Khóa luận tốt nghiệp đại học ngành Kỹ thuật xét nghiệm y học: Ứng dụng kỹ thuật Realtime - PCR để phát hiện đột biến JAK2-V617F trong hội chứng tăng sinh tủy

Khóa luận tốt nghiệp đại học ngành Kỹ thuật xét nghiệm y học: Áp dụng kỹ thuật Realtime - PCR để phát hiện đột biến JAK2-V617F trong hội chứng tăng sinh tủy

Hội chứng tăng sinh tủy (HCTST) là một dạng rối loạn dị dòng của hệ huyết học, bao gồm các bệnh lý: bạch cầu kinh dòng tủy (BCKDT), đa hồng cầu (ĐHC), tăng tiểu cầu nguyên phát (TTCNP) và hội chứng xơ tủy (HCXT). Đột biến gen JAK2 là một đặc điểm di truyền học nổi bật của 3 phân típ bệnh này. Giá trị chẩn đoán của phân tích đột biến JAK2 trong HCTST hiện là rất tốt, đã được Tổ chức Y tế Thế giới xác nhận và thành lập trong phân loại các khối u ác tính huyết học. Phương pháp Allen-specific PCR (AS-PCR) đang là phương pháp thường quy được áp dụng tại Viện Huyết Học - Truyền Máu Trung Ương và một số phòng xét nghiệm tại Việt Nam. Tuy nhiên, AS-PCR có thời gian chạy xét nghiệm lâu, bao gồm nhiều bước, tiêu tốn nhiều trang thiết bị và hóa chất, ngoài ra còn có nguy cơ lây nhiễm chéo khi thực hiện các bước điện di sau PCR. Kỹ thuật Realtime – PCR (RT-PCR) là một trong những phương pháp hữu hiệu để phát hiện đột biến JAK2-V617F. Kỹ thuật RT-PCR có độ nhạy và độ đặc hiệu cao hơn nhiều so với PCR truyền thống. Đặc biệt với RT-PCR, phản ứng được thực hiện trong hệ thống kín, không cần thêm các thao tác phân tích kết quả sau phản ứng, do đó rút ngắn được thời gian thực hiện và giảm thiểu nguy cơ lây nhiễm. Mục tiêu của đề tài là: 1) Hoàn thiện được quy trình xét nghiệm đột biến JAK2-V617F bằng kỹ thuật Realtime-PCR; 2) Ứng dụng được quy trình xét nghiệm gen JAK2-V617F xác định đột biến gen ở bệnh nhân tăng sinh tủy mạn tính bằng kỹ thuật Realtime-PCR. Kết quả nghiên cứu cho thấy: 1) Quy trình xét nghiệm đột biến JAK2-V617F bằng kỹ thuật Realtime-PCR đã được hoàn thiện; 2) Quy trình xét nghiệm gen JAK2-V617F xác định đột biến gen ở bệnh nhân tăng sinh tủy mạn tính bằng kỹ thuật Realtime-PCR đã được ứng dụng. Kết luận: Kỹ thuật Realtime – PCR là một phương pháp hữu hiệu để phát hiện đột biến JAK2-V617F trong HCTST. Quy trình xét nghiệm đột biến JAK2-V617F bằng kỹ thuật Realtime-PCR đã được hoàn thiện và ứng dụng, rút ngắn thời gian thực hiện và giảm thiểu nguy cơ lây nhiễm.