Ứng dụng kỹ thuật PCR định lượng huỳnh quang trong chẩn đoán trước sinh nhanh phát hiện bất thường số lượng nhiễm sắc thể ở người

Nghiên cứu Y học <br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014<br /> <br />  ỨNG DỤNG KỸ THUẬT PCR ĐỊNH LƯỢNG HUỲNH QUANG  <br /> TRONG CHẨN ĐOÁN TRƯỚC SINH NHANH PHÁT HIỆN  <br /> BẤT THƯỜNG SỐ LƯỢNG NHIỄM SẮC THỂ Ở NGƯỜI <br /> Hoàng Hiếu Ngọc*, Phạm Thị Huyền Trang**, Phạm Hùng Vân**, Nguyễn Vạn Thông***,  <br /> Khổng Hiệp***  <br /> <br /> TÓM TẮT <br /> Đặt vấn đề: Vài năm trở lại đây, nhiều kỹ thuật sinh học phân tử mới được phát triển với mục đích phát <br /> hiện các bất thường số lượng các nhiễm sắc thể và giúp chẩn đoán trước sinh các thai kỳ nguy cơ với thời gian <br /> nhanh hơn mà vẫn đảm bảo độ chính xác như kỹ thuật làm nhiễm sắc thể đồ. Xuất phát từ nhu cầu trên, nhóm <br /> nghiên cứu của chúng tôi tiến hành ứng dụng kỹ thuật PCR định lượng huỳnh quang (QF – PCR) để chẩn <br /> đoán nhanh bất thường số lượng nhiễm sắc thể 13, 18, 21, X, Y ở người. <br /> Mục tiêu: Ứng dụng thành công kỹ thuật PCR định lượng huỳnh quang phát hiện dị bội NST 13, 18, 21, <br /> X, Y trong các mẫu dịch ối. <br /> Phương pháp: Tách chiết DNA từ các mẫu dịch ối của các thai kỳ nguy cơ (bất thường double test, triple <br /> test) và có chỉ định của bác sĩ lâm sàng. Sau đó, thực hiện phản ứng PCR định lượng huỳnh quang và cuối cùng <br /> điện di sản phẩm khuếch đại trên hệ thống điện di mao quản. Dữ liệu thô thu được sẽ được phân tích trên phần <br /> mềm chuyên dụng để tìm ra bất thường trong mẫu ối. <br /> Kết  quả: Từ tháng 03/2010 đến tháng 01/2011 chúng tôi thu thập được 64 mẫu ối từ thai kỳ nguy cơ. <br /> Trong đó phát hiện được 10 trường hợp bất thường (16,9%). Các kết quả này đều tương đồng với kết quả nhiễm <br /> sắc thể đồ được thực hiện song song tại bệnh viện Hùng Vương. <br /> Kết luận: Bằng việc ứng dụng kỹ thuật QF‐PCR, chúng tôi đã xây dựng thành công qui trình xét nghiệm <br /> chẩn đoán bất thường số lượng nhiễm sắc thể với độ chính xác cao và tiết kiệm thời gian, cung cấp một phương <br /> tiện chẩn đoán cho bác sĩ sản khoa trong việc xác định bất thường số lượng nhiễm sắc thể ở những thai kỳ nguy <br /> cơ cao. <br /> Từ khóa: QF‐PCR, chẩn đoán trước sinh, dị bội thể <br /> <br /> ABSTRACT <br /> RAPID PRENAL DIAGNOSIS BY QUANTITATIVE FLUORESCENT POLYMERASE  <br /> CHAIN REACTION TO DETECT HUMAN ANEUPLOIDIES IN AMNIOTIC FLUIDS <br /> Hoang Hieu Ngoc, Pham Thi Huyen Trang, Pham Hung Van, Nguyen Van Thong, Khong Hiep,  <br /> * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 18 ‐ Supplement of No 1 ‐ 2014: 144 ‐ 149 <br /> Background:  Previously,  aneuploidies  were  usually  diagnosed  by  karyotype.  But  this  technique  is  time <br /> consuming and hardly avoid the concern for pregnant women. Based on the development of molecular biology in <br /> medicine, we apply quantitative fluorescent polymerase chain reaction technique (QF‐PCR) to detect aneuploidies <br /> in amniotic fluids from high risk pregnancy with reducing time. <br /> Objective: Detecting aneuploidies in amniotic fluids from high risk pregnancy.  <br /> Method:  DNA  from  amniotic  cells  were  extracted  and  then  performed  QF‐PCR.  The  fluorescent‐labeled <br /> amplicons were detected by capillary electrophoresis system. Then, these raw data were analyzed by specific software. <br /> * Bộ môn Hoá Sinh, Khoa Y, Đại học Y Dược TPHCM, ** Công ty Nam Khoa, *** Bệnh viện Phụ Sản Hùng Vương <br /> Tác giả liên lạc: ThS. BS. Hoàng Hiếu Ngọc  ĐT: 0988937406 <br /> Email: hoanghieungoc@yahoo.com <br /> <br /> 144<br /> <br /> Chuyên Đề Sức Khỏe Sinh Sản và Bà Mẹ Trẻ em <br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 <br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Results: From 03/2010 to 01/2011, we have 64 amniotic fluid samples.  There  are  10  cases  (16.9%)  with <br /> aneuploidies  including  3  cases  of  trisomy  21,  3  cases  of  trisomy  18,  1  case  of  Turner  syndrome,  3  cases  of <br /> Klinfelter syndrome. These results share the similarity of karyotype that also performed simultaneously at Hung <br /> Vuong Hospital. <br /> Conclusions: By applying QF‐PCR, we have built up the examination to detect aneuploidies from amniotic <br /> fluids successfully. Since, we open up the new trend of rapid prenatal diagosis in Vietnam. <br /> Keywords: QF‐PCR, prenatal diagnosis, aneuploidy. <br /> <br /> ĐẶT VẤN ĐỀ <br /> Bất  thường  số  lượng  nhiễm  sắc  thể  là <br /> nguyên  nhân  thường  gặp  nhất  của  dị  tật  bẩm <br /> sinh, ảnh hưởng lên 1 trong 165 trẻ sơ sinh(7). Sự <br /> bất thường nhiễm sắc thể ảnh hưởng lên thai kỳ, <br /> gây  dị  tật  bẩm  sinh  hoặc  sẩy  thai.  Khoảng  một <br /> nửa các trường hợp sẩy thai tự nhiên ở ba tháng <br /> đầu  là  do  nguyên  nhân  nhiễm  sắc  thể.  Bất <br /> thường  nhiễm  sắc  thể  phát  hiện  bằng  chọc  ối <br /> chiếm  30  –  35%  theo  sau  việc  siêu  âm  thấy  bất <br /> thường(11, 14). Bất thường nhiễm sắc thể được chia <br /> thành bất thường về cấu trúc và số lượng nhiễm <br /> sắc  thể.  Bất  thường  về  số  lượng  có  thể  là  thêm <br /> hẳn một bộ nhiễm sắc thể (đa bội) hoặc là thừa, <br /> thiếu  một  nhiễm  sắc  thể  (dị  bội)  thì  gặp  nhiều <br /> hơn  là  bất  thường  về  cấu  trúc  nhiễm  sắc  thể  ‐ <br /> chiếm đến khoảng 95% các trường hợp(13). <br /> Các trường hợp đa bội có thể là do rối loạn <br /> trong quá trình phân chia của trứng hay thường <br /> gặp hơn là 2 tinh trùng được thụ tinh vào cùng <br /> một trứng. Trái lại, dị bội vẫn là do không phân <br /> ly nhiễm sắc thể trong quá trình tạo giao tử của <br /> trứng, cho thấy nguyên nhân liên quan đến tuổi <br /> mẹ cao là chủ yếu. Đa số các trường hợp thụ thai <br /> tam  bội  là  do  một  trứng  được  thụ  tinh  với  hai <br /> tinh trùng. Vì vậy, thể tam bội thường có dạng <br /> nhiễm  sắc  thể  đồ  là  69,XXX;  69,XXY;  