NHI M S C TH C A NG I VÀ Ễ Ắ Ể Ủ ƯỜ
NHI M S C TH C A NG I VÀ Ễ Ắ Ể Ủ ƯỜ
B NH H C NHI M S C THỆ Ọ Ễ Ắ Ể
B NH H C NHI M S C THỆ Ọ Ễ Ắ Ể
1. Ph ng pháp xét nghi m NST c a ng iươ ệ ủ ườ
1. Ph ng pháp xét nghi m NST c a ng iươ ệ ủ ườ
1.1 Nguyên t c chungắ
1.1 Nguyên t c chungắ
- Có 2 ph ng phápươ
- Có 2 ph ng phápươ
+ P.P tr c ti p: làm tiêu b n ngay ho c nuôi c y ng n ự ế ả ặ ấ ắ
+ P.P tr c ti p: làm tiêu b n ngay ho c nuôi c y ng n ự ế ả ặ ấ ắ
h n (24h): t y x ng, bào thai, tua rau...ạ ủ ươ
h n (24h): t y x ng, bào thai, tua rau...ạ ủ ươ
+ P.P gián ti p: nuôi c y dài h n (48 h or 72 h): mô t ế ấ ạ ế
+ P.P gián ti p: nuôi c y dài h n (48 h or 72 h): mô t ế ấ ạ ế
bào máu, t bào d ch i, mô da...ế ị ố
bào máu, t bào d ch i, mô da...ế ị ố
-Làm d ng phân bào kỳ gi a: d.d Colchicin ho c ừ ở ữ ặ
Làm d ng phân bào kỳ gi a: d.d Colchicin ho c ừ ở ữ ặ
colcemid
colcemid
-Tách r i NST: d.d KCl 0.075Mờ
Tách r i NST: d.d KCl 0.075Mờ
-Đ nh hình t bào: d.d Carnoy (3 methanol: 1a.acetic)ị ế
Đ nh hình t bào: d.d Carnoy (3 methanol: 1a.acetic)ị ế
-Dàn t bào lên phi n kính.ế ế
Dàn t bào lên phi n kính.ế ế
-Nhu m tiêu b n b ng Giemsa ho c x lý tiêu b n ộ ả ằ ặ ử ả
Nhu m tiêu b n b ng Giemsa ho c x lý tiêu b n ộ ả ằ ặ ử ả
b ng các ph ng pháp nhu m băngằ ươ ộ
b ng các ph ng pháp nhu m băngằ ươ ộ
1. Ph ng pháp xét nghi m NST c a ng iươ ệ ủ ườ
1. Ph ng pháp xét nghi m NST c a ng iươ ệ ủ ườ
1.2 Ph ng pháp làm tiêu b n NST t t bào b ch c u ươ ả ừ ế ạ ầ
1.2 Ph ng pháp làm tiêu b n NST t t bào b ch c u ươ ả ừ ế ạ ầ
Lympho máu ngo i viạ
Lympho máu ngo i viạ
-M
Mẫ
ẫu v t: Máu (2ml + Heparin)ậ
u v t: Máu (2ml + Heparin)ậ
Máu toàn ph n ho c tách lympho bào kh i h ng c u ầ ặ ỏ ồ ầ
Máu toàn ph n ho c tách lympho bào kh i h ng c u ầ ặ ỏ ồ ầ
-Nuôi c y t bào:ấ ế
Nuôi c y t bào:ấ ế
Tuýp nuôi c y g m: ấ ồ
Tuýp nuôi c y g m: ấ ồ
6ml môi tr ng nuôi c y (F.10 ho c F.12...)ườ ấ ặ
6ml môi tr ng nuôi c y (F.10 ho c F.12...)ườ ấ ặ
2ml huy t thanh bê (ho c AB)ế ặ
2ml huy t thanh bê (ho c AB)ế ặ
1-2 gi t P.H.A (Phytohemaglutinin)ọ
1-2 gi t P.H.A (Phytohemaglutinin)ọ
5-6 gi t máu toàn ph n.ọ ầ
5-6 gi t máu toàn ph n.ọ ầ
