Tài liệu "Kỹ thuật xét nghiệm hóa mô miễn dịch, nhuộm SISH (Ventana)" nhằm cung cấp cho học viên những nội dung về định nghĩa, chỉ định, các bước chuẩn bị, các bước tiến hành, đọc kết quả kỹ thuật xét nghiệm hóa mô miễn dịch, nhuộm SISH (Ventana). Mời các bạn cùng tham khảo!
AMBIENT/
Chủ đề:
Nội dung Text: Kỹ thuật xét nghiệm hóa mô miễn dịch, nhuộm SISH (Ventana)
- KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM H A M MIỄN DỊCH
I. ĐẠI CƢƠNG
Hóa mô miễn dịch là một xét nghiệm để tìm sự hiện diện của các kháng nguyên
có mặt trong tế bào và mô, đượ làm trên các lát cắt mô nhằm xác định nguồn gốc và
bản chất của tế bào và mô giúp cho chẩn đoán, điều trị và tiên lượng bệnh. Vì kháng
nguyên không thể quan sát hình thái được nên người ta phải xác định vị trí của nó
trên tế bào bằng các phản ứng miễn dịch và hóa học.
II. CHỈ ĐỊNH
- Xác định nguồn gốc của những u không biệt hóa, không xác định được nguồn gốc
bằng mô học thường quy;
- Xác định sự có mặt của một số kháng nguyên liên quan đến điều trị và tiên lượng
bệnh, đặc biệt trong ung thư (Xác định thụ thể estrogen, progesteron trên tế bào
ung thư tuyến vú, ung thư nội mạc tử cung, ung thư buồng trứng. Xác định tế bào
chế tiết TSH, ACTH, HCG, hGH, Lactabumin ... trong các u thuộc hệ nội tiết);
- Chẩn đoán phân biệt u lành và ung thư (ít giá trị).
III. CHUẨN BỊ
1. Ngƣời thực hiện
- Bác sĩ chuyên khoa giải phẫu bệnh có kinh nghiệm và hiểu biết sâu về hóa mô
miễn dịch.
- Kỹ thuật viên giải phẫu bệnh.
2. Phƣơng tiện
- Dụng cụ, máy móc: Micropipete (từ 1-1000), cân điện tử, nồi áp suất chuyên
dụng, lò vi sóng, máy đo pH, hộp ủ tiêu bản, tủ lạnh, tủ ấm, máy cắt tiêu bản, bếp
điện, máy nhuộm, lam kính, lamen).
- Hóa chất: Silane, kháng thể, các kít phát hiện, Diamino-Bezidin, Hematoxylin,
nước cất, cồn 900, cồn tuyệt đối, dung dịch Citrate-Buffer PH6, dung dịch Tris-
Buffer-Saline (TBS) pH 7,6, dung dịch pha kháng thể, dung dịch H202.
IV. CÁC BƢỚC TIẾN HÀNH
- Chuẩn bị tiêu bản: Bệnh phẩm cắt mỏng 3-4 micromet đặt lên lam kính đã được sử
lý nhúng với dung dịch silane. Tiêu bản phải được đặt trong tủ ấm 60 0C ít nhất 1
giờ.
- Tiêu bản sau khi tẩy paraffin được nhúng vào nước cất 2 lần x 5 phút.
630
- - Khử peroxidase nội sinh bằng dung dịch H2O2 3% x 5 phút.
- Rửa tiêu bản bằng dung dịch Tris- Buffer- Saline (TBS) pH 7,6 x 5 phút
- Khử các protein không đặc hiệu bằng Bovine- Serum- Albumine x 5 phút
- Rửa tiêu bản bằng dung dịch TBS 2 lần x 5 phút, không để khô tiêu bản
- Phủ kháng thể kháng kháng nguyên đầu x 60 phút
- Rửa TBS 2 lần x 5 phút
- Phủ Biotinylated Secondary Antibody x 30 phút
- Rửa TBS 2 lần x 5 phút
- Phủ phức hợp Avidin-Biotin (ABC) x 30 phút
- Rửa TBS 2 lần x 5 phút
- Phủ dung dịch Diamino Benzidine (DAB) x 10 phút
- Rửa nước chảy x 5 phút
- Nhuộm Hematoxyline 5 giây
- Khử nước, làm sạch tiêu bản, gắn lamen.
IV. ĐỌC KẾT QUẢ
Đọc kết quả dưới kính hiển vi quang học. Dựa vào vị trí kháng nguyên trong
mô để từ đó xác định chẩn đoán. Phản ứng dương tính khi màng bào tương hoặc
nhân, hoặc bào tương hoặc cả bào tương và màng bắt màu nâu đỏ.
631
- NHUỘM SISH (VENTANA)
I. ĐẠI CƢƠNG
Xét nghiệm SISH gọi là phương pháp lai tại chỗ gắn bạc nhằm xác định tình trạng
khuyếch đại gen Her-2/neu.
II. CHỈ ĐỊNH
Theo chỉ định của Bác sĩ lâm sàng: chủ yếu các định tình trạng khuyếch đại gen
trong ung thư vú, ung thư dạ dày và một số loại ung thư khác để điều trị đích.
III. H A CHẤT VÀ TRANG THIẾT BỊ
- Bộ kít Her-2 và CEP17.
- Lam kính, lamen, dung dịch rửa.
- Kính hiển vi quang học.
IV. CÁC BƢỚC TIẾN HÀNH
- Mẫu mô được cắt mỏng 4 micromet, gắn lên tiêu bản đã được tráng silan.
- Cài đặt chương trình máy
- Dán nhãn và đặt lam vào máy
- Loại paraffin bằng EZprep
- Bộ lộ kháng nguyên bằng dung dịch CC2: 30 phút ở 900C
- Xử trí protease: 16 phút
- Ủ lam với 100 àl probe Her-2 và CEP17 trong 4 phút
- Biến tính DNA trong 20 phút ở 800C
- Lai DNA tyrong 6 giờ ở 370C
- Rửa bằng nước bạc trong 8 phút ở 720C
- Ủ trong dung dịch SIL ISH DNP CHRC và ủ 4 phút
- Ủ 24 phút với RED ISH DIG FR
- Ủ 8 phút với RED ISH DIG FR
- Nhuộm hematoxilin II trong 4 phút
- Nhuộm với dung dịch Bluing trong 4 phút
- Láy lamen ra khỏi máy và làm sạch lam
- Làm khô lam trong 1 giờ ở 600C
632
- - Ngâm lam trong xylen 3 phút x 2 lần
- Gắn lamen và đọc kết quả.
V. ĐỌC KẾT QUẢ
Đếm tín hiệu trong nhân tế bào ung thư vùng xâm nhập.
- T lệ Her-2/CEP17 < 1,8: không khuyếch đại
- T lệ Her-2/CEP17 ≥ 2,2: có khuyếch đại
- T lệ 1,8 ≤ Her-2/CEP17 < 2,2: khuyếch đại giáp biên cần khảo sát lại
- T lệ 2,5 < Her-2/CEP17 ≤ 5: khuyếch đại thấp
- T lệ Her-2/CEP17 > 5: khuyếch đại cao
633
Thêm vào BST
Báo xấu
Download
Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ
