Xây dựng quy trình ASO PCR xác định điểm đa hình RS2231142 trên ABCG2

Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 1 * 2018<br /> <br /> <br /> XÂY DỰNG QUY TRÌNH ASO PCR XÁC ĐỊNH ĐIỂM ĐA HÌNH rs2231142<br /> TRÊN ABCG2<br /> Mai Phương Thảo*, Lê Thị Kim Hoàng**<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Đặt vấn đề: Protein ABCG2 (ATP binding cassette sub-family G member 2) là một protein vận chuyển<br /> nằm trên màng tế bào thuộc đại gia đình protein vận chuyển phụ thuộc ATP. Protein ABCG2 được mã hóa bởi<br /> gen ABCG2 nằm trên nhánh dài nhiễm sắc thể số 4, có vai trò vận chuyển các thuốc hóa trị ung thư, nhiều nhóm<br /> thuốc và hợp chất nhau (statin, cimetidine, flavonoid…). Các nghiên cứu gần đây, phát hiện vai trò vận chuyển<br /> và bài tiết acid uric ở thận, gan, ruột và não của protein ABCG2. Gen ABCG2 có tính đa hình tương đối cao,<br /> trong đó r2231142 (Q141K, 421.C>A) là điểm đa hình được nghiên cứu nhiều nhất có ý nghĩa quan trọng trong<br /> chuyển hóa thuốc và acid uric. Biến thể Q141K vừa làm giảm biểu hiện protein ABCG2 vừa làm giảm hoạt động<br /> vận chuyển phụ thuộc ATP của protein này. Việc xác định biến thể rs2231142 trên gen ABCG2 có ý nghĩa quan<br /> trọng đối với dược động học, chuyển hóa và đào thải của các loại thuốc cũng như chuyển hóa acid uric. Có nhiều<br /> phương pháp để phát hiện vị trí đột biến gen như giải trình tự, ASO-PCR, RFLP PCR… trong đó, giải trình tự<br /> chuỗi DNA vẫn là tiêu chuẩn vàng. Tuy nhiên phương pháp này có điểm hạn chế là chi phí cao và thời gian trả<br /> kết quả chậm. Để khắc phục các nhược điểm này của phương pháp giải trình tự DNA, một yêu cầu đặt ra là cần<br /> có phương pháp phát hiện biến thể rs2231142 trên gen ABCG2 chi phí thấp hơn, thời gian trả kết quả nhanh hơn<br /> nhưng vẫn đảm bảo độ chính xác.<br /> Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng quy trình ASO PCR xác định điểm đa hình rs2231142 trên gen ABCG2.<br /> Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Phân tích mẫu máu ngoại vi của bệnh nhân được chẩn đoán<br /> Parkinson đến khám tại Phòng khám Thần kinh, Bệnh viện Đại Học Y Dược Thành Phố Hồ Chí Minh. Tiến hành<br /> tách chiết DNA, sử dụng kỹ thuật ASO-PCR xác định điểm đa hình, so sánh với kết quả giải trình tự Sanger.<br /> Kết quả: Chúng tôi đã xác định được trình tự cặp mồi phản ứng ASO PCR nhận diện đặc hiệu đúng<br /> nucleotide A ở vị trí 421 với độ nhạy và đặc hiệu 100%, đồng thời thiết lập thành công điều kiện phản ứng tối ưu<br /> của phản ứng ASO PCR xác định điểm đa hình rs2231142 (Q141K) trên gen ABCG2.<br /> Kết luận: Việc thiết kế cặp mồi đặc hiệu cho phản ứng ASO PCR trong xác định điểm đa hình gen cho phép<br /> phân tích gen nhanh chóng, tiết kiệm thời gian và chi phí nhưng vẫn đảm bảo độ nhạy và độ đặc hiệu cao.<br /> Từ khóa: Bệnh Parkinson, biến thể ABCG2 (rs2231142), uric acid, ASO-PCR, giải trình tự Sanger.