Tổng hợp và khảo sát hoạt tính kháng khuẩn của một số base schiff và dẫn chất amin tương ứng

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 2 * 2014<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> TỔNG HỢP VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN<br /> CỦA MỘT SỐ BASE SCHIFF VÀ DẪN CHẤT AMIN TƯƠNG ỨNG<br /> Huỳnh Thị Ngọc Phương*, Trần Ngọc Châu*, Lê Nguyễn Hồng Huyên*, Nguyễn Thị Thu Thủy*<br /> TÓM TẮT<br /> Giới thiệu: Base Schiff là nhóm hợp chất có tác dụng kháng khuẩn tốt với cơ chế ức chế enzym FabH, một<br /> enzym cần thiết cho quá trình tổng hợp acid béo của vi khuẩn.<br /> Mục tiêu: Tổng hợp và thử hoạt tính kháng khuẩn của các base Schiff (được tổng hợp từ 5bromosalicyaldehyd) và các dẫn chất amin tương ứng. Khả năng gắn kết ở mức độ phân tử của các chất tổng hợp<br /> với enzym FabH của Staphylocoocus aureus được minh họa bằng nghiên cứu ‘docking’<br /> Phương pháp: Các base Schiff được tổng hợp bằng phản ứng ngưng tụ giữa 5-bromosalicyaldehyd và các<br /> amin bậc 1. Sau đó tiến hành khử hóa bằng NaBH4 để thu được các dẫn chất amin. Hoạt tính kháng khuẩn được<br /> khảo sát bằng phương pháp pha loãng trên bản thạch. Nghiên cứu mô hình phân tử khả năng gắn kết của các chất<br /> trên FabH được thực hiện bằng phần mềm FlexX3.<br /> Kết quả: 7 base Schiff và 7 dẫn chất amin tương ứng được tổng hợp và thử hoạt tính kháng khuẩn trên các<br /> chủng S. aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa. Các chất tổng hợp cho hoạt tính tốt<br /> hơn trên vi khuẩn gram (+) so với vi khuẩn gram (-). Các base Schiff có hoạt tính yếu hơn các amin. Chất có hoạt<br /> tính kháng khuẩn tốt nhất có một nhóm thế Fluor trên cấu trúc. Nghiên cứu mô hình phân tử khả năng gắn kết<br /> trên FabH của 2 dẫn chất amin có hoạt tính kháng khuẩn tốt nhất cho thấy những amin này hình thành tương tác<br /> kỵ nước với một số acid amin trong vùng gắn kết của FabH.<br /> Kết luận: Dẫn chất amin có hoạt tính kháng khuẩn tốt hơn các base Schiff. Sự hiện diện của nhóm thế Fluor<br /> giúp tăng hoạt tính kháng khuẩn của các chất. Cấu trúc của các amin với vùng không gian kỵ nước đóng vai trò<br /> quan trọng trong việc gắn kết với enzym FabH.<br /> Từ khóa: base Schiff, dẫn chất amin, kháng khuẩn, docking, FabH<br /> <br /> ABSTRACT<br /> SYNTHESIS AND ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF SOME SCHIFF BASES AND<br /> CORRESPONDING AMINE DERIVATIVES<br /> Huynh Thi Ngoc Phuong, Tran Ngoc Chau, Le Nguyen Hong Huyen, Nguyen Thi Thu Thuy<br /> * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 18 - Supplement of No 2 - 2014: 347 - 352<br /> Background: Schiff bases have been reported as potential antibacterial agents and inhibitors of FabH which<br /> is the essential enzyme of the fatty acid biosynthesis of bacteria.<br /> Objectives: Synthesis and antibacterial activity study of two structure groups: Schiff bases synthesized from<br /> 5-bromosalicylaldehyd and corresponding amine derivatives. The binding affinity in molecular level of<br /> synthesized compounds and Staphylococcus aureus-FabH is investigated by using docking study.<br /> Methods: Schiff bases were synthesized by condensation between 5-bromosalicylaldehyde and the primary<br /> amines. Amine derivatives were synthesized from Schiff bases by using reducing agent NaBH4. Agar dilution<br /> method was used to evaluate antibacterial activities of the synthesized compounds. Docking ligands into the active<br /> site of FabH protein of Staphylococcus aureus was carried out by FlexX3.<br /> * Bộ môn Hóa Dược - Đại Học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh<br /> Tác giả liên lạc: TS. Hùynh Thị Ngọc Phương ĐT: 0908772118 Email: ngocphuonghuynhthi@gmail.com<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Học<br /> <br /> 347<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 2 * 2014<br /> <br /> Results: 7 Schiff bases and 7 corresponding amines were synthesized and tested antibacterial activity against<br /> S. aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa. The synthesized compounds exhibit more<br /> potent antibacterial activities against two Gram positive bacteria than two Gram negative ones. Schiff bases<br /> showed weaker antibacterial activities than the corresponding amine derivatives. The most potent antibacterial<br /> compounds contain Fluor atoms in their structures. Docking simulation the two most potent amines into<br /> Staphylococcus aureus-FabH showed that these amines may form the hydrophobic interaction with many amino<br /> acids of the active site of FabH.<br /> Conclusions: Amines showed more potent antibacterial activity than Schiff bases. The present of Fluor in<br /> structure could enhance the antibacterial activity obviously. The hydrophobic structures of two those amines are<br /> important for binding conformation with the assumed target S. aureus - FabH.<br /> Keywords: Schiff bases, amine derivatives, antibacterial activity, docking study, FabH<br /> vi khuẩn, chúng tôi đã tiến hành docking các<br /> ĐẶT VẤN ĐỀ<br /> dẫn chất có tác dụng kháng khuẩn tốt nhất trên<br /> Base Schiff là một nhóm hợp chất có tác<br /> protein Staphylococcus aureus-FabH được tải về từ<br /> dụng sinh học rất đa dạng như kháng Plamodium<br /> ngân hàng dữ liệu protein – PDB (13)<br /> falciparum (6), kháng khuẩn (1,2,3) kháng nấm, kháng<br /> PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU<br /> virus (9), kháng ung thư, chống co giật, chống oxy<br /> hóa (10,11), …<br /> Nguyên liệu<br /> Trong tổng hợp hữu cơ, base Schiff là một<br /> là chất trung gian để tổng hợp những nhóm<br /> dẫn chất khác như phức chất base Schiff - kim<br /> loại hay dẫn chất urê với phenylisocyanat đã<br /> được báo cáo là có tác dụng kháng khuẩn<br /> mạnh hơn(4,5).