hay <br /> 69,XYY. Hầu hết các thai kỳ tam bội đều bị sẩy <br /> vào  ba  tháng  đầu  hoặc  thời  điểm  đầu  của  ba <br /> tháng giữa. Khoảng 7% trường hợp sẩy thai xác <br /> định trên lâm sàng là do tam bội. Lượng alpha – <br /> fetoprotein  trong  huyết  thanh  mẹ  thường  được <br /> lượng giá cho thai kỳ nghi ngờ tam bội(10). <br /> Dị  bội  nhiễm  sắc  thể  thường  là  dư  hay <br /> thiếu  một  chiếc  nhiễm  sắc  thể  (nhiễm  sắc  thể <br /> thường  hay  nhiễm  sắc  thể  giới  tính)  gây  ra <br /> <br /> Sản Phụ Khoa<br /> <br /> dạng  trisomy  hay  monosomy.  Hấu  hết  các <br /> dạng  trisomy  nhiễm  sắc  thể  thường  hay  một <br /> vài  loại  trisomy  của  nhiễm  sắc  thể  X  là  do <br /> không  phân  ly  nhiễm  sắc  thể  trong  quá  trình <br /> tạo  trứng  và  tỉ  lệ  mắc  các  loại  bất  thường <br /> nhiễm  sắc  thể  này  thường  liên  quan  đến  tuổi <br /> mẹ(9). Đối với hội chứng Kleinfelter 47, XXY thì <br /> tỉ  lệ  không  phân  ly  nhiễm  sắc  thể  ở  tế  bào <br /> trứng hay tinh trùng thì chiếm tỉ lệ bằng nhau, <br /> có khi tỉ lệ gặp ở tinh trùng chiếm tỉ lệ hơi cao <br /> hơn  (57%).  Không  giống  như  trisomy  các  loại <br /> nhiễm  sắc  thể  thường  khác,  monosomy  X  lại <br /> thường gặp ở những phụ nữ trẻ(13). <br /> Vài năm trở lại đây, nhiều kỹ thuật sinh học <br /> phân tử mới được phát triển với cùng một mục <br /> đích  phát  hiện  các  bất  thường  số  lượng  các <br /> nhiễm sắc thể và giúp chẩn đoán trước sinh các <br /> thai kỳ nguy cơ với thời gian nhanh hơn mà vẫn <br /> đảm bảo độ chính xác như kỹ thuật làm nhiễm <br /> sắc  thể  đồ.  Hiện  tại,  kỹ  thuật  QF  –  PCR  được <br /> dùng  trong  chẩn  đoán  nhanh  bất  thường  số <br /> lượng  nhiễm  sắc  thể  13,  18,  21,  X,  Y  ở  người. <br /> Trong  phạm  vi  nghiên  cứu  này,  chúng  tôi  tiến <br /> hành ứng dụng kỹ thuật trên để chẩn đoán bất <br /> thường dị bội thể 13, 18, 21, X, Y trên các mẫu ối <br /> được  thu  thập  tại  thành  phố  Hồ  Chí  Minh.  Từ <br /> đó,  đánh  giá  khả  năng  phát  triển  của  kỹ  thuật <br /> chẩn đoán trước sinh nhanh này tại Việt Nam. <br /> <br /> ĐỐI TƯỢNG ‐ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU <br /> Mẫu bệnh phẩm <br /> Mẫu  dịch  ối  từ  các  thai  kỳ  nguy  cơ  có  chỉ <br /> định chọc ối làm nhiễm sắc thể đồ từ bác sĩ lâm <br /> sàng.  Mẫu  được  để  ở  nhiệt  độ  2  –  8oC  cho  đến <br /> khi làm xét nghiệm. Tiêu chuẩn loại trừ là mẫu <br /> đã được trữ đông. <br /> <br /> 145<br /> <br /> Nghiên cứu Y học <br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014<br /> <br /> Trích biệt DNA tế bào ối <br /> Phương  pháp  tách  chiết  DNA  được  thực <br /> hiện theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Lấy 1000 <br /> μl  dịch  ối  cho  vào  1  tube  Eppendorf,  ly  tâm <br /> 14.000  rpm  trong  3  phút  để  làm  lắng  tế  bào  ối. <br /> Dịch  nổi  được  bỏ  đi,  thêm  vào  200  μl  PBS  để <br /> thuần nhất tế bào ối trở lại. Sau đó, chúng tôi sử <br /> dụng  bộ  tách  chiết  DNA  bằng  kit  thương  mại <br /> QIAGEN  DNA  Blood  Mini  kit.  