
viÖn khoa häc vµ c«ng nghÖ viÖt nam
viÖn c«ng nghÖ sinh häc
B¸o c¸o tæng kÕt ®Ò tµi khoa häc cÊp nhµ n−íc
Nghiªn cøu t¹o interleukin-2 t¸i tæ hîp
dïng cho ®iÒu trÞ bÖnh ung th−
M∙ sè KC 04.33
Chñ nhiÖm ®Ò tµi: PGs, ts. tr−¬ng nam h¶i
6702
24/12/2007
hµ néi - 2007

B¸o c¸o tæng kÕt
§Ò tµi ®éc lËp cÊp Nhµ n−íc
M∙ sè: KC. 04. 33
Nghiªn cøu t¹o interleukin-2 t¸i
tæ hîp dïng cho ®iÒu trÞ bÖnh ung th−
Chñ nhiÖm §Ò tµi: PGS. TS. Tr−¬ng nam h¶i
01 / 2005 – 06 / 2007
Bé Khoa häc vµ C«ng nghÖ
ViÖn Khoa häc vµ C«ng nghÖ ViÖt Nam
ViÖn C«ng nghÖ Sinh häc

BỘ KHOA HỌC VIỆN KHOA HỌC
VÀ CÔNG NGHỆ VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM
VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
--------ÂÂÂ--------
BáocáotổngkếtKhoahọcvàKỹthuậtĐềtài
NGHIÊN CỨU TẠO INTERLEUKIN-2 TÁI TỔ HỢP
DÙNG CHO ĐIỀU TRỊ UNG THƯ
Mãsố:KC.04.33
Chủnhiệmđềtài:PGS.TS.TRƯƠNGNAMHẢI
Cơquanchủtrì:ViệnCôngnghệsinhhọc
Cơquanchủquản: ViệnKhoahọcvàCôngnghệViệtNam
Thờigianthựchiện: 01/2005‐06/2007
Hà Nội - 2007
Bản báo cáo viết xong ngày 15 / 12/ 2007.
Tài liệu này được chuẩn bị trên cơ sở kết quả thực hiện Đề tài cấp Nhà nước, mã số KC. 04. 33.
Mọi sao chép phải được sự đồng ý của Viện Công nghệ sinh học.
BKHCN
V.CNSH
BKHCN
V.CNSH
VKHCNVN
V.CNSH

Báo cáo Tổng kết Khoa học và Kỹ thuật đề tài KC.04.33
Thời gian thực hiện: 01/2005 – 06/2007 2
Lêi c¶m ¬n
Chủ nhiệm đề tài KC. 04.33 xin chân thành cảm ơn các cán bộ nghiên cứu
thuộc 3 cơ quan nghiên cứu khoa học là (i) Viện Công nghệ sinh học, Viện Khoa học
và Công nghệ Việt Nam, (ii) Trường Đại học Khoa học tự nhiên, ĐHQGHN, Bộ Giáo
dục và Đào tạo và (iii) Viện Kiểm định Quốc gia Vacxin và Sinh phẩm y tế, Bộ Y tế đã
tham gia thực hiện đề tài.
Chủ nhiệm đề tài KC. 04.33 xin chân thành cám ơn Lãnh đạo Viện Công nghệ
sinh học, Trường Đại học khoa học tự nhiên và Viện Kiểm định Quốc gia Vacxin và
Sinh phẩm y tế đã ủng hộ và tạo điều kiện thuận lợi về trang thiết bị và kinh phí cho
các tập thể cán bộ chủ trì và tham gia thực hiện đề tài này.
Chủ nhiệm và tập thể cán bộ nghiên cứu thực hiện đề tài xin chân thành cảm ơn
Vụ Quản lý Khoa học và Công nghệ các ngành KT-KT của Bộ Khoa học và Công nghệ
và Ban chủ nhiệm chương trình KC. 04 đã tạo điều kiện thuận lợi về kinh phí và quản
lý trong suốt thời gian thực hiện đề tài.
CƠ QUAN CHỦ TRÌ ĐỀ TÀI CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI
PGS. TS. TRƯƠNG NAM HẢI

Báo cáo Tổng kết Khoa học và Kỹ thuật đề tài KC.04.33
Thời gian thực hiện: 01/2005 – 06/2007 3
MỤC LỤC
DANH SÁCH NHỮNG NGƯỜI CHỦ TRÌ THỰC HIỆN..................................................8
DANH SÁCH NHỮNG NGƯỜI THAM GIA THỰC HIỆN VÀ CƠ QUAN PHỐI HỢP......9
BÀI TÓM TẮT......................................................................................................................11
LỜI MỞ ĐẦU........................................................................................................................15
CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC... 17
1.1. TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU Ở NƯỚC NGOÀI .........................................................17
1.1.1. Ung thư và các liệu pháp chữa trị ung thư.............................................................17
1.1.2 Ung thư thận và u hắc tố.........................................................................................18
1.1.3 Các liệu pháp chữa trị ung thư................................................................................19
1.1.4. Interleukin-2 và ứng dụng trong điều trị ung thư..................................................19
1.2. TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG NƯỚC ............................................................23
CHƯƠNG 2. LỰA CHỌN ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU...........26
2.1. MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI ...........................................................................................26
2.2. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU CẦN THỰC HIỆN ........................................................26
2.2.1 Tạo dòng gen IL-2..................................................................................................26
2.2.2 Tạo đột biến điểm của gen IL-2 .............................................................................26
2.2.3. Biểu hiện gen IL-2 trong các hệ biểu hiện khác nhau ...........................................27
2.2.4. Nghiên cứu và tối ưu điều kiện lên men cho các chủng vi sinh vật tái tổ hợp
mang gen IL-2 .................................................................................................................27
2.2.5. Tách chiết, tinh chế IL-2 từ dịch lên men và nghiên cứu tính chất của IL-2. .......27
2.2.6. Đánh giá chất lượng IL-2 ......................................................................................27
2.3. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.......................................................29
2.3.1. Vật liệu ..................................................................................................................29
2.3.2 Phương pháp nghiên cứu ........................................................................................30
CHƯƠNG 3. NHỮNG NỘI DUNG VÀ KẾT QUẢ ĐÃ THỰC HIỆN............................47
3.1. KẾT QUẢ TẠO DÒNG GEN IL-2..............................................................................47
3.1.1. Tách chiết RNA tổng số từ người và tổng hợp cDNA mã hóa gen IL-2...............47
3.1.2. Gắn sản phẩm PCR vào vector tách dòng pCR 2.1-TA ........................................48
3.1.3. Xác định trình tự nucleotide của gen IL-2.............................................................49
3.1.4. Kết luận .................................................................................................................50
3.2. KẾT QUẢ TẠO ĐỘT BIẾN GEN IL-2.......................................................................51
3.2.1. Tạo đột biến điểm làm mất điểm glycosyl hóa và thay thế Cys125 bằng Ser125....51
3.2.2. Gây hồi biến Ser25 thành Leu25..............................................................................54
3.2.3. Kết luận .................................................................................................................58
3.3. KẾT QUẢ BIỂU HIỆN IL-2 TRONG CÁC HỆ BIỂU HIỆN KHÁC NHAU............59
3.3.1. Biểu hiện gen lai Trx-rhIL2MN trong tế bào vi khuẩn E. coli..............................59
3.3.2. Biểu hiện gen lai Trx-rhIL2MN trong nấm men P. pastoris.................................63
3.3.3. Biểu hiện gen rhIL2 ở dạng riêng lẻ trong nấm men P. pastoris ..........................65
3.3.4. Kết luận .................................................................................................................68