
TRƯỜNG
ĐẠI
HỌC
HGUVỄN
TẤT
THÃHH

TRƯỜNG
ĐẠI
HỌC
NGUYỄN
TẤT
THÀNH
KHOAY
Thực
tập
VI
SINH
Y
HỌC
Họ
và
tên:
Mã
số
sinh
viên:
Lớp:
2021
Lưu
hành
nội
bô

Mục
lục
*****
Buổi
1.
-
Nhuộm
Gram
-
Nhuộm
Ziehl
Ncclsen
3
-
Qui
trình
nuôi
cấy
các
loại
bệnh
phẩm
8
Buổi
2.
-
Các
phương
pháp
định
danh
vi
khuẩn
17
-
Kháng
sinh
đồ
25
Buổi
3.
-
Phản
ứng
kháng
nguyên
-
kháng
thể
31
-
Phản
ứng
RPR
41
-
Xét
nghiệm
chẩn
đoán
viêm
gan
B
44
-
Xét
nghiệm
chẩn
đoán
nhiễm
HPV
50
Buôi
4.
-
Xét
nghiệm
chẩn
đoán
HIV/AIDS
53
-
Xét
nghiệm
chẩn
đoán
viêm
gan
c
57
-
Xét
nghiệm
chẩn
đoán
sốt
xuất
huyết
61
-
Xét
nghiệm
chẩn
đoán
COVID-
19
65
Buổi
5.
-
Hình
thể
vi
nấm
gây
bệnh
70
-
Hình
the
trứng,
ấu
trùng
của
giun
sán
thường
gặp
75
-
Hình
thể
ký
sinh
trùng
sốt
rét
ở
người
81
BD
S3
GS
2

NHUỌM
GRAM
VA
IMHUỌM
ZIEHL
NEELSEIN
KỸ
THUẬT
LÀM
TIÊU
BẢN
-
Sử
dụng
bút
sáp
hoặc
bút
chì
ghi
mã
bệnh
phẩm
và
vẽ
1
vòng
ô
van
có
kích
thước
dài
2cm
rộng
lem
như
hình
dưới.
-
Chọn
nơi
lấy
bệnh
phẩm
đúng
(ví
dụ:
chỗ
nhầy
đục,
nhầy
vàng),
đật
lên
giữa
lam
kinh
dàn
trái
theo
vòng
xoáy
từ
trong
ra
ngoài,
dàn
đều
đặn
liên
tục
tạo
độ
mịn
dày
vừa
phải
hình
ô
van
kích
thước
dài
2cm
rộng
lem.
-
Tiêu
bàn
đạt
tiêu
chuẩn:
+
Dàn
đều
đặn,
liên
tục,
mịn.
+
Kích
thước
lem
X
2cm.
+
Vet
dàn
cân
đối
ở
giữa
lam.
+
Độ
dày
vừa
phải
(sau
khi
khô,
đặt
lên
1
tờ
giấy
có
chữ
ta
sẽ
thấy
chữ
mờ).
-
Làm
khô
tiêu
bãn
+
Đẻ
liêu
bản
khô
tự
nhiên,
hoàn
toàn
ờ
nhiệt
độ
phòng
(15-30
phút).
+
Không
làm
khô
tiêu
bàn
bằng
đèn
cồn.
-
Cố
đinh
tiêu
bàn
bằng
cách
hơ
nóng
tiêu
bàn
qua
ngọn
lừa
đèn
côn
3
lân,
môi
lân
3
giây.
-
Không
cố
định
khi
tiêu
bàn
chưa
khô
hoàn
toàn.
KỸ
THUẬT
NHUỘM
GRAM
1,
Mục
đích
-
Nguyên
lý
-
Ỷ
nghĩa-,
là
kỹ
thuật
cơ
bản
và
quan
trọng
nhất
trong
phân
tích
vi
khuẩn
ở
giai
đoạn
đầu.
-
Mục
đích-,
xác
định
sơ
bộ
đặc
tính
của
các
chủng
vi
khuân
vê
hình
dạng,
màu
Gram
và
cách
sắp
xếp.
-
Nguyên
lý:
do
sự
khác
biệt
vách
tế
bào
vi
khuẩn
Grain
(+)
cell-wall
Gram
(-)
cell-wall
-
Vì
khuẩn
Gram
ihnrng:
có
lớp
peptidoglycan
dày,
nhiều
acid
teichoic,
vì
vậy
không
bị
ảnh
hưởng
bời
sự
tẩy
màu
bàng
cồn
nên
vi
khuẩn
vẫn
giữ
màu
tím
của
thuốc
nhuộm
crytal
violet.
3

