BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP. HỒ CHÍ MINH
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP
KHẢO SÁT ĐỘT BIẾN GEN RET TRÊN CA LÂM SÀNG
U SẮC BÀO TUYẾN THƯỢNG THẬN
MANG TÍNH GIA ĐÌNH
Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC
Giảng viên hướng dẫn: TS.BS Đỗ Đức Minh
Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Mỹ Hiền
MSSV: 1515100017 Lớp: 15HSH01
TP. Hồ Chí Minh, 2017
LỜI CAM ĐOAN
Em xin cam đoan nội dung trình bày trong đồ án tốt nghiệp với đề tài “Khảo sát
đột biến gen RET trên ca lâm sàng u sắc bào tuyến thượng thận mang tính gia
đình” là thành quả nghiên cứu trên cơ sở số liệu thực tế và được thực hiện dưới sự
hướng dẫn trực tiếp của giáo viên hướng dẫn.
Mọi tham khảo trong đồ án này đều được trích dẫn rõ ràng nguồn gốc.
Mọi sao chép vi phạm quy chế của nhà trường em xin chịu hoàn toàn trách nhiệm.
Tp.Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng 07 năm 2017
Sinh viên
Nguyễn Thị Mỹ Hiền
LỜI CẢM ƠN
Em xin chân thành cảm ơn quý thầy cô Khoa Công nghệ Sinh học – Thực phẩm
– Môi trường, Trường Đại học Công nghệ Tp.HCM đã tận tình giảng dạy và truyền
đạt những kiến thức, lòng nhiệt huyết cũng như niềm đam mê nghiên cứu cho em
trong suốt thời gian học tập tại trường.
Em xin gửi lời cảm ơn đến TS.BS. Đỗ Đức Minh, người thầy, người anh đã tận
tình hướng dẫn em các thông tin về lâm sàng, về kiến thức sinh học phân tử trong
suốt thời gian làm đồ án.
Em cũng xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến các anh chị ở Trung tâm Y sinh
học phân tử - Đại học Y Dược Tp. HCM đã luôn quan tâm, tạo mọi điều kiện thuận
lợi để em hoàn thành khóa luận này. Thời gian học hỏi và làm việc trong môi trường
thân thiện, luôn nhận được sự giúp đỡ cũng như góp ý nhiệt tình của anh chị ở Trung
tâm là khoảng thời gian quý báu, mang lại cho em thêm nhiều kiến thức và kinh
nghiệm trong quá trình làm việc.
Và trên hết, con xin gửi lời cảm ơn chân thành, sâu sắc tới gia đình. Cảm ơn
cha, mẹ đã sinh thành, nuôi dưỡng con khôn lớn, luôn bên cạnh động viên, ủng hộ,
dõi theo bước đường con đi.
Tp.Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng 07 năm 2017
Sinh viên
Nguyễn Thị Mỹ Hiền
Đồ án tốt nghiệp
i
MỤC LỤC
MỤC LỤC i
DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iv
DANH MỤC CÁC BẢNG v
MỞ ĐẦU 1
CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.1. U sắc bào tuyến thượng thận 2
1.1.1. Giới thiệu 2
1.1.2. Nguyên nhân 3
1.1.3. Biểu hiện 4
1.1.4. Xét nghiệm chẩn đoán 4
1.1.5. Điều trị 4
1.2. Bất thường di truyền 5
1.3. Các bệnh và hội chứng liên quan 8
1.3.1. Hội chứng NF1 8
1.3.2. Hội chứng VHL 8
1.3.3. Hội chứng MEN 9
1.4. Cấu trúc, đột biến, chức năng của gen RET 10
1.5. Các phương pháp giải trình tự 13
1.5.1. Phương pháp hóa học 13
1.5.2. Phương pháp enzyme 13
1.5.3. Giải trình tự bằng máy tự động (automated sequencer) 14
1.5.4. Kỹ thuật giải trình tự thế hệ mới-454 Pyrosequencing 15
1.6. Cơ sở dữ liệu và phần mềm phân tích trình tự nucleotide 16
1.6.1. Cơ sở dữ liệu 16
1.6.2. Phần mềm phân tích trình tự nucleotide 16
CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG - VẬT LIỆU - PHƯƠNG PHÁP
2.1. Thiết kế nghiên cứu 17
2.2. Đối tượng nghiên cứu 17
Đồ án tốt nghiệp
ii
2.3. Vật liệu 19
2.3.1. Dụng cụ và thiết bị 19
2.3.2. Hóa chất 20
2.4. Sơ đồ quy trình thực hiện 23
2.5. Thuyết minh quy trình 24
2.5.1. Quy trình tách chiết DNA 24
2.5.1.1. Nguyên tắc: 24
2.5.1.2. Các bước thực hiện: 24
2.5.2. Quy trình PCR gen RET 25
2.5.2.1. Nguyên tắc: 25
2.5.2.2. Các bước thực hiện: 27
2.5.3. Điện di sản phẩm PCR 27
2.5.3.1. Nguyên tắc: 27
2.5.3.2. Các bước thực hiện: 29
2.5.4. Quy trình tinh sạch sản phẩm PCR 30
2.5.4.1. Nguyên tắc: 30
2.5.4.2. Các bước thực hiện: 30
2.5.5. Quy trình cycle sequencing 31
2.5.5.1. Mục đích: 31
2.5.5.2. Các bước thực hiện: 31
2.5.6. Quy trình tủa sản phẩm cycle 32
2.5.6.1. Nguyên tắc: 32
2.5.6.2. Các bước thực hiện: 32
2.5.7. Giải trình tự bằng máy ABI 3500 33
2.5.7.1. Nguyên tắc: 33
2.5.7.2. Đọc trình tự chuỗi DNA: 33
CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ - BÀN LUẬN
3.1. Kết quả, bàn luận tách chiết 35
3.2. Kết quả, bàn luận PCR với cặp mồi đặc hiệu 35