BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP. HỒ CHÍ MINH
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP
NGHIÊN CỨU TRÍCH LY THÀNH PHẦN
FLAVONOID TỪ LÁ CỦ ĐẬU VÀ THỬ NGHIỆM
ĐỘC TÍNH TRÊN MÔ HÌNH IN VITRO
Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC
Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC
Giảng viên hướng dẫn : ThS.NGUYỄN THỊ THU HƯƠNG
Sinh viên thực hiện: HUỲNH KIM KHÁNH
MSSV: 1211100258 Lớp: 12DSH01
TP. Hồ Chí Minh, 2016
LỜI CAM ĐOAN
Tôi xin cam đoan các số liệu và kết quả nghiên cứu trong đồ án này là trung
thực và chưa từng được các tác giả khác công bố trong các nghiên, đồ án nào
Tôi xin cam đoan mọi sự giúp đỡ trong việc hoàn thành luận án đã được cảm
ơn và các thông tin trích dẫn trong đồ đã được ghi rõ nguồn gốc.
Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm về những số liệu trong đồ án này.
TP.HCM, ngày tháng năm 2016
Sinh viên
LỜI CẢM ƠN
Để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này, bên cạnh sự cố gắng nỗ lực của bản
thân, tôi đã nhận được sự động viên và giúp đỡ rất lớn từ cá nhân và tập thể.
Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới giáo viên hướng dẫn ThS. Nguyễn Thị
Thu Hương, giảng viên Khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường, người
đã tận tình giúp đỡ, hướng dẫn, tạo điều kiện tốt nhất cho tôi thực hiện và hoàn thành
luận văn tốt nghiệp này.
Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô Phòng thí nghiệm Trường Đại học Công
nghệ TP. HCM đã tạo mọi điều kiện cơ sở vật chất tốt cho tôi thực hiện và hoàn thành
luận văn này.
Tôi xin chân thành cảm ơn sự giúp đỡ của các bạn trong nhóm sinh viên làm
nghiên cứu khoa học đã nhiệt tình giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài.
Tôi xin chân thành gửi lời cảm ơn đến gia đình và bạn bè đã động viên giúp
đỡ và tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài và hoàn
thành luận văn này.
TP.HCM, ngày tháng năm 2016
Sinh viên thực hiện
Huỳnh Kim Khánh
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP
1
MỤC LỤC
MỤC LỤC .................................................................................................................. 1
DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ................................................................................ 4
DANH MỤC BẢNG .................................................................................................. 5
DANH MỤC SƠ ĐỒ ................................................................................................. 6
DANH MỤC HÌNH ................................................................................................... 7
MỞ ĐẦU .................................................................................................................... 9
CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU................................................................ 14
1.1. Tổng quan về cây củ đậu ........................................................................... 14
1.1.1. Nguồn gốc và phân loại ....................................................................... 14
1.1.2. Đặc điểm và sinh thái .......................................................................... 15
1.1.3. Tình hình trồng trọt, tiêu thụ và kỹ thuật canh tác cây củ đậu ở Việt
Nam….. .............................................................................................................. 16
1.1.4. Thành phần hóa học ............................................................................ 21
1.1.5. Tính vị và công dụng ........................................................................... 21
1.2. Hợp chất Phenol, Flavonoid và Rotenone ............................................... 22
1.2.1. Phenol ................................................................................................... 22
1.2.2. Flavonoid .............................................................................................. 25
1.2.3. Rotenone ............................................................................................... 30
1.3. Các phương pháp tách chiết hợp chất thứ cấp trong thực vật ............. 33
1.3.1. Kỹ thuật chiết lỏng – lỏng .................................................................... 33
1.3.2. Kỹ thuật chiết rắn – lỏng ..................................................................... 35
1.4. Phương pháp đánh giá độc tính và xác định giá trị LC50 ...................... 41
1.5. Phương pháp xác định khả năng đối kháng với vi sinh vật gây bệnh .. 45
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP
2
1.6. Sinh vật thí nghiệm .................................................................................... 47
1.6.1. Động vật giáp xác - Artemia Nauplii .................................................. 47
1.6.2. Các chủng vi sinh vật thí nghiệm ........................................................ 49
CHƯƠNG 2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP .................................................. 56
2.1. Thời gian và địa điểm nghiên cứu ............................................................ 56
2.2. Vật liệu nghiên cứu .................................................................................... 56
2.3. Dụng cụ và hóa chất thí nghiệm ............................................................... 56
2.3.1. Dụng cụ ................................................................................................ 56
2.3.2. Hóa chất ............................................................................................... 57
2.4. Phương pháp .............................................................................................. 57
2.5. Nội dung thí nghiệm .................................................................................. 58
2.5.1. Phương pháp tách chiết và thu cao chiết ........................................... 59
2.5.2. Phương pháp định tính một số hợp chất thứ cấp trong lá cây củ
đậu…… .............................................................................................................. 62
2.5.3. Phương pháp định lượng một số hợp chất thứ cấp trong lá củ đậu . 63
2.5.4. Phương pháp đánh giá độc tính .......................................................... 66
2.5.5. Phương pháp đánh giá khả năng kháng khuẩn ................................ 68
CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ......................................................... 73
3.1. Thu nhận cao chiết từ lá củ đậu bằng các phương pháp và dung môi
khác nhau.............................................................................................................. 73
3.2. Định tính một số hợp chất thứ cấp trong lá củ đậu ................................ 74
3.2.1. Định tính flavonoid .............................................................................. 74
3.2.2. Định tính rotenone ............................................................................... 75