ƯƠ
Ể Ư Ệ
Ự
SO SÁNH Đ C ĐI M & PH NG PHÁP Ặ XÂY D NG TH VI N GENOMIC DNA, TH VI N cDNA.
Ư Ệ
Nhóm 3:
Huỳnh Minh Trí Ph m Th S ng ị ươ ạ
Ph m Th Lan Bùi Th Kim Ly ạ ị ị
Ộ
:: ỘN I DUNH CHÍNH N I DUNH CHÍNH
NG PHÁP XÂY D NG NG PHÁP XÂY D NG
Ự Ự
TH VI N GENOMIC DNA Ư Ệ TH VI N GENOMIC DNA Ư Ệ TH VI N cDNA Ư Ệ TH VI N cDNA Ư Ệ PH ƯƠ PH ƯƠ SO SÁNH SO SÁNH
Th vi n genomic DNA
:
ư ệ
ộ
ợ ấ ả
ậ
ộ
Th vi n b gene c a m t sv là t p h p t ủ ộ
ắ
bào ch đ
c nuôi
t c các trình c g n vào vector, sau đó ủ ượ ế
ượ bào ch . Các t ủ ng t o dòng.
ư ệ DNA c u thành b gene đ t ấ ự c đ a vào t đ ế ư ượ c y trên môi tr ườ ấ
ạ
Th vi n cDNA
:
ư ệ
Th vi n cDNA là t p h p t
ậ
ả
t c các b n sao t ề
mRNA i ạ
ừ ấ ị
ệ
ợ ấ ả ư ệ c a m t t bào, trong m t đi u ki n sinh lí nh t đ nh, t ộ ủ ộ ế m t th i đi m nh t đ nh. ể ờ ộ
ấ ị
TUY N CH N DÒNG M C TIÊU
:
Ọ
Ụ
Ể
Đ có th phân l p dòng t
h p ch a
ậ
ể
ổ ợ
ủ
bào ch tái t ế ư ệ
ứ ư ệ
ộ ng pháp sàng
i ta ph i s d ng các ph
ộ ả ử ụ
ươ
ườ
ể gene m c tiêu trong m t th vi n DNA hay m t th vi n ụ cDNA, ng l c.ọ
ng pháp sàng l c đ
c xây
ườ
ọ
ượ
d ng d a trên vi c s d ng m u dò DNA.
Thông th ự
ng các ph ệ
ươ ử ụ
ự ẫ
ộ
ẫ ạ
M u dò DNA (probe) là m t đo n oliogonucleotide đ ặ
ầ
ổ
ộ
ớ
ổ
c ượ đánh d u và b sung ho c b sung m t ph n v i gene ấ m c tiêu.
ụ
TUY N CH N DÒNG M C TIÊU
:
Ọ
Ụ
Ể
bào ch là vi khu n:
ể
ủ
ế
ẩ
c bi u hi n trong t ệ ị
ạ
Gene đ ượ + Lai mi n d ch (Western blot) ễ + Ho t tính enzyme + B tr đ t bi n (gene ngo i lai đ ng d ng v i gene c a ạ
ủ
ế
ạ
ồ
ớ
t
ế
ổ ợ ộ bào ch ) ủ ạ
ệ
ể
bào ch : ủ
ế
ẩ ạ
Gene ngo i lai không bi u hi n trong t Lai insitu: + Lai khu n l c (colony hybridization): vector là plasmid + Lai plaque (plaque colonization): vector là phage
SO SÁNH: N i dung ộ
ạ
ư ệ
T o th vi n cDNA ư ệ
ạ
T o th vi n genomic DNA
ữ ề ế bào ch đ ủ ể
ứ
M c đích
ụ
-Nh m l u tr thông tin di truy n trong các t ư ph c v các ho t đ ng nghiên c u. ạ ộ ụ - Đ u đ a vào t ế ư
bào ch đ t o dòng. ủ ể ạ ằ ụ ề
Phage I, YAC, Cosmid : gt10, gt11, ƛ ƛ ƛ
th
ng s ử
11/18/23/ZAP… Phage ƛ
Vector ườ d ngụ
bào ng thành c a 1 ủ
ế ng đ c l p cho
Đ i t
ng
ố ượ
c l p cho
- mRNA tr ưở lo i mô nh t đ nh ấ ị ạ - Th ng đ ượ ậ ườ Eukaryode. ứ ệ
- DNA t - Th ượ ậ ườ Prokaryode (vì genome, bi u ể hi n gen Eukaryode ph c t p, ch a làm h t) ạ ư ế
SO SÁNH:
N i dung
ộ
ạ
ư ệ
T o th vi n cDNA ư ệ
ạ
T o th vi n genomic DNA
ộ ơ ể
ộ
ề ặ
ư ệ ư
M t th vi n genomic DNA đ i di n cho 1 loài. ư ệ ệ ạ
Bi u hi n
ể
ệ
ch c chuyên hóa ể ệ
ạ ổ ề
ờ
M t c th có nhi u th vi n cDNA khác nhau đ c tr ng cho t ng lo i t ứ ừ trong đi u ki n sinh lí, th i đi m nh t đ nh. ấ ị
t DNA ướ ọ ọ c c a ủ
ớ ắ ắ
Các giai đo n chính ạ
ủ ổ
ạ
ỉ
- Tách chi ế - C t DNA - G n DNA vào vector - Đóng gói các dòng tái t h pợ - Xâm nhi m vào TB v t ch ễ - T o dòng
ậ ủ
- Ch n l c kích th cDNA - G n các cDNA v i các ắ nhánh c a bacteriophage - Phân tích các đo n chèn cDNA - T o th vi n cDNA hoàn ch nh ạ - Khu ch đ i th vi n cDNA
ư ệ ạ
ư ệ
ế
ạ
SO SÁNH: N i dung ộ
ạ
ư ệ
T o th vi n cDNA ư ệ
ạ
T o th vi n genomic DNA
ỉ ự ỉ ị
Ph
ng
ng s d ng: lai plaque ử ụ
ng s d ng: lai khu n ử ụ ẩ - D a vào các gen ch th ự - Th ườ -
ươ pháp sàng l cọ
- D a vào các gen ch th ị trên vector. - Th ườ l cạ
ơ
ụ ứ ủ
Ư
u đi m ể
ượ c b n ả
- D thao tác h n đ i v i ố ớ ễ RNA - Có th xác đ nh đ đ gi ị ể i h n gen c t o ra t ồ ớ ạ ừ
ạ
ng
ả
- Các dòng cDNA ch a trình t mã hóa liên t c c a 1 ự gene - TV cDNA đ 1 ượ ạ lo i TB mô có nhi u cDNA ề mã hóa cho các Pr t ươ ng ứ làm gi m nh vi c xác ẹ ệ đ nh dòng mong mu n t TV ố ừ ị gen.
SO SÁNH: N i dung ộ
ạ
ư ệ
T o th vi n cDNA ư ệ
ạ
T o th vi n genomic DNA
ạ
c ượ
T o ra các dòng mang các đo n chèn DNA khác nhau nh ng g i ch ng lên nhau ồ ạ ư ố - Quy trình nghiêm ng t: ặ mRNA d b phân h y ủ ễ ị c ph c t p. - Nhi u b ứ ạ ướ ề
Nh đi mể
ả ệ ứ
ặ i mã thông tin DT trong t là c u trúc ấ ệ
ng d ng Ứ
ụ
ề ề ể ệ
ng tác gene. Nghiên c u s bi u hi n c a ủ ự ể m t gene xác đ nh cùng các ộ ị v n đ đi u hòa bi u hi n ấ t ươ
- Gi genome, đ c bi intron & exon trong 1 gene xác đ nh. ị - B o t n gene. ả ồ
Tài li u tham kh o Tài li u tham kh o
ả : : ả
ệ ệ
ươ
Ngu n ồ thuviensinhhoc.com ng 207, k thu t t o Tìm: ch ậ ạ ỹ th vi n genomic DNA và th ư ư ệ vi n cDNA. ệ ễ
Nguy n Hoàng L c ệ
