BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ MINH
BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
***000***
ĐỖ TH NGỌC HÂN
CHUYỂN GEN gfp (GREEN FLUORESCENT PROTEIN)
VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN Pseudomonas fluorescens
BẰNG PHƢƠNG PHÁP TIẾP HỢP BA THÀNH PHẦN
Luận văn kỹ sƣ
Chuyên ngành: Công nghệ sinh học
Thành phố Hồ Chí Minh
Thng 09 / 2006
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ MINH
BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
***000***
CHUYỂN GEN gfp (GREEN FLUORESCENT PROTEIN)
VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN Pseudomonas fluorescens
BẰNG PHƢƠNG PHÁP TIẾP HỢP BA THÀNH PHẦN
Luận văn kỹ sƣ
Chuyên ngành: Công nghệ sinh học
Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện:
LÊ ĐÌNH ĐÔN ĐỖ TH NGỌC HÂN
Kha: 2002 - 2006
Thành phố Hồ Chí Minh
Thng 09 / 2006
MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING
NONG LAM UNIVERSITY, HCMC
DEPARTMENT OF BIOTECHNOLOGY
************
TRANSFER gfp (GREEN FLUORESCENT PROEIN) GENE
INTO Pseudomonas fluorescens BACTERIAL CELL
BY TRIPARENTAL MATING MENTHOD
Graduation thesis
Major: Biotechnology
Professor Student
LE DINH DON DO THI NGOC HAN
Term: 2002 - 2006
Ho Chi Minh City
09 / 2006
iv
iv
LỜI CẢM ƠN
Tôi xin chân thành cm ơn:
Gia đình là chỗ dựa về vật chất và tinh thần cho tôi trong suốt thời gian học tập và làm
khóa luận.
Ban gim hiệu Trƣờng Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh.
Ban chủ nhiệm cùng thầy cô Bộ Môn Công Nghệ Sinh Học đã truyền đạt mọi kiến
thức, giúp đỡ và tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong thời gian học tập ở trƣờng.
Thầy Lê Đình Đôn đã tận tình hƣớng dẫn tôi trong suốt qu trình thực tập và hoàn
tất khóa luận tốt nghiệp này.
Thầy Zhang Liqun ở Đại Học Nông Nghiệp Trung Quốc đã cung cấp mẫu vi khuẩn E.coli
DH5α (λ-pir) chứa plasmid pUT-gfp, vi khuẩn E.coli DH5α (λ-pir) chứa plasmid pRK600 và
cc tài liệu phục vụ cho thí nghiệm.
Ban gim đốc cùng cc anh chị trực thuộc Trung Tâm Phân Tích – Thí Nghiệm
Hóa Sinh Trƣờng Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh đã hƣớng dẫn và chia
sẻ cùng tôi những khó khăn trong thời gian thực hiện khóa luận.
Anh Nguyễn Văn Lẫm đã nhiệt tình giúp đỡ tôi hoàn thành luận văn này.
Tất cả cc anh chị thuộc Bộ Môn Bảo Vệ Thực Vật Khoa Nông Học đã giúp đỡ tôi
trong qu trình thực hiện đề tài.
Cc bạn bè lớp Công Nghệ Sinh Học 28 đã giúp đỡ và động viên tôi trong suốt
những năm học cũng nhƣ thời gian thực hiện khóa luận.
Thành phố Hồ Chí Minh, thng 8 năm 2006
Sinh viên
Đỗ Thị Ngọc Hân
v
v
TÓM TẮT
Đỗ Thị Ngọc Hân, Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh, “CHUYỂN GEN
gfp (GREEN FLUORESCENT PROTEIN) VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN
Pseudomonas fluorescens” BẰNG PHƢƠNG PHÁP TIẾP HỢP BA THÀNH
PHẦN. Đề tài đƣợc thực hiên ở Trƣờng Đại học Nông Lâm Tp. Hồ Chí Minh, thời
gian từ thng 02/2006 đến thng 08/2006, dƣới sự hƣớng dẫn cuả Thầy Lê Đình Đôn.
Nội dung nghiên cứu
Chọn lọc vi khuẩn Pseudomonas fluorescens trên môi trƣờng chọn lọc.
Xây dựng quy trình tiếp hợp plasmid pUT- gfp vào vi khuẩn Pseudomonas
fluorescens bằng phƣơng php tiếp hợp ba thành phần (triparental mating).
Tch chiết DNA plasmid pUT-gfp để làm mẫu dò.
Tiến hành phƣơng php Dot Blot để kiểm tra gen đã chuyển.
Xem biểu hiện gen pht sng trên kính hiển vi có pht huỳnh quang.
Kết quả đạt đƣợc
Thiết lập đƣợc quy trình tiếp hợp Plasmid pUT- gfp vào vi khuẩn Pseudomonas
fluorescens bằng phƣơng php tiếp hợp ba thành phần (triparental mating).
Hoàn thiện quy trình kiểm tra gen đã chuyển bằng phƣơng php Dot Blot và xem
lại trên kính hiển vi pht huỳnh quang.