<br /> Gần đây base Schiff từ các halogen<br /> salicylaldehyd như 5-fluorosalicylaldehyd và 5clorosalicylaldehyd đã được tổng hợp và khảo<br /> sát hoạt tính kháng khuẩn (7,8)<br /> <br /> Tất cả nguyên liệu tổng hợp được mua từ<br /> công ty Acros organics, Merck, Aldrich, Fisher<br /> chemical, sử dụng trực tiếp không tinh chế lại.<br /> Xác định nhiệt độ nóng chảy trên máy Stuart<br /> SMP10 với nhiệt kế không hiệu chỉnh. Phổ IR<br /> được đo trên máy FTIR 8101 (SHIMADZU). Phổ<br /> 1H-NMR ghi bằng máy Bruker (500 MHz) ở 25oC<br /> với chuẩn nội là TMS (tetra methyl silan).<br /> <br /> Phương pháp tổng hợp<br /> <br /> Trong đề tài này chúng tôi tập trung nghiên<br /> cứu tổng hợp một số base Schiff từ 5bromosalicylaldehyd, đồng thời khử hóa các<br /> base Schiff này để tạo các amin tương ứng. Các<br /> chất tổng hợp được sẽ được thử nghiệm sinh học<br /> để so sánh sơ bộ hoạt tính kháng khuẩn của hai<br /> nhóm cấu trúc (base Schiff và amin tương ứng).<br /> Các amin được tổng hợp trong đề tài này sẽ<br /> được sử dụng như nguồn nguyên liệu cho việc<br /> tổng hợp tiếp theo các dẫn chất urê được dự kiến<br /> là có tác dụng kháng khuẩn mạnh hơn.<br /> <br /> Các base Schiff được tổng hợp bằng phản<br /> ứng ngưng tụ giữa 5-bromosalicylaldehyd và các<br /> amin thơm bậc một (hình 1): Hòa tan 5bromosalicylaldehyd và amin (tỉ lệ 1:1,2) riêng rẽ<br /> trong một lượng tối thiểu ethanol trước khi phối<br /> hợp. Phối hợp 2 nguyên liệu vào một bình cầu 25<br /> ml, thêm một vài giọt acid acetic băng làm xúc<br /> tác và đun ở 50 oC, theo dõi phản ứng bằng sắc<br /> ký lớp mỏng, dung môi khai triển toluen –<br /> dicloromethan (10:1) đến khi thấy hết aldehyd.<br /> Sản phẩm kết tủa được lọc và tinh chế bằng<br /> phương pháp kết tinh lại trong ethanol.<br /> <br /> Ngoài ra để tìm hiểu sự gắn kết ở mức độ<br /> phân tử của các chất tổng hợp được trên đích tác<br /> động giả định là enzym FabH, một trong những<br /> enzym tối cần thiết cho sự tổng hợp acid béo của<br /> <br /> Các dẫn chất amin được tổng hợp từ base<br /> Schiff bởi phản ứng khử hóa bằng NaBH4 (hình<br /> 1): hòa tan base Schiff đã tổng hợp trong ethanol<br /> thu được dung dịch có màu vàng hoặc cam, làm<br /> <br /> 348<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 2 * 2014<br /> lạnh hỗn hợp trong thau đá, khuấy từ. Cho từ từ<br /> NaBH4 vào với tỉ lệ base Schiff : NaBH4 = 1:2.<br /> Theo dõi phản ứng đến khi dung dịch mất màu.