BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƢỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP. HỒ CHÍ MINH
VIỆN KHOA HỌC ỨNG DỤNG HUTECH
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP
XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG INVITRO
CÂY CÚC LÁ NHỎ PICO (Chrysanthemum sp.)
Ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC
Chuyên ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC
Giảng viên hƣớng dẫn : TS. Hà Thị Loan
Sinh viên thực hiện : Huỳnh Thị Anh Đài
MSSV : 1411100170 Lớp : 14DSH01
TP. Hồ Chí Minh, 2018
LỜI CAM ĐOAN
Tôi xin cam đoan mọi số liệu, nội dung, quy trình trong đồ án toàn bộ là của
tôi đƣợc thực hiện dƣới sự hƣớng dẫn của TS. Hà Thị Loan. Toàn bộ đề tài đƣợc
thực hiện tại phòng thực nghiệm cây trồng Trung tâm Công nghệ Sinh học Thành
phố Hồ Chí Minh từ tháng 12/2017-7/2018. Tất cả những nội dung, quy trình, số
liệu trong đồ án chƣa đƣợc công bố trên tạp chí, hội thảo hay những diễn đàn khoa
học.
Đồ án đƣợc thực hiện có sự tham khảo, trích dẫn một số tài liệu và đảm bảo
đúng tác quyền theo chuẩn quốc tế APA. Trong trƣờng hợp nếu có thắc mắc về nội
dung, số liệu trong đồ án tôi sẵn sàng xuất trình mọi dữ liệu có liên quan đƣợc lƣu
trữ tại nơi tôi thực hiện đề tài.
TP. Hồ Chí Minh, ngày 29 tháng 07 năm 2018
Sinh viên thực hiện
Huỳnh Thị Anh Đài
LỜI CẢM ƠN
Em xin gửi lời cảm ơn đến Ban giám hiệu trƣờng Đại học Công Nghệ TP.
HCM, đặc biệt là Quý thầy cô trong Viện Khoa học Ứng dụng HUTECH. Em biết
rằng đề tài đƣợc thực hiện đã phản ánh phần nào kiến thức mà thầy cô đã biên soạn
và chỉ dạy cho em trong suốt 4 năm qua, những bài học, những kinh nghiệm mà
thầy cô giảng dạy đã giúp em rất nhiều. Trong suốt thời gian em làm đề tài, những
giá trị này đƣợc lặp lại một lần nữa, chính vì thế em đã cảm nhận rõ hơn về một hệ
thống kiến thức nền tảng.
Em xin gửi lời cảm ơn đến Ban lãnh đạo và cán bộ viên chức trong Trung tâm
Công nghệ Sinh học TP. Hồ Chí Minh đã tiếp nhận, tạo điều kiện để em có nơi thực
hiện đề tài. Và đặc biệt em muốn gửi lời tri ân sâu sắc đến TS. Hà Thị Loan, nơi cô
em hiểu thế nào là sự tận tâm hƣớng dẫn, nhƣ thế nào là nghiên cứu khoa học.
Ngoài ra em khám phá ra đƣợc những lý thuyết thông qua cách cô giúp em từng
bƣớc giải quyết khó khăn. Em nhận ra cô đã đồng hành cùng em nhƣ thế nào khi
phân công anh kĩ sƣ Trịnh Bá Uy thƣờng trực phòng thí nghiệm để hỗ trợ em.
Con xin gửi lời cảm ơn chân thành đến gia đình, mặc dù ba mẹ và các em đã
không trực tiếp giúp con trong việc làm đề tài, nhƣng bằng cách này hay cách khác
gia đình đã luôn động viên, lắng nghe con chia sẽ mỗi khi con gặp khó khăn, khích
lệ con cố gắng, giúp đỡ con cả về tài chính và tinh thần, con xin mãi ghi khắc.
Luận văn là thành quả khoa học đầu tiên của em, nên chắc chắc có những
thiếu sót về nội dung. Rất mong đƣợc quý thầy cô và những nhà khoa học nhận xét,
đóng góp ý kiến để em đƣợc học hỏi, rèn luyện và trƣởng thành hơn.
