hợp chỉ có 1<br /> alen khác biệt giữa cha/con hoặc mẹ/con và nếu<br /> tỉ lệ liên hệ huyết thống >99% bao gồm cả alen<br /> liên hệ, thì những trường hợp này vẫn được xác<br /> nhận có liên hệ huyết thống; các nhà khoa học<br /> đã chứng minh hiện tượng trên là do có sự đột<br /> biến xảy ra trong giai đoạn phân bào giảm<br /> nhiễm (meiosis) trong quá trình hình thành phôi<br /> thai(2,3). Do đó, nghiên cứu hiện tượng đột biến<br /> là một việc làm rất quan trọng nhằm khẳng định<br /> sự liên hệ huyết thống để tránh những nhầm lẫn<br /> loại bỏ liên hệ cha/con hay mẹ/con.<br /> <br /> ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU<br /> Đối tượng<br /> Tất cả các trường hợp người Việt Nam đến<br /> xét nghiệm DNA huyết thống tại bệnh viện<br /> Truyền Máu Huyết Học TP. HCM từ tháng<br /> 4/2010 đến tháng 8/2011.<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Genomic DNA kit (Sigma -Mỹ). Xác định<br /> lượng DNA tinh sạch với máy quang phổ<br /> Ultrospec 5300 pro (Thụy Điển). DNA tinh<br /> sạch được khuếch đại với bộ kit PowerPlex<br /> 16HS system(Error! Reference source not found.) (Promega<br /> – Mỹ) và bộ kit AmpFl STRRIdentifilerTM<br /> (Applied Biosystems - Mỹ). Tiếp theo, tiến<br /> hành điện di sản phẩm DNA sau PCR bằng<br /> máy giải trình tự gen tự động AB3130<br /> (Applied Biosystems - Mỹ). Kết quả được<br /> phân tích bằng phần mềm GeneMapper ID<br /> v.3.1. (Applied Biosystems -Mỹ).<br /> Chúng tôi chọn những trường hợp có sự<br /> khác biệt 1 alen STR giữa cha/con hoặc mẹ/con,<br /> để khảo sát đột biến.<br /> <br /> KẾT QUẢ<br /> Tiến hành khảo sát các alen STR D3S1358,<br /> TH01, D21S11, D18S51, Penta E, D5S818,<br /> D13S317, D7S820, D16S539, CSF1PO, Penta D,<br /> vWA, D8S1179, TPOX, FGA, trên tổng số 9586<br /> alen được truyền từ cha sang con và từ mẹ<br /> sang con, chúng tôi nhận thấy có 20 trường<br /> hợp có đột biến xảy ra, trong đó có 18 trường<br /> hợp đột biến cha/con, 2 trường hợp đột biến<br /> mẹ/con. Trong đó, số trường hợp có nhiều đột<br /> biến xảy ra ở 2 loci D18S51 và FGA (3 trường<br /> hợp), các loci khác thấp hơn, và có 4 loci<br /> TH01, D21S11, Penta D, TPOX không có<br /> trường hợp nào (Bảng 1).<br /> <br /> Phương pháp tiến hành<br /> Máu tĩnh mạch được lấy trong ống<br /> nghiệm EDTA, sau đó trích DNA với bộ kit<br /> DNA QIAGEN (Đức) hoặc GenElute Blood<br /> Bảng 1: Tỉ lệ đột biến của từng alen đột biến ở 15 loci STR<br /> Loci<br /> D3S1358<br /> TH01<br /> D21S11<br /> D18S51<br /> Penta E<br /> D5S818<br /> D13S317<br /> D7S820<br /> <br /> Số alen cha Số ca đột biến Tỉ lệ đột biến<br /> Số alen mẹ<br /> truyền cho con<br /> cha - con<br /> cha – con (%) truyền cho con<br /> 483<br /> 1<br /> 0,207<br /> 159<br /> 483<br /> 0<br />