BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƯỜNG ĐẠI HỌC KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ TP. HCM
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP
Đề tài :
NGHIÊN CỨU MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN
QUÁ TRÌNH TÁCH CHIẾT VÀ TINH SẠCH ENZYME
PROTEASE TỪ NỘI TẠNG CÁ BASA.
NGÀNH : CÔNG NGHỆ SINH HỌC
GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẪN : PGS.TS NGUYỄN TIẾN THẮNG
CN ĐỖ THỊ TUYẾN
SINH VIÊN THỰC HIỆN : TRẦN TÚ NHI
MSSV : 107111115 LỚP : 07DSH3
TP. HỒ CHÍ MINH, 2011
Đồ án tốt nghiệp GVHD: PGS.TS. Nguyễn Tiến Thắng
CN. Đỗ Thị Tuyến
SVTH : Trần Tú Nhi 1 MSSV : 107111115
MỞ ĐẦU
A. TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI :
Trong sản xuất và đời sống, các loại enzyme nói chung và protease nói riêng
được sử dụng ngày càng phổ biến. Chế phẩm protease được sản xuất chủ yếu nhờ vi
sinh vật, một số ít có nguồn gốc từ thực vật, mô động vật. Gần đây, do yêu cầu về
vệ sinh an toàn thực phẩm ngày càng nghiêm ngặt, chi phí cho kiểm tra chất lượng
ngày càng cao. Trong khi đó chế phẩm protease thu nhận từ mô động vật và thực
vật được coi là tuyệt đối an toàn nên ngày càng thu hút được sự quan tâm của các
phòng thí nghiệm cũng như các nhà sản xuất, cung ứng chế phẩm protease thương
mại. Nguồn nguyên liệu từ nội tạng động vật để thu chế phẩm protease ngày càng
khan hiếm và không kinh tế do nội tạng động vật thường được dùng làm thực phẩm
và dùng để ghép tạng cho những bệnh nhân đặc biệt. Protease trong cơ thể cá, đặc
biệt là ở cơ quan tiêu hóa đã được biết đến từ lâu nhưng lại chưa được nghiên cứu
đầy đủ và cũng chưa có công nghệ thu nhận, tinh chế protease từ nội tạng cá. Vì
vậy, những công trình nghiên cứu về protease nội tạng và phương pháp chiết rút
chúng đang được ráo riết tiến hành ở nhiều nước có nghề cá phát triển.
Việt Nam là một trong những quốc gia có nghề cá phát triển, với trên 200
loài cá kinh tế, sản lượng 1,5 triệu tấn/năm. Tuy sản lượng lớn nhưng phần được sử
dụng hữu ích từ cá chỉ chiếm khoảng gần 50%. Nghĩa là hàng năm có trên 700.000
tấn phế liệu, trong đó có trên 30.000 tấn nội tạng cá. Theo thói quen, nội tạng cá chỉ
được sử dụng làm bột cá chăn nuôi, một phần được chế biến nước mắm, phần lớn bị
thải bỏ vào môi trường vừa lãng phí vừa là nguồn gây ô nhiễm môi trường.
Tình hình trên đặt ra yêu cầu cấp bách cho các nhà khoa học là sử dụng hợp
lý và hiệu quả lượng phế liệu cá rất lớn do các nhà máy chế biến cá tạo ra hàng
ngày để sản xuất ra những sản phẩm mới, có giá trị cao.
Đồ án tốt nghiệp GVHD: PGS.TS. Nguyễn Tiến Thắng
CN. Đỗ Thị Tuyến
SVTH : Trần Tú Nhi 2 MSSV : 107111115
Với mong muốn góp phần giải quyết yêu cầu trên, em thực hiện đề tài
“Nghiên cứu một số yếu tố ảnh hưởng đến quá trình tách chiết và tinh sạch
enzyme protease từ nội tạng cá Basa”.
B. MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU :
Mục đích chung là nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình tách chiết
và tinh sạch enzyme từ nội tạng cá, cũng như tính chất của enzyme này.
C. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU :
1. Xác định quy trình tách chiết và tinh sạch enzyme protease từ nội tạng cá :
- Xác định tỷ lệ dung môi chiết : mẫu.
- Xác định dung môi chiết enzyme protease.
- Xác định thời gian chiết enzyme protease.
- Xác định tỷ lệ (nồng độ) tác nhân kết tủa thu chế phẩm enzyme thô.
- Xác định tác nhân kết tủa thu chế phẩm enzyme thô.
- Tinh sạch chế phẩm enzyme thô bằng sắc ký lọc gel.
- Xác định trọng lượng phân tử bằng phương pháp điện di SDS – PAGE.
2. Khảo sát một số tính chất của enzyme protease nội tạng cá :
- Khảo sát sự biến đổi hoạt tính enzyme protease theo nhiệt độ.
- Khảo sát độ bền nhiệt của enzyme protease.
- Khảo sát sự biến đổi hoạt tính enzyme protease theo pH.
- Khảo sát sự biến đổi hoạt tính enzyme protease theo nồng độ muối ăn.
- Khảo sát sự biến đổi hoạt tính enzyme protease khi có mặt một số ion kim
loại, chất đặc hiệu nhóm.
Đồ án tốt nghiệp GVHD: PGS.TS. Nguyễn Tiến Thắng
CN. Đỗ Thị Tuyến
SVTH : Trần Tú Nhi 3 MSSV : 107111115
D. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU :
1. Phương pháp tách chiết, thu nhận và tinh sạch enzyme protease :
- Chiết rút thu dịch chiết.
- Thu nhận chế phẩm enzyme protease.
- Tinh sạch enzyme protease bằng sắc ký lọc gel.
- Phân tách enzyme protease bằng điện di trên gel polyacrylamide.
2. Các phương pháp phân tích :
- Xây dựng đường chuẩn albumin.
- Xác định hàm lượng protein theo phương pháp Bradford.
- Xây dựng đường chuẩn tyrosine.
- Xác định hoạt tính protease theo phương pháp Amano.
E. KẾT CẤU ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP :
Đồ án tốt nghiệp gồm :
- Chương 1 : Tổng quan tài liệu
- Chương 2 : Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
- Chương 3 : Kết quả và thảo luận
- Chương 4 : Kết luận và đề nghị
Đồ án tốt nghiệp GVHD: PGS.TS. Nguyễn Tiến Thắng
CN. Đỗ Thị Tuyến
SVTH : Trần Tú Nhi 4 MSSV : 107111115
CHƯƠNG I
TỔNG QUAN TÀI LIỆU