<br /> ABSTRACT<br /> APPLICATION OF ASO-PCR FOR DETECTING SINGLE-NUCLEOTIDE POLYMORPHISM IN ABCG2<br /> (rs2231142)<br /> Mai Phuong Thao, Le Thi Kim Hoang<br /> * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Supplement Vol. 22 - No 2- 2018: 218 - 224<br /> <br /> Introduction: ABCG2 belongs to ATP binding cassette sub-family G member 2, which is encoded by on<br /> chromosome 4 and related to drugs-resistance and exporter. Recent studies showed the function of ABCG2 in the<br /> transportation and excretion of urate in renal, liver, colon and brain. rs2231142 is a common variant of ABCG2<br /> in which glutamine at codon 141 is mutated to lysine (Q141K). The resultant missense polymorphism at codon<br /> 141 (Q141K) has been shown to be a loss-of-function mutation. The detection of ABCG2 variant (rs2231142)<br /> plays an important role in evaluating the metabolism of different drugs and even uric acid. There are various<br /> * Khoa Xét nghiệm, BV đa khoa Đồng Tháp, **Bộ môn Sinh lý học, Đại Học Y Dược TP.HCM<br /> Tác giả liên lạc: TS. Mai Phương Thảo ĐT: 0918329999 Email:maithao292@gmail.com<br /> 224 Chuyên Đề Nội Khoa<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 1 * 2018 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> methods in detecting single-point mutation, such as gene sequencing, ASO-PCR, RFLP PCR…., the most<br /> valuable standard among of which is gene sequencing. However, this technique is time-consuming and high cost.<br /> From this issue, it is necessary to find out a method which allows the result faster, low-cost, sensitive and specific.<br /> Objectives: Establish ASO-PCR procedure to analyze the single-nucleotide polymorphism rs2231142<br /> (Q141K) of ABCG2.<br /> Materials and Methods: DNA was extracted from 2 mL of peripheral blood sample of 30 Parkinson<br /> patients in the Department of Neurology, University Medical Center. These DNA were respectively applied to<br /> ASO-PCR, and then compared to Sanger sequencing results.<br /> Results: We identified specific primers of ASO-PCR that allows the detection of rs2231142 (Q141K).<br /> Conclusion: The application of ASO- PCR method to analyze ABCG2 polymorphism rs2231142 gives the<br /> result less time-consuming, low-cost, highly sensitive and specific.<br /> Keywords: Parkinson’s Disease, ABCG2 variant (rs2231142), uric acid, ASO-PCR, Sanger sequencing.<br /> ĐẶT VẤN ĐỀ acid uric còn có chức năng bảo vệ trong bệnh lý<br /> Parkinson, mở ra hướng nghiên cứu nhằm làm<br /> Protein ABCG2 (ATP binding cassette sub-<br /> rõ cơ chế sinh bệnh cũng như các yếu tố liên<br /> family G member 2) là một protein vận chuyển<br /> quan đến nồng độ acid uric máu và bệnh<br /> nằm trên màng tế bào thuộc đại gia đình protein Parkinson. Các công trình nghiên cứu đã phát<br /> vận chuyển phụ thuộc ATP, được phát hiện lần hiện rằng những người mang biến thể rs2231142<br /> đầu vào năm 1998 với vai trò vận chuyển các<br /> trên gen ABCG2 sẽ có nồng độ acid uric trong<br /> thuốc hóa trị ung thư như mitoxantrone,<br /> máu cao dẫn đến nguy cơ mắc bệnh gout cao<br /> doxorubicin, daunorubicin… ra khỏi các tế bào<br /> hơn nhưng lại giảm nguy cơ mắc bệnh<br /> ung thư vú MCF-7/AdrVp dẫn đến tình trạng<br /> Parkinson so với những người không mang biến<br /> kháng thuốc của các tế bào này. Vì vậy, tại thời<br /> thể này.