Đồ án: Xây dựng quy trình kỹ thuật để định lượng Tobramycin bằng phương pháp HPLC

-----<br /> <br /> -----<br /> <br /> ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP<br /> <br /> Đề tài: “Xây dựng quy trình kỹ thuật để<br /> định lượng tobramycin bằng<br /> phương pháp HPLC.”<br /> <br /> -3-<br /> <br /> MỤC LỤC<br /> PHẦN 1: TỔNG QUAN ...........................................................................- 3 1.1. TỔNG QUAN VỀ TOBRAMYCIN .................................................- 7 1.1.1. Công thức cấu tạo ...........................................................................- 7 1.1.2. Tính chất lý hóa ..............................................................................- 7 1.1.3. Nguồn gốc........................................................................................- 7 1.1.4. Dược động học ................................................................................- 7 1.1.5. Tác dụng và cơ chế tác dụng ..........................................................- 8 1.1.6. Chỉ định...........................................................................................- 8 1.1.7. Chống chỉ định ................................................................................- 9 1.1.8. Dạng bào chế và liều lượng ............................................................- 9 1.2. MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG TOBRAMYCIN ........- 9 1.2.1. Định lượng tobramycin bằng phương pháp vi sinh ......................- 9 1.2.1.1. Phương pháp 1 [15] .......................................................................- 9 1.2.1.2. Phương pháp 2 [3] .......................................................................- 10 1.2.1.3. Phương pháp 3:[14], [20] ............................................................- 10 1.2.2. Định lượng tobramycin bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ<br /> UV-VIS....................................................................................................- 11 1.2.2.1. Phương pháp 1: [4]......................................................................- 11 1.2.2.2. Phương pháp 2: [19] ....................................................................- 11 1.2.3 Định lượng tobramycin bằng phương pháp HPLC .....................- 12 1.2.2.1 Phương pháp 1 [14] ......................................................................- 12 1.2.2.2 Phương pháp 2 [20], [23] ............................................................- 12 1.2.2.3 Phương pháp 3 [15] ......................................................................- 13 1.2.2.4 Phương pháp 4 [16] .....................................................................- 13 1.2.2.5 Phương pháp 5 [15] ......................................................................- 14 1.2.2.6. Phương pháp 6 [5] .......................................................................- 14 1.2.2.7. Phương pháp 7 [9] .......................................................................- 15 1.3. TỔNG QUAN VỀ PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG HIỆU NĂNG<br /> CAO (HPLC) ..........................................................................................- 16 1.3.1. Nguyên tắc.....................................................................................- 16 1.3.2. Cơ sở lý thuyết ..............................................................................- 17 1.3.3. Nguyên tắc cấu tạo hệ thống HPLC ............................................- 17 1.3.3.1. Hệ thống bơm ..............................................................................- 17 1.3.3.2. Bình chứa dung môi và hệ thống xử lý dung môi .........................- 17 1.3.3.3. Hệ tiêm mẫu ................................................................................- 17 1.3.3.4. Cột sắc ký lỏng HPLC .................................................................- 18 1.3.3.5. Detector trong HPLC ..................................................................- 18 1.3.3.6. Thiết bị hiển thị kết quả ...............................................................- 18 -<br /> <br /> -4-<br /> <br /> 1.3.4. Các thông số đặc trưng của quá trình sắc ký ..............................- 19 1.3.5. Cơ sở lý thuyết của việc lựa chọn điều kiện sắc ký .....................- 21 1.3.5.1. Lựa chọn cột (pha tĩnh) [12], [18]...............................................- 21 1.3.5.2. Lựa chọn pha động cho HPLC [12], [18]....................................- 22 1.3.5.3. Chọn đệm pH ...............................................................................- 23 1.3.5.4. Tốc độ dòng ................................................................................- 23 1.3.6. Cách đánh giá pic .........................................................................- 23 1.3.7. Ứng dụng của HPLC ....................................................................