ƯƠ

NG

Ệ

NG ĐH CÔNG NGHI P

Ồ

Ẩ Ủ Ả

Ộ  B  CÔNG TH ƯỜ TR Ự TH C PH M TP. H  CHÍ MINH KHOA TH Y S N MÔN:MÔN:

Ự

Ẩ

MÔN: PHÂN TÍCH VI SINH TH C PH M

Ề Ị Đ  TÀI:

Ễ

Ị

Ệ

GVHD: NGUY N TH  KIM OANH

Ự NHÓM TH C HI N: 7

QUY TRÌNH Đ NH L ƯƠ Ằ ƯỢ NG S.AUREUS  Ế NG PHÁP Đ M ĐĨA B NG PH

ề

ặ ể

ẩ

ệ ử ả ứ

ườ

ế ươ ư ụ ặ ng manitol, trehalose, sucrose ả ứ ng ph n  ng đông t huy t t

ả ữ ườ ứ ế ớ

ế ế ng ti p xúc v i  i thao tác trong quá trình ch  bi n. Ngoài ra còn có trên

ọ ế ụ ẩ ổ 1. T ng quan v  vi khu n staphylococcus aureus: Đ c đi m: ị ế ­ Hi u khí hay k  khí tùy ý ầ ­ C u khu n, Gram (+), chùm nho ­ Có th  nghi m coagulase, ph n  ng DNA, phosphatese ả ­ Kh  năng lên men đ ả ứ ­ Ph n  ng đ c tr ng:  Phân b :ố ị ­ Th t, cá, rau qu ,s a, tr ng,…qua con đ ườ ng lông, m n nh t, v t th ươ ,… ng

ả ưở ườ ng trong môi tr ng ch a đ n ứ ế 15%

ắ ố ề ạ s c t vàng sau 1 – 2 ngày

t đ  phòng. ề ệ ­ Có kh  năng tăng tr NaCl. ế ầ ­ H u h t các vòng tan máu đ u t o  ệ ộ ấ ở nuôi c y  ạ ­ T o đ c t ộ ố Enterotoxin b n nhi nhi t.

staphylococcus aureus

ị

Quy trình đ nh  ượ ng S.aureus  l

ụ

ế ạ ươ ng pháp này tham chi u theo TCVN 4830 – 1: 2005

ị ng pháp

ẩ ả ứ ượ

ạ

ươ ớ ươ ng tính v i  ẩ ả ế ứ ặ ẩ ằ

ườ ườ ặ ng đ c ( môi tr c trên môi tr

2.1 Ph m vi áp d ng: ­ Ph  ( ISO 6888­1 : 1999) ­ *TCVN 4830­1:2005 : tiêu chu n này quy đ nh ph ị ng Staphylococci có ph n  ng d đ nh l ặ coagulase trên đĩa th ch có m t trong các s n ph m dùng cho  ố ườ i ho c th c ăn chăn nuôi, b ng cách đ m s  khu n  con ng ượ ạ l c thu đ ng Baird­Packer)  ở  350C – 370C.

ng

ỏ ề ặ ủ ả ị ộ ượ ọ ọ ườ ng ch n l c, m t l ề ặ ẩ ở ạ  d ng l ng ho c huy n

ở ề ệ ế ể ở 37oC và ki m tra đi u ki n hi u khí

ộ m t ml

ng Staphylococcus aureus trong  ể nh ng

ươ ẳ ị 2.2 Nguyên t c:ắ ấ ­ C y lên b  m t c a môi tr ẫ m u  qui đ nh (s n ph m  phù). Ủ  các đĩa  ­  ặ 24h ho c 48h. ố ượ ­ Tính s  l ẫ ừ ữ khu n l c đi n hình và  ho c ặ m t gram  ộ ẩ ạ m u t ở ộ ể  đ  pha loãng khác nhau  trên các đĩa  không đi n hình  ế ằ . ng tính và kh ng đ nh b ng k t qu  th ả ử coagulase d

Môi tr

ngườ

Công d ngụ

ị

ị

ẳ

Dung d ch đ ng tr

ể ng đ  pha

Dung d ch Saline Peptone Water   (SPW)

ươ loãng m uẫ

ườ

ọ ọ ể

ấ

Môi tr

ng ch n l c đ  nuôi c y

ườ

Môi tr

ng Baird – Parker

S.aureus

ườ

Môi tr

ng Trypticase Soy Agar

ả

ả

(TSA)

