Đ tài nghiên c u “Xác đnh n ng đ n c javel cho quá trình kh m u phátề ứ ị ồ ộ ướ ử ẫ
hoa lan h đi p. nh h ng c a ch t đi u hòa sinh tr ng BAP, TDZ, NAA đn quá ồ ệ Ả ưở ủ ấ ề ưở ế
trình
sinh tr ng, phát tri n c a lan h đi p lai (Phalaenopsis sp.) in vitro” đc ti n hành ưở ể ủ ồ ệ ượ ế
t iạ
phòng di truy n và ch n gi ng - Vi n Khoa h c K thu t Nông nghi p mi n Nam, ề ọ ố ệ ọ ỹ ậ ệ ề
th i gianờ
th c hi n t tháng 2/2009 đn tháng 7/2009. Thí nghi m đc b trí theo ki u hoàn ự ệ ừ ế ệ ượ ố ể
toàn
Đ tài nh m theo dõi n ng đ javel thích h p cho quá trình kh m u phát hoa lan hề ằ ồ ộ ợ ử ẫ ồ
đi p, quá trình t o protocorm và s phát tri n r c a lan h đi p in vitro khi thay đi ệ ạ ự ể ễ ủ ồ ệ ổ
n ngồ
đ ch t đi u hoà sinh tr ng BAP, TDZ, NAA trong môi tr ng nuôi c y.ộ ấ ề ưở ườ ấ
v Ph ng pháp kh trùng m u c y:ươ ử ẫ ấ
Kh trùng m u phát hoa lan h đi p b ng cách thay đi n ng đ javel (20%, 40%,ử ẫ ồ ệ ằ ổ ồ ộ
60%, 80%). Kh trùng n ng đ 80% cho k t qu t t nh t.ử ở ồ ộ ế ả ố ấ
v T o protocorm tr c ti p t mô lá:ạ ự ế ừ
Công th c môi tr ng có s k t h p gi a BAP và TDZ thích h p cho quá trình t oứ ườ ự ế ợ ữ ợ ạ
protocorm: MS + đng (30 g/lít )+ PVP (100 mg/lít) + NAA (1 mg/lít) + agar (8 g/lít) +ườ
TDZ (5 mg/lít) + BAP (3 mg/lít) + than ho t tính (2 g/lít), pH = 5,8.ạ
v Kích thích s ra r c a ch i:ự ễ ủ ồ
S d ng NAA đ kích thích t o r lan H Đi p in vitro, các công th c môiử ụ ể ạ ễ ở ồ ệ ứ
- MS + đng (30 g/lít) + n c d a (5 ml/lít) + than ho t tính (2 g/lít) + agar (8ườ ướ ừ ạ
g/lít) + BAP (ĐC) (0,05 mg/lít).
- MS + đng (30 g/lít) + n c d a (5 ml/lít) + than ho t tính (2 g/lít) + agar (8ườ ướ ừ ạ
g/lít) + BAP (0,05 mg/lít) + NAA (0,5 mg/lít) (cho k t qu t t nh t).ế ả ố ấ
- MS + đng (30 g/lít) + n c d a (5 ml/lít)+ than ho t tính (2 g/lít) + agar (8ườ ướ ừ ạ
g/lít )+ BAP (0,05 mg/lít ) + NAA (1 mg/lít).
- MS + đng (30 g/lít) + n c d a (5 ml/lít) + than ho t tính (2 g/lít) + agar (8ườ ướ ừ ạ
g/lít) + BAP (0,05 mg/lít) + NAA (1,5 mg/lít).
