TRƢỜNG ĐẠI HỌC LÂM NGHIỆP
VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LÂM NGHIỆP
.................oo0oo...................
KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP
T ỂN ỌN NG N Ứ T Ố ỦNG Ạ N
Ả N NG N ẤT NG N ỐNG NẤ G ỆN
TRÊN CÂY KEO N Ậ ĐƢ Ở XUÂN MAI
ƢƠNG Ỹ - HÀ N I
NGÀNH : CÔNG NGHỆ SINH HỌC
MÃ SỐ : 7420201
Giáo viên hướng dẫn : Th.s Nguyễn Thị Minh Hằng
Sinh viên thực hiện : Bùi Văn Tuấn
Mã sinh viên : 1453071774
Lớp : K59B – CNSH
Khóa học : 2014 - 2018
Hà Nội, 2018
LỜI CẢ ƠN
Trong quá trình thực hiện khóa luận tốt nghiệp, tôi đã nhận đƣợc rất
nhiều sự động viên, khích lệ cũng với sự hƣớng dẫn nhiệt tình và chu đáo của
các cô, chú, anh chị và cán bộ phòng thí nghiệm Bộ môn Công nghệ Vi sinh
Hóa sinh, thuộc Viện Công nghệ sinh học m nghiệp Trƣờng Đại học Lâm
nghiệp Việt Nam.
Nhân dịp này tôi xin bày tỏ lòng biết ơn s u sắc tới Th.s. Nguyễn Thị
Minh Hằng – GV Viện Công nghệ sinh họcLâm nghiệp Trƣờng Đại học Lâm
nghiệp Việt Nam đã tận tình chỉ bảo hƣớng dẫn giúp đỡ tôi hoàn thành báo
cáo Luận văn tốt nghiệp.
Nhóm tôi cũng ch n thành cảm ơn tập thể cán bộ, công nhân viên Viện
Công nghệ sinh học Lâm nghiệp Trƣờng Đại học Lâm Nghiệp Việt Nam đã
quan tâm và tạo điều kiện thuận lợi để tôi có thể hoàn thành báo cáo một cách
tốt nhất.
Cuối cùng cả nhóm xin chân thành cảm ơn gia đình và bạn bè đã tạo
điều kiện động viên giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện.
Hà Nội, ngày 03 tháng 05 năm 2018
Sinh viên thực hiện
ùi ăn Tuấn
MỤC LỤC
LỜI CẢM ƠN
MỤC LỤC
NH MỤ HIỆU H VI T TẮT
DANH MỤC CÁC BẢNG
DANH MỤC CÁC HÌNH
ĐẶT VẤN ĐỀ................................................................................................................ 1
HƢỢNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU ..................................................................... 3
1.1. Tổng quan về cây keo............................................................................................. 3
1.1.1 Tình hình trồng keo lai tại Việt Nam .................................................................. 3
1.1.2. Các bệnh do nấm hại gây ra trên cây keo lai..................................................... 3
1.2. Giới thiệu về xạ khuẩn ........................................................................................ 5
1.2.1. Vị trí phân loại và sự phân bố xạ khuẩn trong tự nhiên ............................... 5
1.2.2. Đặc điểm sinh học của xạ khuẩn .................................................................... 7
1.2.3. Đặc điểm sinh lý, sinh hóa ............................................................................ 10
1.3. Phƣơng pháp ph n loại xạ khuẩn ........................................................................ 11
1.3.1. Phân loại theo phƣơng pháp truyền thống ....................................................... 11
1.3.2. Phân loại theo phƣơng pháp hiện đại ............................................................... 13
1.4. Đại cƣơng về chất kháng sinh.............................................................................. 13
1.4.1. Chất kháng sinh (Antibiotic) ........................................................................... 13
1.4.2. Lịch sử nghiên cứu chất kháng sinh ............................................................... 14
1.4.3. Sự hình thành chất kháng sinh ở xạ khuẩn ..................................................... 15
1.4.4. Các chất kháng sinh có nguồn gốc từ xạ khuẩn............................................. 16
1.5. Ứng dụng của chất kháng sinh ............................................................................ 17
1.5.1. Ứng dụng trong y học ....................................................................................... 17
1.5.2. Ứng dụng trong bảo vệ thực vật và chăn nuôi thú y ...................................... 18
1.6. Khả năng tổng hợp enzyme của vi sinh vật ........................................................ 20
1.6.1. Ƣu thế của vi sinh vật để sinh tổng hợp enzyme ............................................ 20
