Nghiên cứu kỹ thuật RT-qPCR để định lượng vi khuẩn Gram âm dung nạp mật trong dược phẩm

Theo Dược điển Việt Nam V, yêu cầu kiểm nghiệm vi khuẩn Gram âm dung nạp mật trong dược phẩm là bắt buộc, do tiềm ẩn nguy cơ sức khỏe và vai trò chỉ thị nhiễm khuẩn. Các phương pháp truyền thống thường tốn nhiều thời gian và công sức, đặt ra nhu cầu cấp thiết về các kỹ thuật nhanh và chính xác hơn. Việc đảm bảo an toàn và chất lượng sản phẩm dược phẩm, đặc biệt các sản phẩm có nguồn gốc tự nhiên hoặc dùng đường hít, là ưu tiên hàng đầu. Nghiên cứu này tập trung vào việc ứng dụng kỹ thuật RT-qPCR để định lượng chính xác và nhanh chóng vi khuẩn Gram âm dung nạp mật trong các mẫu dược phẩm, nhằm khắc phục những hạn chế của phương pháp kiểm nghiệm vi sinh truyền thống.

Các nhà khoa học kiểm soát chất lượng dược phẩm, nhà vi sinh vật học, cơ quan quản lý dược phẩm và các nhà nghiên cứu trong lĩnh vực dược phẩm và công nghệ sinh học.

Nghiên cứu này trình bày một phương pháp RT-qPCR đã được thẩm định để định lượng nhanh và chính xác tổng số vi khuẩn Gram âm dung nạp mật trong các sản phẩm dược phẩm, tập trung vào các chủng Enterobacteriaceae và Pseudomonas. Phương pháp này đáp ứng yêu cầu kiểm nghiệm giới hạn nhiễm khuẩn của Dược điển Việt Nam V, một thách thức đối với các kỹ thuật truyền thống về hiệu quả thời gian. Quy trình phát triển bao gồm thiết kế mồi và đoạn dò đặc hiệu (rpIP_F1/R1/P1 và oprI_F1/R1/P1) bằng phương pháp in silico và kiểm tra in vitro, đảm bảo độ đặc hiệu và độ nhạy cao. Kỹ thuật RT-qPCR đã được thẩm định toàn diện các tiêu chí quan trọng như độ đặc hiệu, độ tuyến tính, độ đúng, giới hạn định lượng (LOQ) và giới hạn phát hiện (LOD). Kết quả cho thấy phương pháp đạt hiệu quả cao với nồng độ mồi và đoạn dò tối ưu lần lượt là 400 nM và 200 nM, đạt LOQ là 4.10² tế bào/ml và LOD là 121 tế bào/ml. Những phát hiện này khẳng định khả năng ứng dụng của kỹ thuật RT-qPCR vào kiểm soát chất lượng dược phẩm, mang lại giải pháp nhanh chóng và đáng tin cậy hơn so với các phương pháp nuôi cấy truyền thống, nâng cao an toàn sản phẩm và tuân thủ quy định.