Nồng  độ  DNA <br /> thích hợp cho phản ứng QF‐PCR là 1 – 10 ng nên <br /> sau khi đo nồng độ DNA, có thể tiến hành pha <br /> loãng  nếu  DNA  mẫu  có  nồng  độ  cao  hơn  tiêu <br /> chuẩn đề ra. <br /> <br /> Thực hiện kỹ thuật QF‐PCR.  <br /> Kỹ  thuật  QF  –  PCR  giúp  khuếch  đại,  phát <br /> hiện, phân tích trình tự đoạn lặp lại ngắn (STR) <br /> nằm trên các cặp nhiễm sắc thể 13,  18,  21,  X,  Y <br /> dựa trên các cặp mồi đặc hiệu được thiết kế sao <br /> <br /> cho  vùng  trình  tự  lặp  lại  được  nằm  giữa  hai <br /> đoạn mồi xuôi và ngược. Ngoài ra, ở đầu ở của <br /> các đoạn mồi xuôi cũng được gắn thêm các màu <br /> huỳnh  quang  nhằm  giúp  phát  hiện  sản  phẩm <br /> khuếch  đại  bằng  phương  pháp  điện  di  mao <br /> quản.  Trong  giai  đoạn  lũy  thừa  sớm  của  phản <br /> ứng  khuếch  đại,  lượng  sản  phẩm  khuếch  đại <br /> được  tạo  ra  tỉ  lệ  với  lượng  DNA  có  trong  mẫu <br /> ban  đầu.  Yếu  tố  tiên  quyết  cho  sự  thành  công <br /> của  kỹ  thuật  là  lượng  DNA  thích  hợp  cho  vào <br /> trong một phản ứng và số chu kỳ nhiệt của phản <br /> ứng PCR. <br /> Chúng tôi sử dụng bộ kit AneufastTM QF – <br /> PCR  kit  của  hãng  Molgentix  gồm  có  6  loại <br /> master  mix  là  S1,  S2,  MXY,  M13,  M18,  M21 <br /> khuếch đại các marker trên từng loại nhiễm sắc <br /> thể như sau: <br /> <br /> Bảng 1: Các loại dấu ấn được sử dụng trong bộ kit QF‐PCR <br /> S1<br /> AMXY<br /> D21S1414<br /> D21S1446<br /> D13S631<br /> D13S305<br /> D18S535<br /> D18S391<br /> <br /> S2<br /> SRY<br /> X22<br /> DXYS218<br /> HPRT<br /> D21S1411<br /> D21S1435<br /> D13S634<br /> D13S258<br /> D18S386<br /> D18S390<br /> <br /> MXY<br /> SRY<br /> AMXY<br /> HPRT<br /> SBMA*<br /> DXS6803*<br /> DXS6809*<br /> DXS8377*<br /> <br /> Hai bộ mix S1, S2 cho phép phân tích đồng <br /> thời  bốn  dấu  ấn  của  mỗi  nhiễm  sắc  thể  số  13, <br /> 21, 18, hai trình tự lặp lại ngắn trên giả nhiễm <br /> sắc  thể  thường  (X22,  DXY218),  Amelogenin <br /> (AMXY) và SRY. Sau khi chạy PCR trên 2 loại <br /> mix S1, S2, sản phẩm khuếch đại sẽ được trộn <br /> chung và điện di mao quản cùng một lượt. Bốn <br /> loại master mix còn lại (còn gọi là dấu ấn phụ) <br /> dùng  để  chạy  bổ  sung  khi  kết  quả  phân  tích <br /> S1S2 cho biết bốn dấu ấn của từng loại nhiễm <br /> sắc thể đều ở dạng đồng hợp. Khi đó, kết quả <br /> của  marker  phụ  tương  ứng  sẽ  cho  kết  quả  rõ <br /> ràng  hơn  hoặc  là  củng  cố  thêm  kết  quả  bất <br /> thường  có  được  từ  phân  tính  S1S2.  