1.6.2. Tuyển chọn các chủng sinh enzyme cao từ tự nhiên .................................... 21
1.6.3. Một số enzyme phổ biến có nguồn gốc từ vi sinh vật .................................. 22
hƣơng 2 NGUYÊN IỆU - MỤC TIÊU – NỘI UNG PHƢƠNG PH P
NGHIÊN CỨU ............................................................................................................. 23
2.1. Nguyên liệu ........................................................................................................... 23
2.1.1. Mấu đất ............................................................................................................... 23
2.1.2. Đối tƣợng nghiên cứu ........................................................................................ 23
2.1.3. Dụng cụ, thiết bị và hóa chất ............................................................................ 23
2.2. Mục tiêu nghiên cứu ............................................................................................. 24
2.3. Nội dung nghiên cứu ............................................................................................ 24
2.4. Phƣơng pháp nghiên cứu ..................................................................................... 25
2.4.1. Phƣơng pháp ph n lập nấm bệnh ..................................................................... 25
2.4.2. Phƣơng pháp phân lập xạ khuẩn từ đất ........................................................... 25
2.4.3. Phƣơng pháp thuần khiết và bảo quản giống .................................................. 27
2.4.4. Phƣơng pháp xác định hoạt tính kháng sinh ................................................... 27
2.4.5. Phƣơng pháp lên men thu sinh khối tế bào xạ khuẩn ..................................... 28
2.4.6. Xác định hoạt tính enzyme của xạ khuẩn bằng phƣơng pháp khuếch tán trên
đĩa thạch ........................................................................................................................ 29
2.4.7. Phƣơng pháp xử lý số liệu ................................................................................ 29
hƣơng 3 T QUẢ VÀ THẢO LUẬN ................................................................. 30
3.1. Kết quả phân lập xạ khuẩn ................................................................................... 30
3.1.1. Phân lập xạ khuẩn .............................................................................................. 30
3.1.2. Phân bố của xạ khuẩn theo nhóm màu ............................................................ 31
3.1.3. thuần khiết và lƣu trữ giống XK phân lập đƣợc ............................................. 33
3.2. Phân lập, thuần khiết và lƣu trữ giống nấm gây bệnh trên cây keo lai ............ 33
3.2.1. Phân lập nấm gây bệnh ..................................................................................... 33
3.2.2. Thuần khiết và bảo quản chủng giống ............................................................. 34
3.3. Tuyển chọn các chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng sinh ................................ 35
3.3.1. Tuyển chọn sơ bộ ban đầu bằng phƣơng pháp thỏi thạch ............................. 35
3.3.2. Tuyển chọn các chủng XK có HTKS cao ....................................................... 37
3.5. Thử nghiệm hoạt tính enzyme ngoại bào của 2 chủng XK tuyển chọn .......... 41
3.5.1. Xác định hoạt tính của các loại enzyme ngoại bào ........................................ 41
3.6. Nghiên cứu đặc điểm hình thái 2 chủng xạ khuẩn có hoạt tính
enzyme cao ................................................................................................................ 42
3.6.1. Quan sát đặc điểm khuẩn lạc của 2 chủng XK tuyển chọn ........................... 42
3.6.2. Quan sát đặc điểm hình thái và cuống sinh bào tử của một số chủng xạ
khuẩn dƣới k nh hiển vi ............................................................................................... 43
K T LUẬN VÀ KI N NGHỊ .................................................................................... 45
TÀI LIỆU THAM KHẢO