<br /> Sắc ký lớp mỏng, dung môi khai triển toluen dicloromethan (4:1) để xác định phản ứng hoàn<br /> toàn. Cô quay đến hết ethanol. Cho nước cất vào<br /> thấy xuất hiện tủa trắng, lọc thu tủa và rửa với<br /> nước cất nhiều lần thu sản phẩm. Sấy khô sản<br /> phẩm trong tủ sấy, cân, tính hiệu suất.<br /> <br /> Phương pháp khảo sát hoạt tính kháng<br /> khuẩn<br /> Giá trị nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của tất<br /> cả các chất tổng hợp trên các chủng vi khuẩn thử<br /> nghiệm được xác định bằng phương pháp pha<br /> loãng trong môi trường rắn(2)<br /> Vi khuẩn thử nghiệm gồm Staphylococcus<br /> aureus ATCC 5923 và Bacillus subtilis, Escherichia<br /> coli, Pseudomonas aeruginosa do bộ môn Vi-Ký<br /> sinh, khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ<br /> Chí Minh cung cấp.<br /> <br /> Nghiên cứu docking<br /> Sử dụng phần mềm FlexX3(12)tiến hành<br /> docking các chất tổng hợp có hoạt tính kháng<br /> khuẩn cao nhất trên protein FabH ở S. aureus là<br /> 1ZOW được tải về từ ngân hàng dữ liệu protein<br /> (PDB) (13).<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> (KBr, ν cm-1): 1602,7 (υC=N); 1278,7 (δO-H); 628,8 (υCBr).1H-NMR (500 MHz, CDCl3, δ ppm): 13,40 (bs,<br /> 1H, OH); 8,54 (s, 1H, CH=N); 7,49 (d, J=2,5 Hz,<br /> 1H, H3); 7,43 (dd, J=9;2,5 Hz, 1H, H5); 7,26-7,18<br /> (m, 4H, H3’, H5’, H2’, H6’); 6,92 (d, J=9 Hz, 1H, H6);<br /> 2,39 (s, 3H, CH3).<br /> <br /> 4-Bromo-2-(((4’-fluorophenyl)imino)methyl)<br /> phenol (BS2)<br /> Hiệu suất: 38,4%. Điểm chảy: 143-144 oC. IR<br /> (KBr, ν cm-1): 1620,1 (υC=N); 1276,8 (δO-H); 1232,4<br /> (υC-F); 624,9 (υC-Br). 1H-NMR (500 MHz, CDCl3, δ<br /> ppm): 13,11 (s, 1H, OH); 8,51 (s, 1H, CH=N); 7,50<br /> (d, J=2,5 Hz, 1H, H3); 7,45 (dd, J=9;2,5 Hz, 1H,<br /> H5); 7,28-7,24 (m, 2H, H2’, H6’); 7,15-7,10 (m, 2H,<br /> H3’, H5’); 6,92 (d, J=9 Hz, 1H, H6).<br /> 4-Bromo-2-(((4’-bromophenyl)imino)methyl)<br /> phenol (BS3)<br /> Hiệu suất: 46,3%. Điểm chảy: 176-177 oC. IR<br /> (KBr, ν cm-1): 1614,3 (υC=N); 1274,9 (δO-H); 628,8 (υCBr). 1H-NMR (500 MHz, CDCl3, δ ppm): 13,01 (s,<br /> 1H, OH); 8,53 (s, 1H, CH=N); 7,57-7,54 (m, 2H,<br /> H3’, H5’); 7,51 (d, J=2,5 Hz, 1H, H3); 7,46 (dd, J=8,5;<br /> 2,0 Hz, 1H, H5); 7,17-7,15 (m, 2H, H2’, H6’); 6,93 (d,<br /> J=8,5 Hz, 1H, H6).<br /> 4-Bromo-2-(((4’-clorophenyl)imino)methyl)<br /> phenol (BS4)<br /> Hiệu suất: 35,7%. Điểm chảy: 161-162 oC. IR<br /> (KBr, ν cm-1): 1614,3 (υC=N); 1274,9 (δO-H); 628,8 (υC). 1H-NMR (500 MHz, CDCl3, δ ppm): 13,03 (s,<br /> <br /> Br<br /> <br /> 1H, OH); 8,53 (s, 1H, CH=N); 7,51 (d, J=2,5 Hz,<br /> 1H, H3); 7,46 (dd, J=8,5; 2,5 Hz, 1H, H5); 7,42-7,39<br /> (m, 2H, H3’, H5’); 7,23-7,20 (m, 2H, H2’, H6’); 6,93<br /> (d, J= 9Hz, 1H, H6).<br /> Hình 1. Sơ đồ phản ứng tổng hợp base Schiff và<br /> dẫn chất amin tương ứng<br /> <br /> KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN<br /> <br /> 4-Bromo-2-((phenylimino)methyl)phenol (BS5)<br /> Hiệu suất: 39,5%. Điểm chảy: 123-124 oC. IR<br /> (KBr, ν cm-1): 1612,4 (υC=N); 1274,9 (δO-H); 628,8 (υC). 