<br /> điểm được phát hiện, chúng được đặt tên là<br /> Việc xác định biến thể rs2231142 trên gen<br /> protein đề kháng ung thư vú (BCRP: breast<br /> ABCG2 có ý nghĩa quan trọng đối với dược động<br /> cancer resistance protein)(1). Các nghiên cứu gần<br /> học, chuyển hóa và đào thải của các loại thuốc<br /> đây phát hiện vai trò của protein ABCG2 trong<br /> cũng như chuyển hóa acid uric. Cho đến nay, có<br /> vận chuyển và bài tiết acid uric ở thận, gan, ruột<br /> nhiều phương pháp để phát hiện biến thể, trong<br /> và não.<br /> đó, giải trình tự chuỗi DNA vẫn là tiêu chuẩn<br /> Gen ABCG2 mã hóa protein nằm trên nhánh<br /> vàng. Tuy nhiên phương pháp này có nhiều<br /> dài nhiễm sắc thể số 4 có tính đa hình tương đối<br /> điểm hạn chế là chi phí cao, tốn kém và thời gian<br /> cao với hơn 80 điểm đa hình nucleotide đơn,<br /> trả kết quả chậm. Để khắc phục các nhược điểm<br /> trong đó, rs2231142 (Q141K) là điểm đa hình<br /> này của phương pháp giải trình tự DNA, một<br /> được nghiên cứu nhiều nhất vì có ảnh hưởng<br /> yêu cầu đặt ra là cần có phương pháp phát hiện<br /> đến chuyển hóa thuốc và acid uric trong cơ thể.<br /> biến thể rs2231142 trên gen ABCG2 chi phí thấp<br /> Biến thể Q141K vừa làm giảm biểu hiện protein<br /> hơn, thời gian trả kết quả nhanh hơn nhưng vẫn<br /> ABCG2 vừa làm giảm hoạt động vận chuyển<br /> đảm bảo độ chính xác. Trong nghiên cứu này,<br /> phụ thuộc ATP của protein này. Người mang<br /> chúng tôi áp dụng kỹ thuật ASO-PCR (Allele<br /> biến thể rs2231142 có nồng độ acid uric máu cao<br /> Specific Oligonucleotide Polymerase) xác định<br /> hơn và có nguy cơ mắc bệnh gout cao hơn 53%<br /> oligonucleotide đặc trưng alen, dựa trên nguyên<br /> so với nhóm không mang biến thể(3). Ngoài vai<br /> tắc phản ứng khuếch đại gen sử dụng cặp mồi<br /> trò quan trọng trong bệnh gout và là một yếu tố<br /> đặc hiệu nhận diện vị trí đột biến. Sau đó sản<br /> liên quan đến bệnh lý tim mạch và chuyển hóa,<br /> <br /> <br /> <br /> Chuyên Đề Nội Khoa 225<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 1 * 2018<br /> <br /> phẩm khuếch đại được đem điện di và xác định quan sát dưới màn soi gel GelDoc-It TS 310<br /> kiểu gen dựa trên sản phẩm điện di. (UVP, Mỹ).<br /> ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Phân tích kết quả điện di sản phẩm ASO PCR<br /> Đối tượng nghiên cứu Mồi WT nhận diện alen C, 4 cặp mồi đột<br /> biến nhận diện alen A với cách thiết kế khác<br /> Mẫu DNA từ máu ngoại vi của bệnh nhân<br /> nhau, kết hợp cả hai alen từ mồi WT và đột<br /> Parkinson đến khám tại Phòng khám Thần kinh<br /> biến sẽ cho kiểu gen của mẫu DNA. Nếu mồi<br /> Bệnh viện Đại học Y Dược TPHCM.<br /> đột biến nào cho sản phẩm điện di có kiểu gen<br /> Phương pháp nghiên cứu giống với kết quả giải trình tự thì mồi đó được<br /> Tách chiết genomic DNA từ máu ngoại vi xem là đặc hiệu.