BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM
BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
***000***
KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP
XÁC ĐỊNH QUY TRÌNH LY TRÍCH DNA
TỪ LÔNG HEO
Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC
Niên khóa: 2003 – 2007
Sinh viên thực hiện: NGUYỄN THỊ NHA TRANG
Thành phố Hồ Chí Minh
Tháng 9/2007
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM
BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
***000***
XÁC ĐỊNH QUY TRÌNH LY TRÍCH DNA
TỪ LÔNG HEO
Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện:
PGS. TS. TRẦN THỊ DÂN NGUYỄN THỊ NHA TRANG
KS. NGUYỄN VĂN ÚT
Thành phố Hồ Chí Minh
Tháng 9/2007
iii
LỜI CẢM ƠN
Kính dâng Bố và Mẹ, ngƣời đã sinh thành, dạy dỗ và luôn
động viên con để có đƣợc kết quả hôm nay.
Cảm ơn Anh hai đã hỗ trợ và động viên em trong suốt quá
trình học tập.
Cảm ơn gia đình thân yêu của tôi!
iv
LỜI CẢM ƠN
Đặc biệt xin chân thành cảm ơn:
* PGS. TS. Trần Thị Dân, KS. Nguyễn Văn Út đã hƣớng dẫn tận tình cho
em trong suốt quá trình thực tập và giúp em hoàn thành luận văn tốt nghiệp.
Xin chân thành cảm ơn:
* Ban giám hiệu trƣờng Đại Học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh, Bộ Môn
Công Nghệ Sinh Học cùng Quý thầy cô đã tạo điều kiện tốt đẹp cũng nhƣ truyền đạt
kiến thức trong suốt quá trình học tập tại trƣờng.
* Ban giám đốc cùng tập thể cán bộ nhân viên Trung Tâm Phân Tích Thí
Nghiệm trƣờng Đại Học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh đã tạo điều kiện thuận lợi trong
suốt quá trình thực tập tốt nghiệp.
* Xin cảm ơn KS. Lê Thị Thu Hà cùng các anh chị trong phòng Công Nghệ
Sinh Học - Viện Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp miền Nam đã tận tình chỉ bảo và
giúp đỡ trong thời gian làm quen với thao tác phòng thí nghiệm và trong quá trình làm
đề tài.
* Tập thể cán bộ thú y và các cô chú tại lò mổ tập trung huyện Dĩ An – Bình
Dƣơng đã giúp đỡ tôi trong suốt quá trình lấy mẫu.
Sinh viên thực hiện
NGUYỄN THỊ NHA TRANG
v
TÓM TẮT KHÓA LUẬN
Đề tài “XÁC ĐỊNH QUY TRÌNH LY TRÍCH DNA TỪ LÔNG HEO” đƣợc
tiến hành từ ngày 10 – 03 – 2007 đến ngày 10 – 07 – 2007 tại Trung Tâm Phân Tích
Thí Nghiệm Trƣờng Đại Học Nông Lâm Tp. Hồ Chí Minh.
Hƣớng dẫn đề tài:
1. PGS. TS. Trần Thị Dân
2. KS. Nguyễn Văn Út
Việc ly trích DNA từ mẫu máu, mẫu da, mẫu cơ đã trở nên quen thuộc trong
các thí nghiệm sinh học phân tử trƣớc đây và hiện nay. Tuy nhiên, nhiều khi chúng ta
không thể có những loại mẫu đó, ví dụ trong khoa học hình sự, trong khảo cổ học, hay
khi nghiên cứu về những loài tiệt chủng hay loài quý hiếm, ta chỉ có đƣợc mẫu lông
hay tóc. Do đó, việc lấy mẫu lông hay tóc và ly trích DNA từ loại mẫu này trở nên rất
cần thiết trong những trƣờng hợp này.
Ngoài ra, việc thu thập mẫu lông dễ dàng hơn thu thập các loại mẫu khác (nhƣ
máu, da, cơ…) trên thú sống. Chúng ta có thể nhổ hoặc cắt một vài lông trên thú một
cách dễ dàng mà không phải giết mổ hay gây ra stress cho thú sống. Việc ly trích DNA
từ lông sẽ mở rộng ra cho ly trích DNA từ các cấu trúc tƣơng tự lông nhƣ móng, mỏ,
da, xƣơng…
Với mục đích tìm một quy trình tối ƣu cho ly trích DNA từ nhiều nguồn lông,
từ nhiều vị trí trên sợi lông và xác định sự xuất hiện của gen halothane, đề tài đƣợc
tiến hành trên lông heo. Kết quả ly trích đƣợc đánh giá dựa vào tỷ số OD của mẫu
DNA và hiệu suất thành công của PCR với đoạn mồi phát hiện gen halothane.
Kết quả đạt đƣợc nhƣ sau:
1. Sử dụng buffer ly trích chứa proteinase K ở các nồng độ 0,8 mg/ml, 1
mg/ml và 1,2 mg/ml đều cho chất lƣợng DNA tốt với tỷ số OD từ 1,75 – 1,84.
2. DNA đƣợc ly trích với DTT ở nồng độ 50 mM khá tinh sạch (OD = 1,65) và
thành công khi đƣợc dùng làm nguồn mẫu cho phản ứng PCR.