Định danh chủng vi khuẩn Bacillus subtilis R1 phân lập từ rơm có hoạt tính phân huỷ huyết khối

Chia sẻ: _ _ | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:3

Thêm vào BST

Báo xấu

1
lượt xem 0
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Việt Nam là quốc gia có nhiều rơm từ nền nông nghiệp trồng lúa nước nên rất có thể có sự phân bố đa dạng các loài Bacillus subtilis trong rơm có hoạt tính sinh học tốt. Vì vậy, rơm là nguồn vật liệu tốt để phân lập các chủng vi khuẩn này. Trong nghiên cứu này trình bày kết quả định danh chủng Bacillus subtilis R1 có hoạt tính phân huỷ huyết khối phân lập từ rơm khô.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Định danh chủng vi khuẩn Bacillus subtilis R1 phân lập từ rơm có hoạt tính phân huỷ huyết khối

Tuyển tập Hội nghị Khoa học thường niên năm 2024. ISBN: 978-604-82-8175-5 ĐỊNH DANH CHỦNG VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS R1 PHÂN LẬP TỪ RƠM CÓ HOẠT TÍNH PHÂN HUỶ HUYẾT KHỐI Trịnh Đình Khá, Vũ Minh Tiến, Nguyễn Thị Lành, Đỗ Đức Cảnh Trường Đại học Thuỷ lợi, email: trinhdinhkha@tlu.edu.vn 1. GIỚI THIỆU CHUNG 2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Theo Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) hằng 2.1. Vật liệu năm có khoảng 18,6 triệu người tử vong liên Chủng vi khuẩn R1 phân lập từ mẫu rơm quan đến bệnh tim mạch, trong đó đột quỵ là khô thu thập tại Huyện Đông Anh, Tp. Hà nguyên nhân hàng đầu gây tử vong và gây tàn Nội năm 2021 được cung cấp bởi phòng thí phế ở các nước đang phát triển. Ở Việt Nam, nghiệm Công nghệ sinh học - Trường Đại theo thống kê của Bộ Y tế có khoảng 200.000 học Thuỷ lợi. người bị đột quỵ mỗi năm Trong các dạng đột Chủng vi khuẩn Bacillus natto được cung quỵ thì có 85% nguyên nhân là do huyết khối cấp bởi công ty Kawashimaya-Nhật Bản làm [1]. Bacillus subtilis là một loại vi khuẩn đối chứng. Gram dương đã được phát hiện trong sản phẩm natto lên men truyền thống từ đậu tương 2.2. Phương pháp nghiên cứu ở Nhật Bản năm 1980 bởi Sumi Hyroiuki. Vi Phương pháp nghiên cứu đặc điểm hình thái: khuẩn này có khả năng sinh tổng hợp ra nhiều Chủng vi khuẩn R1 được nuôi cấy trên loại enzyme có ý nghĩa trong công nghiệp, môi trường LB thạch đĩa để quan sát, mô tả nông nghiệp và y học. Đặc biệt, Bacillus đặc điểm hình thái khuẩn lạc, hình thái tế bào subtilis có khả năng sinh tổng hợp enzyme và nhuộm Gram theo phương pháp mổ tả nattokinase có khả năng làm tan huyết khối trong tài liệu của Nguyễn Thị Minh Đức [2]. trong cơ thể từ đó tạo các sản phẩm hỗ trợ Phương pháp xác định khả năng phân huỷ người bị đột quỵ do huyết khối [5]. casein và phân huỷ máu đông: Bacillus subtilis phân bố ở nhiều môi trường Chủng vi khuẩn R1 và chủng đối chứng khác nhau như: đất, nước, thực phẩm, thực cùng được nuôi cấy trên môi trường MPA dịch vật,... trong đó rơm khô là một môi trường có thể trong 24h ở 37C, lắc 150 vòng/phút với sự phân bố nhiều các chủng Bacillus subtilis. lượng tiếp giống