Trang t a: ........................................................................................................................ iự
L I C M T ................................................................................................................. iiỜ Ả Ạ
TÓM T T...................................................................................................................... iiiẮ
M C L C ..................................................................................................................... ivỤ Ụ
DANH SÁCH CÁC HÌNH ........................................................................................... vii
DANH SÁCH CÁC B NG ........................................................................................ viiiẢ
Ch ng 1 M ĐU ........................................................................................................1ươ Ở Ầ
1.1 Đt v n ặ ấ
đ .............................................................................................................................. 1ề
1.2 M c tiêu và yêu ụ
c u............................................................................................................... 2ầ
1.2.1 M c ụ
tiêu .......................................................................................................................... 2
1.2.2 Yêu
c u ........................................................................................................................... 2ầ
Ch ng 2 T NG QUAN TÀI LI U ...............................................................................3ươ Ổ Ệ
2.1 L ch s phát tri n nuôi c y ị ử ể ấ
mô ............................................................................................... 3
2.1.1 M t s k t qu tiêu bi u trong lĩnh v c nuôi c y mô th c v t trên th ộ ố ế ả ể ự ấ ự ậ ế
gi i ................. 3ớ
2.1.2 S l c quá trình phát tri n nuôi c y mô t bào th c v t Vi t ơ ượ ể ấ ế ự ậ ở ệ
Nam ........................ 5
2.2 Các ph ng pháp nuôi c y mô t bào th c ươ ấ ế ự
v t .................................................................... 6ậ
2.2.1 Nuôi c y đnh sinh ấ ỉ
tr ng ............................................................................................. 6ưở
2.2.2 Nuôi c y mô ấ
s o ............................................................................................................. 6ẹ
2.2.3 Nuôi c y t bào ấ ế
đn ....................................................................................................... 6ơ
2.2.4 Nuôi c y protoplast – lai ấ
protoplast .............................................................................. 7
2.2.5 Nuôi c y h t ấ ạ
ph n .......................................................................................................... 7ấ
2.3 Quy trình nhân gi ng in ố
vitro ................................................................................................ 7
2.3.1 Kh trùng m u ử ẫ
c y ......................................................................................................... 7ấ
2.3.2 Tái sinh m u nuôi ẫ
c y .................................................................................................... 8ấ
2.3.3 Nhân
nhanh .................................................................................................................... 8
2.3.4 T o cây hoàn ạ
ch nh ........................................................................................................ 8ỉ
2.3.5 Đa cây ra ư
đt................................................................................................................ 8ấ
2.4 Nh ng v n đ còn t n t i trong nhân gi ng cây ữ ấ ề ồ ạ ố
tr ng ......................................................... 9ồ
2.4.1 Tính b t đnh v m t di ấ ị ề ặ
truy n ....................................................................................... 9ề
2.4.2 S ho i ự ạ
m u .................................................................................................................... 9ẫ
2.4.3 S d ng thu c kháng ử ụ ố
sinh ............................................................................................ 10
2.4.4 Vi c s n xu t các ch t gây đc t m u ệ ả ấ ấ ộ ừ ẫ
c y .................................................................. 10ấ
2.4.5 Hi n t ng th y tinh ệ ượ ủ
th ............................................................................................... 10ể
2.5 ng d ng k thu t nuôi c y mô t bào trong nông Ứ ụ ỹ ậ ấ ế
nghi p .................................................. 11ệ
2.5.1 Vi nhân
gi ng ................................................................................................................ 11ố
2.5.2 S n xu t và b o qu n cây s ch ả ấ ả ả ạ
b nh ............................................................................ 12ệ
2.5.3 B o qu n và nhân gi ng in ả ả ố
vitro................................................................................... 12
2.6 Ch t đi u hòa sinh tr ng th c v t ấ ề ưở ự ậ
(ĐHSTTV) ................................................................. 12
2.6.1
Auxin ............................................................................................................................. 12