- 24 1.3.7.1. Định tính và thử độ tinh khiết: .....................................................- 24 1.3.7.2. Sắc ký điều chế: ..........................................................................- 24 1.3.7.1. Định lượng: ................................................................................- 24 PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ ..........................................- 26 2.1. NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM ...- 26 2.1.1. Nguyên vật liệu : ...........................................................................- 26 2.1.1.1. Nguyên liệu và hoá chất: .............................................................- 26 2.1.1.2. Dụng cụ: ......................................................................................- 26 2.1.2. Nội dung và phương pháp nghiên cứu ........................................- 26 2.1.2.1. Phương pháp nghiên cứu .............................................................- 26 2.1.2.2. Nội dung nghiên cứu ...................................................................- 27 2.2. THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ....................................................- 28 2.2.1. Xây dựng quy trình kỹ thuật để định lượng tobramycin bằng<br /> phương pháp HPLC ...............................................................................- 28 2.2.1.1. Nguyên tắc lựa chọn điều kiện sắc ký .......................................- 28 2.2.1.2. Khảo sát lựa chọn điều kiện sắc kí: ..........................................- 28 a. Khảo sát chọn bước sóng thích hợp ......................................................- 28 Hình 1: Phổ hấp thụ của dung dịch tobramycin 0,02% .............................- 29 b. Lựa chọn cột:........................................................................................- 29 c. Lựa chọn đệm: ......................................................................................- 29 d. Lựa chọn pha động: ..............................................................................- 30 e. Lựa chọn tốc độ dòng ...........................................................................- 30 đ. Điều kiện sắc ký lựa chọn.....................................................................- 31 2.2.2. Qui trình định lượng ....................................................................- 31 2.2.2.1. Khảo sát tính thích hợp của hệ thống ...........................................- 32 2.2.2.2. Xây dựng phương pháp định lượng .............................................- 32 2.2.2.3. Điều kiện sắc ký ..........................................................................- 33 2.2.2.4. Tính kết quả.................................................................................- 33 2.2.3. Định lượng tobramycin nguyên liệu bằng phương pháp mới xây<br /> dựng ........................................................................................................- 34 2.2.4. Đánh giá phương pháp định lượng ..............................................- 35 2.2.4.1. Tính tuyến tính ..........................................................................- 35 -<br /> <br /> -5-<br /> <br /> 2.2.4.2. Tính chính xác ...........................................................................- 37 2.2.4.3. Tính đúng ...................................................................................- 37 Bảng 6: Kết quả đánh giá tính đúng của phương pháp.............................- 38 2.2.4.4. Tính đặc hiệu .............................................................................- 39 2.3. BÀN LUẬN VÀ KẾT QUẢ.............................................................- 40 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT ....................................................................- 43 3.1 KẾT LUẬN .......................................................................................- 43 3.2 ĐỀ XUẤT ..........................................................................................- 43 -<br /> <br /> -6-<br /> <br /> PHẦN 1: TỔNG QUAN<br /> 1.1. TỔNG QUAN VỀ TOBRAMYCIN<br /> 1.1.1. Công thức cấu tạo<br /> <br /> C18H37N5O9<br /> <br /> PTL: 467.5<br /> <br /> Tên khoa học: 4-O-(3-Amino-deoxy-α-D-glucopyranosyl)-2-deoxy-6-O-(2,6-<br /> <br /> diamino-2,3,6-trideoxy-α-D-ribo-hexopyranosyl)-L-streptamine [21].<br /> 1.1.2. Tính chất lý hóa<br /> Bột màu trắng hoặc trắng ngà. Dễ tan trong nước, rất khó tan trong<br /> ethanol, thực tế không tan trong cloroform và ether.<br /> Góc quay cực riêng [α]D20 : +1380 đến +1480[7]<br /> 1.1.3. Nguồn gốc<br /> Chiết xuất từ môi trường nuôi cấy Streptomyces tenebrarius, có thể<br /> bán tổng hợp từ kanamycin B [7].<br /> 1.1.4. Dược động học<br /> Tobramycin hầu như không hấp thu qua đường tiêu hoá nhưng hấp thu<br /> tốt qua đường tiêm bắp, tiêm tĩnh mạch. Thuốc ít liên kết với protein huyết<br /> <br /> -7-<br /> <br />