Đ t tuýp nuôi c y trong t m 37ặ ấ ủ ấ
Đ t tuýp nuôi c y trong t m 37ặ ấ ủ ấ 0
0C th i gian 48h or 72hờ
C th i gian 48h or 72hờ
B sung dung d ch Colchicin ho c Colcemid vào tuýp ổ ị ặ
B sung dung d ch Colchicin ho c Colcemid vào tuýp ổ ị ặ
nuôi c y tr c khi thu ho ch t bào 2hấ ướ ạ ế
nuôi c y tr c khi thu ho ch t bào 2hấ ướ ạ ế
Các b c thu ho ch t bào:ướ ạ ế
•Tuýp nuôi c y t bào đ c ly tâm 1000 ấ ế ượ
Tuýp nuôi c y t bào đ c ly tâm 1000 ấ ế ượ
vòng/1phút/10phút
vòng/1phút/10phút
•Lo i b d ch n i phía trên đ l i ph n ạ ỏ ị ổ ở ể ạ ầ
Lo i b d ch n i phía trên đ l i ph n ạ ỏ ị ổ ở ể ạ ầ
c n t bào. Cho d.d KCl 0,075M và đ trong ặ ế ể
c n t bào. Cho d.d KCl 0,075M và đ trong ặ ế ể
t m 37ủ ấ
t m 37ủ ấ º
ºC/30-45phút.
C/30-45phút.
•Ly tâm, lo i b d ch n i phía trên, đ l i ạ ỏ ị ổ ở ể ạ
Ly tâm, lo i b d ch n i phía trên, đ l i ạ ỏ ị ổ ở ể ạ
ph n c n t bào. Cho d.d carnoy (l p l i 3 ầ ặ ế ặ ạ
ph n c n t bào. Cho d.d carnoy (l p l i 3 ầ ặ ế ặ ạ
l n)ầ
l n)ầ
•Ly tâm, lo i b d ch phía trên đ l i ph n ạ ỏ ị ể ạ ầ
Ly tâm, lo i b d ch phía trên đ l i ph n ạ ỏ ị ể ạ ầ
c n t bào, tr n đ u và dàn lên tiêu b nặ ế ộ ề ả
c n t bào, tr n đ u và dàn lên tiêu b nặ ế ộ ề ả
•Nhu m tiêu b n: giemsa ho c ph ng pháp ộ ả ặ ươ
Nhu m tiêu b n: giemsa ho c ph ng pháp ộ ả ặ ươ
nhu m băng.ộ
nhu m băng.ộ
1. Ph ng pháp xét nghi m NST c a ng iươ ệ ủ ườ
1. Ph ng pháp xét nghi m NST c a ng iươ ệ ủ ườ
1.3 Ph ng pháp phân tích tiêu b n NST ng iươ ả ườ
1.3 Ph ng pháp phân tích tiêu b n NST ng iươ ả ườ
-Quan sát tiêu b n NST d i kính hi n vi khoa ả ướ ể
Quan sát tiêu b n NST d i kính hi n vi khoa ả ướ ể
h c đ phóng đ i 1000 l nọ ở ộ ạ ầ
h c đ phóng đ i 1000 l nọ ở ộ ạ ầ
-M i m u xét nghi m đánh giá ít nh t 30 c m ỗ ẫ ệ ấ ụ
M i m u xét nghi m đánh giá ít nh t 30 c m ỗ ẫ ệ ấ ụ
kỳ gi a, có th 100 c m:ữ ể ụ
kỳ gi a, có th 100 c m:ữ ể ụ
-Đ m s l ng NST và phân tích các r i lo n ế ố ượ ố ạ
Đ m s l ng NST và phân tích các r i lo n ế ố ượ ố ạ
v c u trúc NSTề ấ
v c u trúc NSTề ấ
-L p karyotypậ
L p karyotypậ
-K t lu n v b NST c a ng i đ c xét ế ậ ề ộ ủ ườ ượ
K t lu n v b NST c a ng i đ c xét ế ậ ề ộ ủ ườ ượ
nghi mệ
nghi mệ