1H-NMR (500 MHz, CDCl3, δ ppm): 13,29 (s,<br /> <br /> Br<br /> <br /> Tổng hợp base Schiff<br /> 4-Bromo-2-((p-tolylimino)methyl)phenol<br /> (BS1)<br /> Hiệu suất: 48,6%. Điểm chảy: 164-165 oC. IR<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Học<br /> <br /> 1H, OH); 8,55 (s, 1H, CH=N); 7,51 (d, J=2,5 Hz,<br /> 1H, H3); 7,46-7,42 (m, 3H, H6’, H5’, H5); 7,33-7,26<br /> (m, 3H, H2’, H3’, H4’); 6,93 (d, J=9Hz, 1H, H6).<br /> <br /> 349<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 2 * 2014<br /> <br /> 4-Bromo-2-(((3’-(trifluoromethyl)phenyl)<br /> imino)methyl)phenol (BS6)<br /> Hiệu suất: 48%. Điểm chảy: 108-109 oC. IR<br /> (KBr, ν cm-1): 1618,2 (υC=N); 1276,8 (δO-H); 1109,0<br /> (υC-F); 628,8 (υC-Br). 1H-NMR (500 MHz, CDCl3,<br /> δ ppm): 12,84 (s, 1H, OH); 8,57 (s, 1H, CH=N);<br /> 7,57-7,56 (m, 2H, H2’, H4’); 7,55 (d, J=2,5 Hz, 1H,<br /> H3); 7,51 (s, 1H, H5’); 7,49 (dd, J=8,8; 2 Hz, 1H,<br /> H5); 7,45-7,43 (m, 1H, H6’); 6,95 (d, J=8,5 Hz,<br /> 1H, H6).<br /> 4-Bromo-2-(((3’-cloro-4’-fluorophenyl)imino)<br /> methyl)phenol (BS7)<br /> Hiệu suất: 83,5%. Điểm chảy: 138-139 oC. IR<br /> (KBr, ν cm-1): 1620,1 (υC=N); 1276,8 (δO-H); 1259,4<br /> (υC-F); 800,4 (υC-Cl); 628,8 (υC-Br). 1H-NMR (500<br /> MHz, CDCl3, δ ppm): 12,78 (s, 1H, OH); 8,50 (s,<br /> 1H, CH=N); 7,52 (d, J=2,5 Hz, 1H, H3); 7,47 (dd,<br /> J=8,8; 2,5 Hz, 1H, H5); 7,35 (dd, J=6,5; 2,5 Hz, 1H,<br /> H6’); 7,21 (t, J=9 Hz, 1H, H5’); 7,18-7,15 (m, 1H,<br /> H2’); 6,93 (d, J=8,5 Hz, 1H, H6).<br /> <br /> Tổng hợp các dẫn chất amin<br /> 4-Bromo-2-((p-tolylimino)methyl)phenol (A1)<br /> Hiệu suất: 85,6%. Điểm chảy: 121-122 oC. IR<br /> (KBr, ν cm-1): 3259,5 (υN-H); 2868,0 (υC-H); 1514,0<br /> (δN-H); 1122,5 (υC-O); 817,8 (υC-C); 628,8 (υC-Br). 1HNMR (500 MHz, CDCl3, δ ppm): 7,29 (dd, J=8,8;<br /> 2,5 Hz, 1H, H5); 7,25 (d, J=2,5Hz, 1H, H3); 7,06 (d,<br /> J=8 Hz, 2H, H3’, H5’); 6,77-6,75 (m, 3H, H2’, H6’,<br /> H6); 4,37 (s, 2H, CH2); 2,28 (s, 3H, CH3).<br /> 4-Bromo-2-(((4’-fluorophenyl)amino) methyl)<br /> phenol (A2)<br /> Hiệu suất: 88,2%. Điểm chảy: 125-127 oC. IR<br /> (KBr, ν cm-1): 3249,8 (υN-H); 2868,0 (υC-H); 1508,2<br /> (δN-H); 1263,3 (δO-H); 1230,5 (υC-F); 1124,4 (υC-O);<br /> 628,8 (υC-Br). 1H-NMR (500 MHz, CDCl3, δ ppm):<br /> 7,31 (dd, J =8,5; 2,5Hz, 1H, H5); 7,26 (s, 1H, H3);<br /> 6,97-6,95 (m, 2H, H3’, H5’); 6,80-6,76 (m, 3H, H2’,<br /> H6’, H6); 4,36 (s, 2H, CH2).<br /> 4-Bromo-2-(((4’-bromophenyl)amino)<br /> methyl)phenol (A3)<br /> Hiệu suất: 51,3%. Điểm chảy: 87-89 oC. IR<br /> (KBr, ν cm-1): 3253,7 (υN-H); 2869,9 (υC-H); 1490,9<br /> <br /> 350<br /> <br /> (δN-H); 1124,4 (υC-O); 628,8 (υC-Br). 