ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI
TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC
NGUYỄN TÙNG LÂM
NGHIÊN CỨU SÀNG LỌC VẬT LIỆU CỐ ĐỊNH ENZYME ĐỂ ỔN
ĐỊNH HOẠT TÍNH CỦA ENZYME NATTOKINASE
KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC
HÀ NỘI – 2021
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI
TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC
NGUYỄN TÙNG LÂM
NGHIÊN CỨU SÀNG LỌC VẬT LIỆU CỐ ĐỊNH ENZYME ĐỂ ỔN
ĐỊNH HOẠT TÍNH CỦA ENZYME NATTOKINASE
KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC
Khóa:
QH - 2016.Y
Người hướng dẫn:
1. TS. Nguyễn Sỹ Lê Thanh
Viện Công nghệ Sinh học – Viện Hàn lâm Khoa học
và Công nghệ Việt Nam
2. TS. Vũ Thị Thơm
Trường Đại học Y dược – Đại học Quốc Gia Hà Nội
HÀ NỘI – 2021
LỜI CẢM ƠN
Lời đầu tiên, em xin được bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới
Thầy giáo TS. Nguyễn Sỹ Lê Thanh – phòng Công nghệ sinh học Enzyme –
Viện Công nghệ sinh học – Viên Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam
và Cô giáo TS. Vũ Thị Thơm – Trưởng bộ môn Y dược học cơ sở – Trường
Đại học Y dược –ĐHQGHN là những người đã dành nhiều thời gian, tâm
huyết, tận tình hướng dẫn, quan tâm, giúp đỡ, sửa luận văn và tạo mọi điều
kiện hóa chất, thiết bị trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu khoa học.
Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới TS. Nguyễn Thị Hiền Trang cùng
toàn thể các cán bộ trong Phòng Công nghệ sinh học Enzyme, Viện Công
nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam đã chỉ bảo,
giúp đỡ tận tình cho em trong suốt quá trình em thực hiện đề tài.
Cuối cùng, em xin bày bày tỏ lòng biết ơn đến gia đình thân yêu đã
luôn khích lệ và ủng hộ em về mặt vật chất lẫn tinh thần để em có thể hoàn
thành được luận văn này.
DANH MỤC BẢNG
Bảng 1.1. Vật liệu polymer tự nhiên ................................................................. 9
Bảng 2.4. Cố định enzyme Nattokinase (NK) bằng Microcrystalline cellulose
(MCC) ............................................................................................................. 23
Bảng 3.4. Hàm lượng protein tổng số và hoạt tính thủy phân casein của mẫu
enzyme tủa bằng cồn và muối ammonium sulfate .......................................... 24
Bảng 3.7. Tóm tắt quá trình tinh sạch enzyme Nattokinase từ chủng B. subtilis27
Bảng 3.19. Hiệu suất gắn của enzyme Nattokinase với các chất mang .......... 33
DANH MỤC HÌNH
Hình 1.1. Cấu trúc hóa học của Nattokinase .................................................... 4
Hình 1.2. Cơ chế tác dụng của Nattokinase ..................................................... 5
Hình 2.1. Sơ đồ quy trình nghiên cứu tìm vật liệu cố định enzyme NK ........ 14
Hình 2.2. Đường chuẩn Tyrosine ................................................................... 21
Hình 2.3. Đường chuẩn Bradford ................................................................... 22
Hình 3.1. (A) Điện di SDS-PAGE mẫu enzyme sau khi kết tủa (M: marker, 1:
tủa ammonium sulfate nồng độ 30 %, 2: tủa ammonium sulfate nồng độ 70 %,
3: tủa cồn, 4: dịch enzyme trước tủa). (B) Hoạt tính thủy phân fibrinogen của
enzyme Nattokinase ........................................................................................ 25
Hình 3.2. Sắc kí đồ các phân đoạn enzyme Nattokinase sau khi qua cột
DEAE-Sepharose ............................................................................................ 26
Hình 3.3. Điện di Nattokinase sau khi qua cột DEAE ................................... 27
Hình 3.4. Điện di γ-PGA ................................................................................ 28
Hình 3.5. Hình ảnh kính hiển vi của Na-γ-PGA ở độ phóng đại 100X ......... 28
Hình 3.6. γ-PGA ở dạng natri ........................................................................ 29
Hình 3.7. Độ bền của NK và NK- Na-γ-PGA với các pH khác nhau sau 1h
(A) và 24h (B) ................................................................................................. 30
Hình 3.8. Độ bền của NK và NK-Na-γ-PGA với các nhiệt độ khác nhau Sau
1h ủ (A), Sau 24 h ủ (B) .................................................................................. 32