như nhau. Dịch lên men được Trong lịch sử phát hiện và hình thành món ly tâm loại bỏ sinh khối và lọc qua màng lọc natto truyền thống của Nhật Bản cũng xuất 0,2µm. Sau đó 100µl dịch lên men nhỏ giếng phát từ việc phát hiện các hạt đậu tương luộc thử phân huỷ casein và đĩa máu đông. Tiến rơi vãi trong các bó rơm được lên men [5]. Việt hành ủ 24h ở 37C sau đó quan sát sự phân Nam là quốc gia có nhiều rơm từ nền nông huỷ máu đông; quan sát sự phân huỷ casein nghiệp trồng lúa nước nên rất có thể có sự phân bằng cách nhuộm Commasie Briant Blue. bố đa dạng các loài Bacillus subtilis trong rơm Phương pháp xác định khả năng hoà tan có hoạt tính sinh học tốt. Vì vậy, rơm là nguồn tan huyết khối: vật liệu tốt để phân lập các chủng vi khuẩn này. Cân 2 g huyết heo tươi cho vào ống Trong nghiên cứu này trình bày kết quả định nghiệm, bổ sung thêm 2 mL dịch lên men vi danh chủng Bacillus subtilis R1 có hoạt tính khuẩn R1 và chủng đối chứng thu được ở phân huỷ huyết khối phân lập từ rơm khô. trên vào ống nghiệm. Ủ ở 37C, sau 2 giờ và 532
Tuyển tập Hội nghị Khoa học thường niên năm 2024. ISBN: 978-604-82-8175-5 4 giờ, cân lại khối lượng khối huyết còn lại 3.3. Khả năng hoà tan huyết khối của và tính tỷ lệ hòa tan huyết khối. Mỗi thí dịch lên men chủng R1 nghiệm lặp lại ba lần [3]. Kết quả xác định cho thấy dịch lên men Phương pháp định danh chủng vi khuẩn chủng vi khuẩn R1 có khả năng hoà tan huyết R1 bằng chỉ thị gen 16S-rRNA: DNA chủng R1 được tách chiết theo khối. Khi so sánh với chủng Bacillus natto phương pháp mô tả của Sambrook and của Nhật Bản thì chủng R1 có khả năng hoà Russell, [4]. tan huyết khối cao hơn (Bảng 1). Chủng R1 đã được định danh dựa vào chỉ Bảng 1. Khả năng hoà tan huyết khối thị gen 16S-rRNA theo phương pháp đã được của dịch lên men chủng vi khuẩn R1 mô tả trong tài liệu của Trương Quang Vinh và công sự [6]. Mẫu dịch lên men % Hòa tan huyết khối ĐC 13,87±1,1 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU R1 16,81±1,3 3.1. Đặc điểm hình thái chủng R1 ĐC: Chủng Bacillus natto đối chứng; R1: Chủng vi khuẩn R1. Kết quả phân tích đặc điểm hình thái chủng R1 cho thấy chủng R1 có khuẩn lạc 3.4. Định danh chủng vi khuẩn R1 màu trắng sữa, khô, bề mặt không nhăn, mép có răng cưa. Tế bào chủng R1 có hình que, là DNA tổng số của chủng R1 được tách vi khuẩn thuộc nhóm Gram dương (Hình 1). chiết theo phương pháp đã mô tả. Kết quả điện di trên gel agarose cho thấy DNA không bị đứt gãy, có thể dùng cho các nghiên cứu về khuếch đại gene 16S-rRNA bằng PCR (Hình 4a). Sử dụng PCR với cặp mồi 27F/1492R đã a b khuếch đại được đoạn DNA đặc hiệu có kích Hình 1. Hình thái khuẩn lạc (a) và hình thái thước khoảng gần 1500 bp (Hình 4b). Kích tế bào (b) của chủng vi khuẩn R1 thước của đoạn gene nhân bản được phù hợp với tính toán lý thuyết. Sản phẩm PCR được 3.2. Kết quả xác định hoạt tính phân tinh sạch để đọc trình tự nucleotide. huỷ casein và phân huỷ máu đông Hoạt tính phân huỷ casein và phân huỷ máu đông đã được xác định theo phương pháp đã mô tả. Kết quả cho thấy dịch lên men ngoại bào của chủng R1 có hoạt tính phân huỷ casein và phân huỷ máu đông. Khi so sánh với chủng Bacillus natto của Nhật Bản thì hoạt tính phân a b huỷ casein và phân huỷ máu đông của chủng R1 có vòng phân huỷ cao hơn (Hình 2). Hình 4. Hình ảnh điện di DNA tổng số (a) và sản phẩm PCR (b) của chủng R1 M: Thang chuẩn 1 kb (GeneRuler 1 kb plus DNA ladder); 1: Chủng R1; ĐC-: Đối chứng âm a b không có khuôn DNA; ĐC+: Đối chứng dương Hình 3. Hoạt tính phân huỷ casein (a) và sản phẩm PCR gen 16S-rRNA hoạt tính phân huỷ máu đông (b) của chủng R1 Kết quả giải trình tự trực tiếp từ sản phẩm ĐC: Chủng Bacillus natto đối chứng; 1: PCR cho thấy đoạn gen mã hóa 16S-rRNA Chủng vi khuẩn R1. của chủng R1 có chiều dài 1328 nucleotide. 533
Tuyển tập Hội nghị Khoa học thường niên năm 2024. ISBN: 978-604-82-8175-5 So sánh trình tự nucleotide của chủng R1 với Lời cảm ơn: Công trình được thực hiện nhờ các trình tự đã công bố trên Genbank cho một phần kinh phí hỗ trợ từ đề tài cấp Trường thấy có độ tương đồng cao với các chủng B. Đại học Thuỷ lợi năm 2022. subtilis. Trong đó, tương đồng 99,92% so với trình tự gen 16S-rRNA của Bacillus subtilis 5. TÀI LIỆU THAM KHẢO có số đăng ký trên Genbank là OP954413.1 [1] Đặng Trung Anh, Hoàng Bùi Hải, Mai Duy (Hình 5). Chủng R1 được đặt tên là Bacillus Tôn, 2021. Một số yếu tố liên quan đến thời subtilis R1. gian cửa kim ở bệnh nhân đột quỵ nhồi máu não cấp được điều trị tiêu huyết khối. Tạp chí y học Việt Nam, số 1: 126-131. [2] Nguyễn Thị Minh Đức, 2000. Thực hành vi sinh vật, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội. [3] Lê Thị Bích Phượng, Võ Thị Hạnh, Trần Thạnh Phong, Lê Tấn Hưng, Trương Thị Hồng Vân và Lê Thị Hương, 2012. Phân lập và tuyển chọn một số chủng Bacillus sinh Hình 5. Hình ảnh so sánh độ tương đồng tổng hợp Nattokinase. Tạp chí Sinh học. 34 trình tự nucleotide gen 16S-rRNA chủng R1 (3SE): 99-104. với các chủng trên Genbank [4] Sambrook, J. and Russell, D.W., 2001. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 4. KẾT LUẬN 3rd Edition, Vol. 1, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York. Đã xác định được đặc điểm hình thái [5] Sumi, H., Hamada, H., Nakanishi, K. and khuẩn lạc và hình thái tế bào của chủng vi Hiratani, H., 1990. Enhancement of the khuẩn R1 phân lập từ mẫu rơm. Chủng R1 fibrinolytic activity in plasma by oral được xác định là loài Bacillus subtilis dựa administration of Nattokinase. Acta vào trình tự gen 16S-rRNA và được đặt tên là Haematologia. 84 (3): 139-143. Bacillus subtilis R1. Chủng vi khuẩn R1 có [6] Trương Quang Vinh, Trịnh Đình Khá, khả năng phân huỷ casein, phân huỷ máu Nguyễn Xuân Hưởng, 2019. Nghiên cứu đông và hoà tan huyết khối cho thấy tiềm định danh chủng Bacillus subtilis LS6, Tạp năng dùng để sản xuất chế phẩm hỗ trợ điều chí Khoa học và Công nghệ - Đại học Thái trị tan huyết khối. Nguyên, 202 (09): 29-36. 534