+
ĩ'i
khuẩn
Gram
âm:
cỏ
một
lớp
peptidoglycan
gắn
với
lớp
phospholipid
kép,
xen
kẽ
các
protein
ở
mậng
ngoài,
dê
bị
phá
hủy
bời
côn
khi
tây
màu,
vì
vậy
phức
hợp
tinh
thể
tím
gentian
-
iod
không
bên,
bị
tây
màu
và
băt
màu
được
thuôc
nhuộm
ở
giai
đoạn
sau
(màu
hông).
2.
Trang
thiết
bị
-
vật
tư
-
Kinh
hiển
vi.
-
Máy
sấy
lam.
Bút
sáp,
lam
kính,
khuyên
cây,
Bộ
thuổc
nhuộm
Gram:
Crytal
violet,
Iodine,
cồn
95%,
Safranin.
3.
Cách
nhuộm
-
Bước
1:
Ghi
chủng
vi
khuân
kiêm
tra
chât
lượng
và/hoặc
thông
tin
của
mẫu
bệnh
phâm
lên
lam
đã
có
vòng
tròn
giới
hạn
bằng
bút
sáp.
-
Bước
2:
Dùng
khuyên
cấy
hoặc
pipette
Pasteur
dàn
đều
mẫu
bệnh
phẩm
hoặc
dịch
huyền
phù
vi
khuẩn
lên
vòng
tròn
đã
vẽ
trên
mặt
lam,
cổ
định
bàng
cách
dùng
cồn
tuyệt
đối,
hoặc
đưa
nhẹ
nhàng
lam
kính
cắt
ngang
ngọn
lửa
đèn
cồn
2-3
giây
tránh
làm
quá
nóng,
cố
định
tiêu
bản
quá
nóng
làm
biên
tính
màng
tê
bào
vi
khuân
ành
hưởng
đên
khả
năng
băt
màu
Gram.
-
Bước
3:
Nhỏ
vài
giọt
crystal
violet
cho
phủ
đều
trẽn
bề
mặt
phết
nhuộm
và
để
yên
trong
vòng
1
phút.
-
Bước
4:
Đổ
bò
crystal
violet
và
rửa
lam
sạch
bằng
nước
máy
từ
từ
và
nhẹ
nhàng.
-
Bước
5:
Nhò
vài
giọt
lugol
cho
phủ
đều
trên
bề
mặt
phết
nhuộm,
đê
yên
trong
vòng
1
phút.
-
Bước
6:
Rửa
dung
dịch
lugol
bằng
nước
máy
từ
từ
và
nhẹ
nhàng.
-
Bước
7:
Tẩy
màu
bằng
alcohol
hoặc
alcohol
aceton,
cầm
phần
lam
kính
có
ghi
thông
tin
và
nhỏ
dung
dịch
tây
từ
từ
lên
phêt
nhuộm
cho
đên
khi
giọt
không
còn
xuât
hiện
màu
tím
(thông
thường
từ
10
-
15
giây).
-
Bước
8:
Rửa
nhanh
bàng
nước
nhẹ
nhànẹ.
-
Bước
9:
Nhò
vài
giọt
safranin
cho
phù
đều
trên
bề
mặt
phết
nhuộm,
để
yên
trong
1
phút.
-
Bước
10:
Rửa
nhanh
bàng
nước,
nhẹ
nhàng
để
rửa
sạch
thuốc
nhuộm
-
Bước
1
1:
Đổ
khô
tự
nhiên
hoặc
để
khô
lam
trên
máy,
hoặc
thấm
khô
nhẹ
nhàng.
4.
Diễn
giài
kết
quà
Quan
sát
hình
thể
vi
khuẩn
ở
vật
kinh
dầu
(xlOO).
Cầu
khuẩn
Gram
dương
xếp
chùm
Trực
khuẩn
Gram
âm
đứng
riêng
lẻ
-
Hình
thể:
cầu
khuẩn,
trực
khuẩn,
xoẳn
khuẩn,
cầu
trực
khuẩn,...
-
Tính
chất
bắt
màu:
Gram
âm
(bắt
màu
hồng
đỏ),
Gram
dương
(bắt
màu
tím).
Cách
sắp
xếp:
đứng
đơn
lẻ,
xếp
thành
từng
cặp,
xếp
thành
chuỗi,
xêp
thành
từng
đám,...
5.
Lưu
ý
-
Vi
khuẩn
Gram
dương
trông
giống
vi
khuẩn
Gram
âm
khi:
+
Lứa
cấy
quá
già
>24h.
+
Dung
dịch
lugol
bị
hỏng.
4