QF‐PCR <br /> được  thực  hiện  theo  chu  kỳ  nhiệt  như  sau: <br /> <br /> 146<br /> <br /> M21<br /> D21S1411<br /> D21S1435<br /> D21S1437*<br /> D21S1412*<br /> D21S1008*<br /> <br /> M18<br /> D18S386<br /> D18S391<br /> D18S858*<br /> D18S499*<br /> D18S1002*<br /> <br /> M13<br /> D13S631<br /> D13S634<br /> D13S742*<br /> D13S628*<br /> <br /> hoạt  hóa  men  Taq  polymerase  95oC/15  phút, <br /> biến  tính  95oC/40  giây,  bắt  cặp  60oC/90  giây, <br /> kéo  dài  72oC/40  giây,  kéo  dài  cuối  cùng <br /> 60oC/60 phút. Sản phẩm có thể được giữ ở 4oC <br /> đến khi bắt đầu điện di mao quản. <br /> <br /> Điện di mao quản sản phẩm khuếch đại.  <br /> Sản phẩm QF – PCR là những đoạn DNA có <br /> chiều  dài  khác  nhau,  được  đánh  dấu  huỳnh <br /> quang  ở  một  mạch  đơn  theo  nguyên  tắc  như <br /> sau:  Nếu  chiều  dài  đoạn  DNA  khác  nhau  giữa <br /> các  dấu  ấn  thì  màu  huỳnh  quang  giống  nhau. <br /> Nếu  chiều  dài  DNA  được  khuếch  đại  giống <br /> nhau  ở  hai  loại  dấu  ấn  khác  nhau  thì  sẽ  đánh <br /> dấu bằng các màu huỳnh quang khác nhau. Khi <br /> điện  di,  đoạn  ngắn  sẽ  chạy  đển  đầu  đọc  laser <br /> <br /> Chuyên Đề Sức Khỏe Sinh Sản và Bà Mẹ Trẻ em <br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 <br /> trước  và  đoạn  dài  sẽ  chạy  đến  sau.  Tín  hiệu <br /> được  ghi  nhận  bằng  phần  mềm  chuyên  dụng <br /> Data Collection Version 3.0 của hãng ABI. <br /> <br /> Phân tích kết quả QF‐PCR.  <br /> Sử dụng phần mềm phân tích Gene Marker <br /> phiên  bản  1.91.  Mẫu  được  xem  là  đạt  khi  xuất <br /> hiện đủ các tín hiệu của thang chuẩn, phân tích <br /> rõ các tín hiệu của các đoạn khuếch đại,  cường <br /> độ  huỳnh  quang  cao.  Phần  mềm  sẽ  tính  toán <br /> dựa trên diện tích và cường độ huỳnh quanh để <br /> tính ra tỉ lệ của các dấu ấn tương ứng của từng <br /> loại  nhiễm  sắc  thể  13,  18,  21,  X,  Y.  Mẫu  được <br /> xem  là  không  đạt  khi  không  xuất  hiện  đầy  đủ <br /> các  tín  hiệu  của  thang  chuẩn  hay  các  tín  hiệu <br /> huỳnh quang khuếch đại của dấu ấn các allele bị <br /> thiếu. <br /> <br /> KẾT QUẢ <br /> Từ  tháng  03/2010  đến  tháng  01/2011  chúng <br /> tôi thu thập được 64 mẫu ối từ thai kỳ nguy cơ. <br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Trong  đó  phát  hiện  được  10  trường  hợp  bất <br /> thường  (16,9%).  Tỉ  lệ  thực  hiện  kỹ  thuật  QF  – <br /> PCR thành công là 100% trên tất cả 64 mẫu dịch <br /> ối. Tất cả 64 mẫu này khi được ly trích DNA tế <br /> bào ối, thực hiện phản ứng QF – PCR và điện di <br /> mao quản cho tín hiệu huỳnh quang đẹp. Thực <br /> hiện  chế  độ  phân  tích  bằng  phần  mềm <br /> GeneMarker phiên bản 1.91 đều thành công với <br /> 64 mẫu. <br /> Trong số 64 mẫu được thực hiện QF – PCR, <br /> có 26 mẫu cho kết quả là nữ bình thường chiếm <br /> tỉ  lệ  40,6%,  29  mẫu  cho  kết  quả  là  nam  bình <br /> thường chiếm tỉ lệ 45,3%. QF – PCR đã phát hiện <br /> được  10  trường  hợp  bất  thường  gồm  3  mẫu <br /> trisomy  21,  3  mẫu  mang  hội  chứng  Klinefelter <br /> (XXY), 3 mẫu trisomy 18 (hội chứng Edward), 1 <br /> mẫu phát hiện monosomy X (hội chứng Turner). <br /> Khi  so  sánh  với  kết  quả  nhiễm  sắc  thể  đồ  thì <br /> chúng  