<br /> Quy trình tách chiết DNA từ 200 µl máu KẾT QUẢ<br /> ngoại vi được tiến hành theo hướng dẫn sử<br /> dụng của bộ kit DNA Blood SV mini (GeneAll® Thiết kế mồi phản ứng ASO-PCR nhận diện<br /> Exgene™). DNA được tiến hành đo nồng độ và điểm đa hình rs2241142 gen ABCG2<br /> độ tinh sạch, những mẫu được sử dụng phải có Để thiết kế mồi cho phản ứng ASO PCR<br /> tỷ lệ về mật độ quang đo ở bước sóng 260/280 chúng tôi thiết kế mồi bằng thủ công và kiểm tra<br /> đạt ≥ 1,8. mồi dựa vào phần mềm Oligo Analyzer 3.1(IDT)<br /> (sg.idtdna.com/calc/analyzer). Chọn vùng trình<br /> Thiết kế mồi<br /> tự để thiết kế mồi tính từ vị trí đột biến lên phía<br /> Cặp mồi sử dụng đề khuếch đại và giải trình trên khoảng 18 đến 25 nucleotide. Tất cả các cặp<br /> tự exon 5 và nhận diện nucleotide ở vị trí 421 của mồi đều có chung mồi ngược là mồi của phản<br /> gen ABCG2 được thiết kế đặc hiệu dựa trên trình ứng PCR khuếch đại. Cặp mồi 1 (mồi WT): mồi<br /> tự chuẩn NG_032067.2 trong GenBank. xuôi nhận diện nucleotide không đột biến; Cặp<br /> Thiết lập điều kiện cho các PCR khuếch đại mồi 2 (mồi F2.1): mồi xuôi nhận diện tại vị trí đột<br /> tương ứng với từng cặp mồi biến; Cặp mồi 3 (mồi F2.2): mồi xuôi vừa nhận<br /> 25 l phản ứng với thành phần phản ứng và diện tại vị trí đột biến vừa gây sai lệch thêm một<br /> chu trình luân nhiệt theo hướng dẫn của nhà sản vị trí đột biến kế bên vị trí của SNP; Cặp mồi 4<br /> xuất (Hot Start Taq Polymerase, Takara). (mồi F2.3): mồi xuôi vừa nhận diện tại vị trí đột<br /> biến vừa gây sai lệch thêm một vị trí đột biến<br /> Kiểm tra sản phẩm PCR bằng điện di<br /> cách hai nucleotide so với vị trí của SNP; Cặp<br /> Kiểm tra sản phẩm PCR bằng điện di trên<br /> mồi 5 (mồi F2.4): mồi xuôi vừa nhận diện tại vị<br /> gel agarose 2% có nhuộm ethium bromide và<br /> trí đột biến vừa gây sai lệch thêm một vị trí đột<br /> biến cách ba nucleotide so với vị trí của SNP.<br /> Bảng 1. Trình tự mồi dùng cho phản ứng PCR-giải trình tự và ASO PCR. (F:mồi xuôi, R: mồi ngược, WT: mồi<br /> nhận diện nucleotide C ở vị trí 421)<br /> Ký hiệu Trình tự mồi (5’- 3’) Kích thước (bp) Sản phẩm PCR (bp) Ghi chú<br /> Mồi phản ứng PCR F GCAGGTTCATCATTAGCTAG 20<br /> 339<br /> khuếch đại exon 5 R CAGGGAAAGTCCTACTTATG 20 Tất cả phản ứng<br /> WT GACGGTGAGAGAAAACTTAC 20 183 Cặp mồi 1<br /> F2.1 GACGGTGAGAGAAAACTTAA 20 183 Cặp mồi 2<br /> Mồi phản ứng<br /> F2.2 GACGGTGAGAGAAAACTTCA 20 183 Cặp mồi 3<br /> ASO PCR<br /> F2.3 GACGGTGAGAGAAAACTGAA 20 183 Cặp mồi 4<br /> F2.4 GACGGTGAGAGAAAACCTAA 20 183 Cặp mồi 5<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> 226 Chuyên Đề Nội Khoa<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 1 * 2018 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> <br /> PCR khuếch đại và giải trình tự Sanger đúng kích thước ước đoán. Giải trình tự Sanger<br /> Sản phẩm khuếch đại exon 5 gen ABCG2 cho phép xác định trình tự nucleotide ở vị trí 421<br /> được kiểm tra bằng điện di cho băng sản phẩm (Hình 1).<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 1. Kết quả điện di kiểm tra sản phẩm khuếch đại exon 5 (trái) và giải trình tự Sanger xác định kiểu gen CC,<br /> CA, AA (phải).<br /> Phân tích kiểu gen dựa trên kết quả điện di sản A không xuất hiện băng thì mẫu DNA có kiểu<br /> phẩm phản ứng ASO-PCR gen là CC. Mồi wide-type nhận diện C xuất hiện<br /> Mỗi phản ứng ASO PCR sẽ được thực hiện băng, mồi nhận diện A có xuất hiện băng thì<br /> với cả hai cặp mồi, một cặp mồi nhận diện vị trí mẫu DNA có kiểu gen là CA. Mồi wide-type<br /> C và một cặp mồi nhận diện vị trí A. Mồi wide- nhận diện C không xuất hiện băng nên<br /> type nhận diện C xuất hiện băng, mồi nhận diện nucleotide C đã đột biến thành A, mồi nhận diện<br /> <br /> <br /> Chuyên Đề Nội Khoa 227<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 1 * 2018<br /> <br /> A có băng sản phẩm điện di là alen A, nên có phương pháp đó trong các phòng thí nghiệm.