Xin chân thành cảm ơn Quý thầy cô và toàn thể ân nhân. Trân trọng.
i
MỤC LỤC
MỤC LỤC ............................................................................................................................. i
DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT .................................................................................... iii
DANH MỤC BẢNG ............................................................................................................ iv
DANH MỤC BIỂU ĐỒ ....................................................................................................... v
DANH MỤC HÌNH ẢNH ................................................................................................... vi
LỜI MỞ ĐẦU ....................................................................................................................... 1
CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU ............................................................................ 4
1.1. Sơ lƣợc về nuôi cấy mô tế bào thực vật ............................................................ 4
1.1.1. Khái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật .............................................................. 4
1.1.2. Lịch sử nuôi cấy mô tế bào thực vật .................................................................. 4
1.1.3. Hiện trạng nuôi cấy mô ở Việt Nam .................................................................. 5
1.1.4. Cơ sở khoa học của nuôi cấy mô tế bào thực vật .............................................. 5
1.1.4.1. Tính toàn năng của tế bào ................................................................................... 5
1.1.4.2. Tính phân hóa và phản phân hóa của tế bào ....................................................... 6
1.1.5. Các giai đoạn nuôi cấy mô ................................................................................. 7
1.1.5.1. Chuẩn bị cây mẹ, lựa chọn mẫu cấy: ................................................................... 7
1.1.5.2. Khử trùng mẫu cấy .............................................................................................. 7
1.1.5.3. Tạo thể nhân giống in vitro và tăng sinh mô ....................................................... 7
1.1.5.4. Ra rễ in vitro và tái sinh cây hoàn chỉnh ............................................................. 7
1.1.5.5. Chuyển cây con ra vƣờn ƣơm .............................................................................. 8
1.1.5.6. Ra rễ ex vitro ........................................................................................................ 8
1.1.6. Các kỹ thuật nhân giống in vitro ........................................................................ 8
1.1.6.1. Nuôi cấy đỉnh sinh trƣởng và chồi bất định ........................................................ 8
1.1.6.2. Nuôi cấy tế bào đơn ............................................................................................. 9
1.1.6.3. Nuôi cấy hạt phấn đơn bội ................................................................................... 9
1.1.7. Các yếu tố ảnh hưởng đến nuôi cấy mô .......................................................... 10
1.1.8. Thành phần môi trƣờng dinh dƣỡng ............................................................. 11
1.1.9. Tổng quan về ánh sáng .................................................................................... 13
1.2. Tổng quan về cây cúc ....................................................................................... 17
1.2.1. Phân loại khoa học ........................................................................................... 17
1.2.2. Nguồn gốc, lịch sử và phân bố ......................................................................... 17
1.2.3. Đặc điểm thực vật học ...................................................................................... 19
1.2.4. Tình hình nhân giống cúc trên thế giới và Việt Nam ..................................... 21
CHƢƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .................................. 23
ii
2.1. Địa điểm và thời gian tiến hành đồ án ........................................................... 23
2.1.1. Địa điểm ............................................................................................................ 23
2.1.2. Thời gian ........................................................................................................... 23
2.2. Vật liệu .............................................................................................................. 23
2.2.1. Đối tượng và vật liệu nghiên cứu ..................................................................... 23
2.2.2. Trang thiết bị ..................................................................................................... 23
2.2.3. Môi trường nuôi cấy ......................................................................................... 24
2.2.4. Điều kiện thí nghiệm ........................................................................................ 24
2.3. Phƣơng pháp .................................................................................................... 25
2.3.1. Pha môi trường ................................................................................................. 25
2.3.2. Hấp khử trùng ................................................................................................... 25
2.4. Bố trí thí nghiệm .............................................................................................. 25
2.4.1. Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng của thời gian khử trùng Javel 5% đến sự
vô trùng mẫu thân cúc Pico. ............................................................................................... 26
2.4.2. Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA đến sự nhân chồi mẫu cúc
Pico 27
2.4.3. Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ nước dừa đến khả năng nhân
chồi mẫu cúc ....................................................................................................................... 28
2.4.4. Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng các loại đèn chiếu sáng đến sự nhân
nhanh chồi mẫu cúc ........................................................................................................... 29
2.4.5. Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ NAA đến sự ra rễ của mẫu cúc
30
2.5. Thống kê và xử lý số liệu ................................................................................. 31
CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .................................................................... 32
3.1. Ảnh hƣởng của thời gian khử trùng Javel 5% đến sự vô trùng mẫu thân
cây cúc Pico. ........................................................................................................................ 32
3.2. Ảnh hƣởng của BA đến sự nhân chồi mẫu cúc Pico. .................................... 34
3.3. Ảnh hƣởng của nƣớc dừa đến sự nhân chồi mẫu cúc Pico. ......................... 37
3.4. Ảnh hƣởng của các loại đèn chiếu sáng lên sự nhân nhanh chồi cúc Pico. 40
3.5. Ảnh hƣởng của NAA đến sự ra rễ mẫu cúc Pico. ......................................... 43
CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ................................................................... 47
4.1. Kết luận ............................................................................................................. 47
4.2. Kiến nghị ........................................................................................................... 47
TÀI LIỆU THAM KHẢO ................................................................................................. 48