ụ ồ B o qu n và ph c h i vsv trong quá  trình nuôi c yấ

Brain heart broth (BHI)

ế ươ

ỏ

ể

ẳ

ị

Huy t t

ng th

Dùng đ  kh ng đ nh S.aureus

HCl 10%

ỉ

ườ

Ch nh pH môi tr

ng

NaOH 10%

ườ ấ 2.3 Môi tr ng và hóa ch t:

2.5 Qui trình phân tích:

ươ

ế

Ch

ng 3: Thuy t minh qui trình

ướ ẩ ử c 1: chu n b  m u th

ề ị ẫ B ầ và huy n phù ban đ u

ẫ ắ ị

90ml dung d ch pha  loãng SPW

ấ L y 10g ( m u r n)  ẫ ặ ho c hút 10ml ( m u  l ng)ỏ

ự

ặ ( ho c túi nh a  vô trùng )

ặ ắ ề ậ ẫ

ẫ ắ ấ ẫ Cho vào máy d p m u (m u r n) ho c l c đ u (m u  l ng)ỏ ẫ ồ Đ ng nh t m u

ướ ẫ B c 2: Pha loãng m u

DD 10 ­2

Hút 1ml dd 10 ­1

ế ầ

ặ ạ

i thao tác trên đ  có đ

c dung d ch pha loãng 10 ­3,

ượ ạ ượ ộ

ế

ợ

ể N u c n, l p l 10 ­ 4, 10 ­5,… cho đ n khi đ t đ

ị c đ  pha loãng thích h p.

9ml SPW

ướ ườ B ậ c 3: Phân l p trên môi tr ọ ọ ng ch n l c

Hút 0.1ml dd m uẫ

BPA

ướ ố B ẩ ạ ế c 4: quan sát, đ m s  khu n l c

Sau 24h

ể Đánh d u ấ ẩ ạ khu n l c  đi n hình

ế Sau 24h ti p theo

ẩ ạ ng

ể ươ Khu n l c S.aureus d ẩ ạ ấ tính,đánh d u khu n l c  không đi n hình

ị ẳ ụ ồ B

ẩ ạ ẩ ạ

ừ

ể  BPA sang các  ng  ườ ố ứ ng  ng ch a 5ml môi tr ng

ướ c 5+6: Ph c h i và kh ng đ nh ấ C y 5 khu n l c đi n hình và 5 khu n l c  ể không đi n hình t ươ ứ ệ nghi m t BHI

Ủ 37 ± 1oC trong 24 ± 3h

ị ấ ệ ố

ướ c 10mm × 75mm đã ch a 0,3 ml huy t  ỏ ứ ẫ ủ ướ ặ ả ế ng d n c a nhà s n ng th  ( ho c theo h

Hút 0,1 ml d ch nuôi c y BHI vào  ng nghi m có  kích th ươ t xu t)ấ

ự ộ ụ ủ ế ươ c a huy t t ng sau 4, 6, 8,

ể Ki m tra s  đ ng t 24h

ẩ ố ị

ự  kh ng đ nh d a trên s  khu n  ư ặ ẳ ỷ ệ ị Xác đ nh t  l ư ạ ặ l c đ c tr ng và không đ c tr ng.

ả Báo cáo k t quế

- Âm tính: không có kh i đông, h n h p dung d ch v n

ẫ ợ ỗ ố ị

ấ

- D ng tính:

ồ ươ ế ươ ấ ư ố đ ng nh t nh   ng không c y. ụ ố ộ  có kh i đ ng t huy t t ế ng chi m ¾.

ươ Âm tính D ng tính

ướ ế ả B c 7: báo cáo k t qu

Ví dụ

ẩ ạ

ố

S  khu n l c

ệ

ử

N ng ồ ộ

ố ả S  ph n  ng ứ

Nt

Na

Ht

Ha

đ  pha

th  nghi m  ả ứ ph n  ng

coagulase (+)

loãng

coagulase

30

5

5

5/5

10­2

47

5

2

2/5

5

5

5

5/5

10­3

8

5

1

1/5

ả K t quế

ả ơ

ắ

ạ C m  n cô và các b n đã chú ý l ng nghe