<br /> kiểu gen là AA (Hình 2). Phương pháp ASO PCR đặc hiệu đã được phát<br /> triển để phân tích alen các đột biến có ý nghĩa<br /> lâm sàng. Chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu<br /> phương pháp ASO PCR trên bệnh nhân<br /> Parkinson nhằm khuếch đại exon 5 trên gen<br /> ABCG2 tìm alen A trong các mẫu phân tích, so<br /> sánh với kết quả giải trình tự. Đối với phản ứng<br /> ASO PCR, quan trọng nhất là thiết kế mồi đặc<br /> hiệu để nhận diện điểm đa hình. Trong nghiên<br /> cứu này, điểm đa hình mà chúng tôi muốn xác<br /> định là rs2231142 trên gen ABCG2 nghĩa là phát<br /> hiện đột biến làm thay đổi nucleotide C thành A<br /> tại vị trí nucleotide 421 trên exon 5 của gen<br /> ABCG2 nên chúng tôi tiến hành thiết kế mồi<br /> Hình 2. Phân tích kết quả điện di sản phẩm ASO- nhận diện nucleotide C có trình tự nucleotide<br /> PCR xác định kiểu gen CC, AA và CA. bình thường và mồi nhận diện nucleotide bị biến<br /> So sánh kết quả ASO-PCR với giải trình tự đổi C thành A. Có nhiều cách thiết kế khác nhau<br /> Sanger xác định cặp mồi đặc hiệu nhận diện để nhận diện nucleotide bị biến đổi C thành A.<br /> điểm đa hình rs2231142 Thông thường, khi thiết kế ngoài vị trí đột biến<br /> Mồi wild-type nhận diện đúng C ở tất cả 30 cần nhận diện cần gây thêm vị trí đột biến khác<br /> mẫu DNA bằng phương pháp ASO PCR. Bốn tùy từng vị trí gây thêm mà xác định cặp mồi<br /> cặp mồi nhận diện vị trí đột biến thì có hai cặp nào đặc hiệu hơn. Trong nghiên cứu này, chúng<br /> mồi F2.3 và F2.4 cho kết quả nhận diện đều tôi đã thiết kế được 4 cặp mồi nhận diện<br /> giống nhau, trong khi đó cặp mồi F2.2 nhận diện nucleotide bị biến đổi C thành A với các vị trí<br /> không giống hai cặp mồi F2.3 và F2.4 tất cả mười thêm vào đột biến khác nhau.<br /> vị trí, còn cặp mồi F2.1 nhận diện không giống Trong nghiên cứu này, chúng tôi ghi nhận<br /> một vị trí. thiết kế mồi nhận diện ngay tại vị trí đột biến cần<br /> Trong các cặp mồi nhận diện vị trí đột gây thêm một vị trí đột biến khác cách 2 hoặc 3<br /> biến, tất cả bốn cặp mồi đều có độ đặc hiệu là nucleotide kể từ vị trí đột biến cần nhận diện thì<br /> 100%; hai cặp mồi F2.3 và F2.4 nhận diện đúng sẽ đặc hiệu hơn. Kết quả của chúng tôi hoàn toàn<br /> vị trí A có độ nhạy là 100%, cặp mồi F2.1 có độ phù hợp với kết quả của tác giả Jing Liu và cộng<br /> nhạy 93,75% và cặp mồi F2.2 có độ nhạy là sự (2012) trong việc gây thêm vị trí đột biến<br /> 60% (Bảng 2). nucleotide thứ 3 từ đầu 3’, có độ đặc hiệu alen<br /> cao nhất (81,9%)(2). Tuy nhiên, tác giả Jing Liu và<br /> BÀN LUẬN cộng sự áp dụng kỹ thuật ASO PCR trên đối<br /> Trong những năm gần đây, có nhiều phương tượng khác với của chúng tôi.