tôi  thấy  QF‐PCR  đạt  độ  nhạy  và  độ  đặc <br /> hiệu là 100%. <br /> <br />  <br /> <br /> Hình 1: Kết quả trisomy 21 của một mẫu ối được thực hiện bằng kỹ thuật QF‐PCR <br /> <br /> Sản Phụ Khoa<br /> <br /> 147<br /> <br /> Nghiên cứu Y học <br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014<br /> <br />  <br /> <br /> Hình 2: Kết quả trisomy 21 trên dấu ấn phụ <br /> Bảng 2: Kết quả so sánh giữa QF‐PCR và nhiễm sắc thể đồ <br /> QF<br /> (40,6%)<br /> Nhiễm sắc thể đồ<br /> <br /> N<br /> <br /> XX<br /> <br /> XY<br /> <br /> T21<br /> <br /> T18<br /> <br /> XO<br /> <br /> XXY<br /> <br /> 64<br /> 29 (45,3%)<br /> 64<br /> <br /> 26<br /> 3(4,7%)<br /> 26 (40%)<br /> <br /> 3(4,7%)<br /> 29 (45%)<br /> <br /> 1 (1,6%)<br /> 3(4,7%)<br /> <br /> 3(4,7%)<br /> 3(4,7%)<br /> <br /> 1 (1,6%)<br /> <br /> 3 (4,7%)<br /> <br /> BÀN LUẬN <br /> Chúng tôi đã thực hiện kỹ thuật QF‐PCR cho <br /> kết quả tương đồng với kỹ thuật nhiễm sắc thể <br /> đồ 100%. Đồng thời, kỹ thuật QF‐PCR đưa ra kết <br /> quả  nhanh  và  đáng  tin  cậy  trong  vòng  24  giờ. <br /> Những  bất  thường  dị  bội  thể  thường  gặp  đã <br /> được phát hiện thành công trong tất cả các mẫu. <br /> Các  thao  tác  trong  kỹ  thuật  QF  khá  đơn  giản, <br /> thực hiện nhanh. Vì vậy, ưu điểm đầu tiên của <br /> kỹ  thuật  QF  là  ít  tốn  thời  gian  hơn  so  với  kỹ <br /> thuật nhiễm sắc thể đồ. <br /> Kỹ  thuật  QF  cơ  bản  được  dựa  trên  là  kỹ <br /> thuật  PCR  kinh  điển  trong  đó  cải  tiến  thêm  về <br /> khả năng khuếch đại được nhiều loại DNA đích <br /> khác nhau trong 1 phản ứng PCR đồng thời các <br /> loại mồi xuôi được đánh dấu bởi các màu huỳnh <br /> quanh khác nhau giúp phát hiện được sản phẩm <br /> khuếch đại bằng hệ thống điện di mao quản và <br /> phân biệt từng nhóm sản phẩm khuếch đại dựa <br /> <br /> 148<br /> <br /> trên  màu  huỳnh  quang  và  chiều  dài  đoạn <br /> khuếch đại. Kết quả điện di phát hiện các đỉnh <br /> huỳnh  quang  được  ghi  nhận  bằng  phần  mềm <br /> đọc  tín  hiệu  chuyên  dụng.  Bên  cạnh  đó,  phần <br /> mềm  phân  tích  (GeneMarker  phiên  bản  1.91) <br /> giúp  ta  tính  toán  được  cường  độ  màu  huỳnh <br /> quang và diện tích các đỉnh từ đó tính ra được tỉ <br /> lệ  bình  thường  hay  bất  thường  của  mẫu.  Điều <br /> này giúp cho việc nhận định kết quả QF vô cùng <br /> khách quan, không phụ thuộc vào cái nhìn cảm <br /> quan của người làm thí nghiệm. <br /> Dịch ối có đôi khi không tránh khỏi bị lẫn tế <br /> bào  máu  mẹ;  tùy  thuộc  vào  lượng  máu  mẹ  bị <br /> nhiễm  vào  nhiều  hay  ít  mà  kết  quả  QF  không <br /> hoặc có thể sai lệch. Nếu lượng máu mẹ nhiễm <br /> chỉ chiếm khoảng dưới 20% tổng lượng tế bào ối <br /> thu  thập  được  thì  kết  quả  QF  sẽ  không  bị  ảnh <br /> hưởng. Đối với những mẫu ối bị nhiễm máu mẹ <br /> nhiều, ta có thể nuôi cấy để loại đi tế bào máu. <br /> <br /> Chuyên Đề Sức Khỏe Sinh Sản và Bà Mẹ Trẻ em <br /> <br />