1H-NMR (500<br /> MHz, CDCl3, δ ppm): 7,33 (d, J=8,5 Hz, 2H, H3,<br /> H5); 7,31-7,27 (m, 2H, H3’, H5’); 6,76 (d, J=8,5 Hz,<br /> 1H, H6); 6,69 (d, J=8,5 Hz, 2H, H2’, H6’); 4,35 (s,<br /> 2H, CH2).<br /> <br /> 4-Bromo-2-(((4’-clorophenyl)amino)methyl)<br /> phenol (A4)<br /> Hiệu suất: 84%. Điểm chảy: 91-92 oC. IR (KBr,<br /> ν cm-1): 3251,8 (υN-H); 2868,0 (υC-H); 1492,8 (δN-H);<br /> 1263,3 (δO-H); 1126,4 (υC-O); 671,2 (υC-Cl); 628,8 (υCBr). 1H-NMR (500 MHz, CDCl3, δ ppm): 7,31 (dd,<br /> J=8,3; 2,5 Hz, 1H, H5); 7,28-7,26 (m, 1H, H3); 7,217,19 (m, 2H, H3’, H5’); 6,77-6,74 (m, 3H, H2’, H6’,<br /> H6); 4,36 (s, 2H, CH2).<br /> 4-Bromo-2-((phenylamino)methyl)phenol (A5)<br /> Hiệu suất: 43,7%. Điểm chảy: 115-116 oC. IR<br /> (KBr, ν cm-1): 3267,2 (υN-H); 1488,9 (δN-H); 1261,4<br /> (δO-H); 1126,4 (υC-O); 628,8 (υC-Br). 1H-NMR (500<br /> MHz, CDCl3, δ ppm): 7,30 (dd, J= 8,5;2 Hz, 1H,<br /> H5); 7,28-7,27 (m, 1H, H3) ; 7,26-7,24 (m, 2H, H3’,<br /> H5’) ; 6,94 (t, J=7,5 Hz, 1H, H4’); 6,84 (d, J= 8 Hz,<br /> 2H, H2’, H6’); 6,77 (d, J=8,5 Hz, 1H, H6); 4,39 (s,<br /> 2H, CH2).<br /> 4-Bromo-2-(((3’-(trifluoromethyl)phenyl)<br /> amino)methyl)phenol (A6)<br /> Hiệu suất: 69,8%. Điểm chảy: 115-117 oC. IR<br /> (KBr, cm-1): 3251,8 (υN-H); 2866,0 (υC-H); 1263,3 (δOH); 1109,0 (υC-F); 628,8 (υC-Br). 1H-NMR (500 MHz,<br /> CDCl3, δ ppm): 7,36-7,31 (m, 3H, H5’, H4’, H3); 7,15<br /> (d, J=8 Hz, 1H, H6); 7,03 (s, 1H, H2’); 6,95 (dd, J=8;<br /> 2 Hz, 1H, H5); 6,78 (d, J=9Hz, 1H, H6’), 4,40 (s, 2H,<br /> CH2).<br /> 4-Bromo-2-(((3’-cloro-4’-fluorophenyl)<br /> amino)methyl)phenol (A7)<br /> Hiệu suất: 81,7%. Điểm chảy: 131-132 oC.<br /> IR (KBr, ν cm-1): 3253,7 (υN-H); 2866,0 (υC-H);<br /> 1500,5 (δN-H); 1261,4 (δO-H); 1224,7 (υC-F); 1120,6<br /> (υC-O); 759,9 (υC-Cl); 628,8 (υC-Br). 1H-NMR (500<br /> MHz, CDCl3, δ ppm): 7,32 (dd, J=8,5; 2,5 Hz,<br /> 1H, H5); 7,28 (d, J= 2,5 Hz, 1H, H3); 7,02 (t, J=9<br /> Hz, 1H, H5’); 6,85 (dd, J=6; 2,5 Hz, 1H, H6’); 6,77<br /> (d, J=8,5 Hz, 1H, H6); 6,67-6,64 (m, 1H, H2’);<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 2 * 2014<br /> 4,33 (s, 2H, CH2).<br /> <br /> Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn<br /> Kết quả giá trị MIC trên hai chủng vi<br /> khuẩn gram dương (S. aureus và B. subtilis) và<br /> hai chủng gram âm (E. coli và P. aeruginosa)<br /> được trình bày trong bảng 1. Kết quả thử<br /> nghiệm hoạt tính kháng khuẩn sơ bộ trên hai<br /> chủng vi khuẩn gram dương (S. aureus và B.<br /> subtilis) và hai chủng gram âm (E. coli và P.<br /> aeruginosa) cho thấy tất cả base Schiff và amin<br /> tương ứng có hoạt tính kháng khuẩn nghiêng<br /> về hai chủng gram dương.