<br /> pháp phân tích biến thể nucleotide khác nhau Từ kết quả so sánh độ nhạy độ đặc hiệu của<br /> như RFLP, AFLP, giải trình tự gen là tiêu chuẩn các mồi với giải trình tự bằng kỹ thuật Sanger,<br /> vàng đã được mô tả. Mặc dù các phương pháp chúng tôi nhận thấy giải trình tự là tiêu chuẩn<br /> này cho hiệu quả cao so với các phân tích kiểu vàng nhưng có nhược điểm mất rất nhiều thời<br /> gen truyền thống khác bằng điện di, nhưng việc gian qua nhiều giai đoạn dẫn đến chi phí cao và<br /> trang bị nhiều thiết bị đặc biệt đắt tiền, thời gian thời gian trả kết quả chậm mất ít nhất 02 ngày<br /> trả kết quả chậm… đã hạn chế việc sử dụng các trong khi đó kỹ thuật ASO PCR rút ngắn thời<br /> <br /> <br /> 228 Chuyên Đề Nội Khoa<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 1 * 2018 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> gian trả kết quả nên đã hạn chế được nhược 5 giờ để cho ra kết quả với một quy trình đơn<br /> điểm qui trình phức tạp đòi hỏi chuyên môn cao giản, dễ tiến hành hơn giải trình tự bằng kỹ<br /> và tốn nhiều thời gian của giải trình tự bằng kỹ thuật Sanger (Hình 3).<br /> thuật Sanger. ASO PCR chỉ tốn tối đa khoảng 4 -<br /> Bảng 2. Kết quả so sánh độ nhạy và độ đặc hiệu của bốn cặp mồi sử dụng trong phản ứng ASO-PCR<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Chuyên Đề Nội Khoa 229<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 1 * 2018<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 3. Thời gian tiến hành thực hiện phản ứng ASO PCR (5 giờ)<br /> Kỹ thuật ASO PCR tương đối khá mới và pháp PCR giải trình gen bằng kỹ thuật Sanger<br /> chưa được áp dụng rộng rãi trên thế giới cũng như sau:<br /> như ở Việt Nam. Trên thế giới có rất nhiều công Mồi xuôi: GACGGTGAGAGAAAACTGAA<br /> trình nghiên cứu về gen ABCG2 nhưng đa số là hoặc GACGGTGAGAGAAAACCTAA.<br /> nghiên cứu về mối liên quan giữa gen ABCG2 và Mồi ngược: CAGGGAAAGTCCTACTTATG<br /> các bệnh lý, tuy nhiên kỹ thuật phát hiện đột<br /> biến thì sử dụng các kỹ thuật khác. Hiện tại<br /> TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> 1. Doyle LA, et al. (1998), "A multidrug resistance transporter<br /> chúng tôi chưa ghi nhận được trường hợp nào from human MCF-7 breast cancer cells". Proc Natl Acad Sci U S<br /> phát hiện biến thể Q141K bằng kỹ thuật ASO A, 95 (26),pp.15665-70<br /> PCR trên thế giới cũng như ở Việt Nam nên 2. Jing L, et al. (2012), "An improved allele-specific PCR primer<br /> design method for SNP marker analysis and its application".<br /> chúng tôi chưa có dữ liệu để so sánh kết quả với Plant Methods, 8 (1),pp.1<br /> các tác giả khác. 3. Woodward OM, Köttgen A, Coresh J, Boerwinkle E, Guggino<br /> WB, Köttgen M (2009), "Identification of a urate transporter,<br /> KẾT LUẬN ABCG2, with a common functional polymorphism causing<br /> gout". Proceedings of the National Academy of Sciences, 106<br /> Qua kết quả nghiên cứu chúng tôi xác định (25),pp.10338-10342.<br /> hai cặp mồi nhận diện đúng nucleotide A ở vị trí<br /> 421 của gen ABCG2 với độ nhạy và độ đặc hiệu<br /> Ngày nhận bài báo: 16/11/2017<br /> là 100% cũng như giá trị chẩn đoán âm là 100%,<br /> Ngày phản biện nhận xét bài báo: 17/11/2017<br /> cho kết quả hoàn toàn trùng hợp với phương<br /> Ngày bài báo được đăng: 15/03/2018<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> 230 Chuyên Đề Nội Khoa<br />