PHÂN TÍCH ĐNH TÍNH VÀ
ĐỊNH NG NUCLEIC ACID
ThS. Nguyễn Thị Mỹ Nương
Email: ntmnuong@hcmus.edu.vn
Nội dung
1. Điện di:
-Mục tiêu:
+ Định tính: sự hiện diện, cấu hình phân tử, kích thước
+ Định lượng: hàm lượng tương đối so với thang hàm lượng
+ Chuẩn bị/một công đoạn cho phương pháp khác: thu hồi DNA, phân tách DNA
-Kiểu điện di: điện di agarose, điện di polyacrylamide, điện di trên điện trường
xung, điện di mao quản
2. Đo quang phổ:
-Mục tiêu:
+ Định lượng tuyệt đối: nồng độ nucleic acid
+ Định tính: độ tinh sạch của mẫu, tính chất nucleic acid
-Kiểu đo quang phổ: UV, huỳnh quang
Điện di
Điện di ngang Điện di đứng
4
ÑIEÄN DI DNA TREÂN GEL AGAROSE
- Ñieän di theo phöông naèm ngang
- Giaù theå laø gel agarose
- Phaùt hieän vôùi maøu nhuoäm ethidium bromide, ...…
phaùt huyønh quang döôùi ñeøn töû ngoaïi
- Khaû naêng phaân giaûi trung bình, phuï thuoäc vaøo
nhieàu yeáu toá, ñaëc bieät laø noàng ñoä agarose (0,5
5%)
5
ÑIEÄN DI TRONG TRÖÔØNG XUNG (PULSED-FIELD
ELECTROPHORESIS)
-Tương tự điện di
trên gel agarose
-Điện trường theo
nhiều phương
-Dùng phân tách
DNA kích thước lớn:
50.000 250.000 bp