<br /> Bảng 1. Giá trị MIC của các chất thử nghiệm trên vi<br /> khuẩn<br /> Hợp<br /> chất<br /> BS1<br /> BS2<br /> BS3<br /> BS4<br /> BS5<br /> BS6<br /> BS7<br /> A1<br /> A2<br /> A3<br /> A4<br /> A5<br /> A6<br /> A7<br /> <br /> Nồng độ ức chế tối thiểu – MIC (µ<br /> µg/ml)<br /> Vi khuẩn Gram (+)<br /> Vi khuẩn Gram (-)<br /> S. aureus B. subtilis<br /> E. coli P. aeruginosa<br /> 48<br /> 48<br /> 192<br /> 192<br /> 96<br /> 192<br /> 48<br /> 48<br /> 96<br /> 192<br /> 192<br /> 96<br /> 96<br /> 24<br /> 12<br /> 12<br /> 12<br /> 12<br /> 12<br /> 24<br /> 24<br /> 96<br /> 6<br /> 6<br /> 6<br /> 6<br /> -<br /> <br /> (-) >192 µg/ml<br /> Tác động trên gram âm rất kém và đặc biệt<br /> không có chất nào trong các hợp chất tổng hợp<br /> có tác động kháng khuẩn trên P. aeruginosa thử<br /> nghiệm.<br /> Nhìn chung các base Schiff cho họat tính<br /> kém hơn các amin tương ứng trên tất cả các<br /> chủng vi khuẩn thử nghiệm. Hai base Schiff có<br /> hoạt tính tốt nhất trong số đó là BS2 và BS6<br /> (hoạt tính kháng khuẩn trung bình yếu với<br /> MIC = 48 µg/ml trên S. aureus và B. subtilis);<br /> BS6 cho hoạt tính kháng E. coli tốt hơn BS2.<br /> Quan sát cấu trúc của BS2 và BS6, cả hai đều<br /> chứa nguyên tử F, điều này cho thấy có lẽ sự<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Học<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> có mặt của nguyên tố fluor có ảnh hưởng tích<br /> cực đến tác dụng kháng khuẩn.<br /> Nhóm các hợp chất amin tổng hợp từ các<br /> base Schiff tương ứng thể hiện hoạt tính kháng<br /> khuẩn tốt hơn các base Schiff từ 2 đến 32 lần và<br /> hoạt tính chủ yếu cũng thể hiện trên hai chủng<br /> vi khuẩn Gram (+) (S. aureus và B. subtilis). Có lẽ<br /> nối –C-N- thay vì –C=N- có vai trò quan trọng<br /> trong hoạt tính kháng khuẩn.<br /> <br /> Hai amin A6 và A7 thể hiện hoạt tính kháng<br /> khuẩn tốt nhất với MIC = 6 µg/ml trên S.<br /> aureus và B. subtilis. Hai amin này cũng<br /> mang trong cấu trúc các nguyên tử F, nhận<br /> xét này một lần nữa gợi ý ảnh hưởng tích<br /> cực của nguyên tử F trên hoạt tính kháng<br /> khuẩn ở cả base Schiff lẫn amin tương ứng.<br /> <br /> Hình 2. Kết quả 2D (trái) và 3D (phải) docking của<br /> hợp chất amin 6 (trên) và amin 7 (dưới) vào vị trí tác<br /> động của FabH ở S.aureus.<br /> <br /> Mô hình mô tả phân tử docking<br /> Từ kết quả giá trị MIC chọn ra 2 amin A6 và<br /> A7 là 2 chất có hoạt tính kháng khuẩn cao nhất<br /> để thực hiện docking vào protein S. aureus-FabH.<br /> Kết quả docking được minh họa trong hình 2.<br /> Kết quả docking cho thấy hai hợp chất này<br /> tạo được nhiều tương tác với các acid amin ở vị<br /> trí tác động của enzym. Ở A6, nguyên tử N của<br /> nhóm amin tạo được liên kết hydro khá mạnh<br /> với Aln240 (d=1,96 Å). Cấu trúc kị nước của hệ<br /> thống vòng thơm và chuỗi carbon tạo được<br /> tương tác kỵ nước với nhiều acid amin như<br /> <br /> 351<br /> <br />