2.6.2
Cytokinin....................................................................................................................... 13
2.7 S l c v lan h ơ ượ ề ồ
đi p ......................................................................................................... 13ệ
2.7.1 V trí phân ị
lo i ............................................................................................................. 13ạ
2.7.2 Ngu n g c, xu t ồ ố ấ
x ...................................................................................................... 14ứ
2.7.3 Mô t hình ả
thái ............................................................................................................. 14
2.7.4 Tr ng tr t và chăm sóc ................................................................................................ồ ọ
17
2.7.5 Nhân gi ng truy n ố ề
th ng ............................................................................................. 20ố
2.8 Vi nhân gi ng ố
Phalaenopsis ............................................................................................... 21
2.8.1 Nhân gi ng vô tính s d ng ch i ố ử ụ ồ
đnh......................................................................... 21ỉ
2.8.2 Tái sinh ch i t phát hoa Phalaenopsis ...................................................................... ồ ừ
22
2.8.3 Tái sinh PLB t mô lá Phalaenopsis ........................................................................... ừ
23
2.8.4 Tăng tr ng PLB thành cây con..................................................................................ưở
23
2.9 Giá tr kinh t c a lan h ị ế ủ ồ
đi p ............................................................................................. 24ệ
_Toc241549069Ch ng 3 V T LI U VÀ PH NG PHÁP THÍ NGHI M ...............26ươ Ậ Ệ ƯƠ Ệ
3.1 Th i gian và đa ờ ị
đi m .......................................................................................................... 26ể
3.2 Ph ng ti n thí ươ ệ
nghi m ....................................................................................................... 26ệ
3.2.1 Đi t ng thí ố ượ
nghi m ................................................................................................... 26ệ
3.2.2 Trang thi t b và d ng ế ị ụ
c .............................................................................................. 26ụ
3.3 Ti n hành thí ế
nghi m........................................................................................................... 28ệ
3.3.1 Thí nghi m 1: Kh o sát s nh h ng c a n ng đ n c javel đn đ s ch c a ệ ả ự ả ưở ủ ồ ộ ướ ế ộ ạ ủ
m uẫ
c y ........................................................................................................................................ấ
.. 28
3.3.2 Thí nghi m 2: nh h ng c a n ng đ BA,TDZ, đi u ki n nuôi c y t i quá trìnhệ Ả ưở ủ ồ ộ ề ệ ấ ớ
t oạ
protocorm t lá cây h ừ ồ
đi p .................................................................................................. 29ệ
3.3.3 Thí nghiêm 3:Kh o sát s nh h ng c a n ng đ NAA đn sinh tr ng, phát ả ự ả ưở ủ ồ ộ ế ưở
tri nể
c a cây lan h đi p in ủ ồ ệ
vitro ................................................................................................... 30
3.4 X lý s ử ố
li u......................................................................................................................... 31ệ
Ch ng 4 K T QU VÀ TH O LU N ......................................................................32ươ Ế Ả Ả Ậ
4.1 Thí nghi m 1: nh h ng c a n ng đ n c javel đn đ s ch c a m u ệ Ả ưở ủ ồ ộ ướ ế ộ ạ ủ ẫ
c y .................. 32ấ
4.2 Thí nghi m 2: nh h ng c a n ng đ BAP,TDZ, đi u ki n nuôi c y t i quá trìnhệ Ả ưở ủ ồ ộ ề ệ ấ ớ
t oạ
protocorm t lá cây h đi p in ừ ồ ệ
vitro ......................................................................................... 35
4.3 Thí nghi m 3: nh h ng c a n ng đ NAA đn sinh tr ng, phát tri n c a cây ệ Ả ưở ủ ồ ộ ế ưở ể ủ
lan hồ
đi p in ệ
vitro ................................................................................................................................ 43
Ch ng 5 K T LU N VÀ Đ NGH ..........................................................................49ươ Ế Ậ Ề Ị
5.1 K t ế
lu n ................................................................................................................................ 49ậ
5.2 Đ ề
ngh ................................................................................................................................. 49ị
TÀI LI U THAM KH O .............................................................................................50Ệ Ả
TÀI LI U TI NG VI T ...............................................................................................50Ệ Ế Ệ
PH L C ......................................................................................................................53Ụ Ụ
DANH SÁCH CÁC CH VI T T TỮ Ế Ắ
: 6 – Benzylaminopurine
: Thidiazuron
: - Napthylacetic acidα
: Đi ch ngố ứ
: Murashige and Skoog (1962)
: Môi tr ng n nườ ề