viÖn khoa häc vµ c«ng nghÖ viÖt nam
viÖn c«ng nghÖ sinh häc
B¸o c¸o tæng kÕt ®Ò tµi khoa häc cÊp nhµ níc
Nghiªn cøu t¹o interleukin-2 t¸i tæ hîp
dïng cho ®iÒu trÞ bÖnh ung th
M sè KC 04.33
Chñ nhiÖm ®Ò tµi: PGs, ts. tr¬ng nam h¶i
6702
24/12/2007
hµ néi - 2007
B¸o c¸o tæng kÕt
§Ò tµi ®éc lËp cÊp Nhµ níc
M sè: KC. 04. 33
Nghiªn cøu t¹o interleukin-2 t¸i
tæ hîp dïng cho ®iÒu trÞ bÖnh ung th
Chñ nhiÖm §Ò tµi: PGS. TS. Tr¬ng nam h¶i
01 / 2005 – 06 / 2007
Bé Khoa häc vµ C«ng nghÖ
ViÖn Khoa häc vµ C«ng nghÖ ViÖt Nam
ViÖn C«ng nghÖ Sinh häc
B KHOA HC VIN KHOA HC
VÀ CÔNG NGH VÀ CÔNG NGH VIT NAM
VIN CÔNG NGH SINH HC
--------ÂÂÂ--------
BáocáotngkếtKhoahcKỹthutĐềtài
NGHIÊN CU TO INTERLEUKIN-2 TÁI T HP
DÙNG CHO ĐIU TR UNG THƯ
s:KC.04.33
Chủnhimđềtài:PGS.TS.TRƯƠNGNAMHI
Cơquanchủtrì:VinCôngnghệsinhhc
Cơquanchủqun: VinKhoahcCôngnghệVitNam
Thigianthchin: 01/2005‐06/2007
Hà Ni - 2007
Bn báo cáo viết xong ngày 15 / 12/ 2007.
Tài liu này được chun b trên cơ s kết qu thc hin Đề tài cp Nhà nước, mã s KC. 04. 33.
Mi sao chép phi được s đồng ý ca Vin Công ngh sinh hc.
BKHCN
V.CNSH
BKHCN
V.CNSH
VKHCNVN
V.CNSH
Báo cáo Tng kết Khoa hc và K thut đề tài KC.04.33
Thi gian thc hin: 01/2005 – 06/2007 2
Lêi c¶m ¬n
Ch nhim đề tài KC. 04.33 xin chân thành cm ơn các cán b nghiên cu
thuc 3 cơ quan nghiên cu khoa hc là (i) Vin Công ngh sinh hc, Vin Khoa hc
và Công ngh Vit Nam, (ii) Trường Đại hc Khoa hc t nhiên, ĐHQGHN, B Giáo
dc và Đào to và (iii) Vin Kim định Quc gia Vacxin và Sinh phm y tế, B Y tế đã
tham gia thc hin đề tài.
Ch nhim đề tài KC. 04.33 xin chân thành cám ơn Lãnh đạo Vin Công ngh
sinh hc, Trường Đại hc khoa hc t nhiên và Vin Kim định Quc gia Vacxin và
Sinh phm y tế đã ng h và to điu kin thun li v trang thiết b và kinh phí cho
các tp th cán b ch trì và tham gia thc hin đề tài này.
Ch nhim và tp th cán b nghiên cu thc hin đề tài xin chân thành cm ơn
V Qun lý Khoa hc và Công ngh các ngành KT-KT ca B Khoa hc và Công ngh
và Ban ch nhim chương trình KC. 04 đã to điu kin thun li v kinh phí và qun
lý trong sut thi gian thc hin đề tài.
CƠ QUAN CH TRÌ ĐỀ TÀI CH NHIM ĐỀ TÀI
PGS. TS. TRƯƠNG NAM HI
Báo cáo Tng kết Khoa hc và K thut đề tài KC.04.33
Thi gian thc hin: 01/2005 – 06/2007 3
MC LC
DANH SÁCH NHNG NGƯỜI CH TRÌ THC HIN..................................................8
DANH SÁCH NHNG NGƯỜI THAM GIA THC HIN VÀ CƠ QUAN PHI HP......9
BÀI TÓM TT......................................................................................................................11
LI M ĐẦU........................................................................................................................15
CHƯƠNG 1. TNG QUAN TÌNH HÌNH NGHIÊN CU TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC... 17
1.1. TÌNH HÌNH NGHIÊN CU NƯỚC NGOÀI .........................................................17
1.1.1. Ung thư và các liu pháp cha tr ung thư.............................................................17
1.1.2 Ung thư thn và u hc t.........................................................................................18
1.1.3 Các liu pháp cha tr ung thư................................................................................19
1.1.4. Interleukin-2 và ng dng trong điu tr ung thư..................................................19
1.2. TÌNH HÌNH NGHIÊN CU TRONG NƯỚC ............................................................23
CHƯƠNG 2. LA CHN ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CU...........26
2.1. MC TIÊU CA ĐỀ TÀI ...........................................................................................26
2.2. NI DUNG NGHIÊN CU CN THC HIN ........................................................26
2.2.1 To dòng gen IL-2..................................................................................................26
2.2.2 To đột biến đim ca gen IL-2 .............................................................................26
2.2.3. Biu hin gen IL-2 trong các h biu hin khác nhau ...........................................27
2.2.4. Nghiên cu và ti ưu điu kin lên men cho các chng vi sinh vt tái t hp
mang gen IL-2 .................................................................................................................27
2.2.5. Tách chiết, tinh chế IL-2 t dch lên men và nghiên cu tính cht ca IL-2. .......27
2.2.6. Đánh giá cht lượng IL-2 ......................................................................................27
2.3. VT LIU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CU.......................................................29
2.3.1. Vt liu ..................................................................................................................29
2.3.2 Phương pháp nghiên cu ........................................................................................30
CHƯƠNG 3. NHNG NI DUNG VÀ KT QU ĐÃ THC HIN............................47
3.1. KT QU TO DÒNG GEN IL-2..............................................................................47
3.1.1. Tách chiết RNA tng s t người và tng hp cDNA mã hóa gen IL-2...............47
3.1.2. Gn sn phm PCR vào vector tách dòng pCR 2.1-TA ........................................48
3.1.3. Xác định trình t nucleotide ca gen IL-2.............................................................49
3.1.4. Kết lun .................................................................................................................50
3.2. KT QU TO ĐỘT BIN GEN IL-2.......................................................................51
3.2.1. To đột biến đim làm mt đim glycosyl hóa và thay thế Cys125 bng Ser125....51
3.2.2. Gây hi biến Ser25 thành Leu25..............................................................................54
3.2.3. Kết lun .................................................................................................................58
3.3. KT QU BIU HIN IL-2 TRONG CÁC H BIU HIN KHÁC NHAU............59
3.3.1. Biu hin gen lai Trx-rhIL2MN trong tế bào vi khun E. coli..............................59
3.3.2. Biu hin gen lai Trx-rhIL2MN trong nm men P. pastoris.................................63
3.3.3. Biu hin gen rhIL2 dng riêng l trong nm men P. pastoris ..........................65
3.3.4. Kết lun .................................................................................................................68