Đ tài Sinh h c phân t Đ tài Sinh h c phân t
ọ ọ
ề ề
ử ử
ễ ễ ễ ị
Nguy n Th Xuân Th o ả ị Nguy n Th Thúy H ng ằ ị Nguy n Th M Thu n ậ ị ỹ Lê Th Di u Anh ệ Phan Hoàng Y nế Mai Văn Đi uể Tr n Văn Th o ả ầ Võ Hi pệ
Đ NH TÍNH, Đ NH L Đ NH TÍNH, Đ NH L
NG NG
Ị Ị
ƯỢ ƯỢ
Ị Ị DNADNA
ủ
ượ
ượ
ự
ệ
ể
ị ng đ ộ
ị ặ
Đ nh l ng c a các axit nucleic là th c th c hi n đ xác đ nh ườ n ng đ trung bình c a DNA ho c ồ RNA có m t trong h n h p. ỗ
ủ ợ
ặ
ng d ng c a ph Ứ
ị ụ ị
ươ ng DNA đ ượ ự ệ
ng pháp ủ c đ nh tính, đ nh l ượ dùng nhi u nh t trong lĩnh v c y ề ấ h c nh đ ch n đoán các b nh ẩ ư ể h c v di truy n ề ọ ọ ề
ƯƠPH ƯƠ PH
NG PHÁP NG PHÁP ĐO QUANG PHỔ ĐO QUANG PHỔ
M c đích ụ
Nguyên t c ắ ho t đ ng ạ ộ
nh h Các y u tế ố ng ả ưở
ụ
ụM c đích M c đích
Xác đ nh hàm l ượ
ng và ki m tra ể DNA, ARN t c a phân t ử
ị đ tinh khi ộ có trong dung d ch. ế ủ ị
Nguyên t cắ Nguyên t cắ
ạ
ươ ự ấ b ạ ở ướ
ủ ộ ấ
Ph ng pháp đo quang ph d a ổ ự vào s h p thu m nh ánh sáng t ử c sóng 260nm c a các ngo i base Purine và Pyrimidine, đ h p th ụ v i n ng đ DNA. này t l ỷ ệ ớ ồ ộ
ấ
D a vào tính ch t này i ta có ị
ượ
ng ng ượ ươ
260nm
b ụ ở ướ
ự mà ng ườ c hàm l th xác đ nh đ ể các nucleic acid b ng ph ằ pháp đo quang ph h p ổ ấ c sóng 260nm (OD th – Optical Density260nm).
c sóng 260nm ký
b ở ướ
M t đ n v OD ộ ơ ị 260nm. hi u là OD ệ
ộ
ị
OD260nm = 50m g/ml cho m t dung d ch DNA m ch kép ạ
ị
OD260nm = 40m g/ml cho m t dung d ch ộ DNA m ch đ n ho c RNA ặ ơ
ạ
ộ ấ
ủ
ụ
Đ h p th ánh sáng c a các base
ị ị
ứ ứ
ng DNA trong dung d ch ng DNA trong dung d ch
ạ ng ADN (
Công th c xác đ nh hàm Công th c xác đ nh hàm l ị ượ l ị ượ DNA m ch đôi Hàm l ượ
µg/ml)= 50 x OD260nm x n
Trong đó :
ộ ấ
ụ ủ
ị
DNA
OD260nm : đ h p th c a dung d ch ở 50: h s chuy n đ i c a dung d ch có
260 nm ệ ố
ổ ủ
ị
ợ
ộ
n: h s pha loãng
ể n ng đ DNA s i đôi ồ ệ ố
ạ
ơ
DNA m ch đ n hay ARN
Hàm l
ng DNA (
ượ
µg/ml)= 40 x OD260nm x n
Trong đó :
40: h s chuy n đ i c a dung d ch
ổ ủ
ị
ệ ố có n ng đ DNA s i đ n. ộ
ể ợ ơ
ồ
ưở ưở
nh h Các y u t ế ố ả nh h Các y u t ế ố ả đ h p th quang ph ụ ộ ấ đ h p th quang ph ụ ộ ấ
ng đ n ế ng đ n ế ổ ổ
N ng ồ đ ionộ
t ệ
Nhi độ
PH
T p ạ ch tấ protein
ạ ể ủ
ộ ườ
ứ
ụ ư
Đ đánh giá đ tinh s ch c a dung d ch DNA, i ta còn đo dung ng ị ở b c sóng 280nm là m c d ch ướ ị h p th c c đ i c a protein, nh ng ư ạ ủ ụ ự ấ các protein cũng h p th ánh sáng ở ấ c sóng 260nm nh các nucleic b ướ acid do đó làm sai l ch giá tr th t ệ c a n ng đ acid nucleic. ộ ủ ồ
ị ậ
260nm/OD280nm = 1,8 – 2 t DNA là tinh
ế
ị
- N u t l
OD thì có th xem d ch chi s ch.ạ ế
ạ
OD ế
ế
ặ
OD
260nm/OD280nm < 1,8 thì DNA,ARN có l n t p
ẫ
ạ
260nm/OD280nm > 2 thì ỉ ệ dung d ch chi t RNA là tinh s ch, ị dung d ch DNA b bi n tính ho c ị ị phân h y.ủ - N u t l ỉ ệ ế dung d ch ị ch t.ấ
- N u t l ế ỉ ệ ể
Ưu đi mể : Cho k t qu nhanh, đ ộ ả ế ng đ i cao chính xác t ố ươ
ể : Ch ki m tra đ c ượ ỉ ể ng DNA trong m u tinh c đi m ượ ẫ
Nh ượ hàm l t.ế khi
