Nghiên cứu sản xuất kháng thể thỏ kháng Ovalbumin phát hiện Ovalbumin trong Vacxin cúm A/H5N1



 tài "“ NGHIÊN CU SN XUT KHÁNG TH TH

KHÁNG OVALBUMIN DÙNG PHÁT HIN

OVALBUMIN TRONG VACXIN CÚM A/H5N1”

LI CM ƠN

T lòng bit n sâu sc ca mình, em xin dành trang u tiên ca khóa lun

 bày t lòng cm n chân thành n:

Ban Giám hiu trưng i hc Nha Trang, Phòng ào to, Ban ch nhim

khoa Ch Bin cùng toàn th quý thy cô ã ging dy tn tình và giúp  em trong

quá trình hc tp ti trưng.

PGS.TS. Lê Vn Hip - Vin trưng Vin Vc xin và Sinh phm Y t Nha

Trang, ngưi thy ã luôn quan tâm hưng dn, to iu kin thun li cho em

trong quá trình th c tp ti Vin.

CN. Nguy!n Th" Minh Hin - trưng phòng, TS. Nguy!n Th" Lan Phưng -

phó phòng Kim "nh, CN. Trn Ngc Nhn, TS. # Minh S$ ã tr c tip hưng

dn, ch% bo nhit tình, chu áo và luôn to mi iu kin thun li nh&t giúp em

hoàn thành lun vn này.

Qua ây em xin bày t lòng bit n sâu sc n toàn th các cô, các anh ch"

phòng Kim "nh, phòng Nghiên c'u và phát trin ã nhit tình giúp , góp ý và

(ng viên em trong thi gian th c tp ti phòng.

Em xin chân thành cm n Ban Giám )c Vin Vc xin Nha Trang ã to

iu kin thun li cho em th c tp ti Vin.

Xin bày t lòng bit n n gia ình, t&t c bn bè, anh ch" và các em ã

quan tâm, giúp , chia s*, (ng viên em trong su)t thi gian qua.

Nha Trang, tháng 11 nm 2007

Sinh viên

ào Th" Thanh Vân.

CH VIT TT TRONG KHÓA LUN















APS : Amonium persulfat

CV : H s) bin thiên

D : Dưc in

DVN : Dưc in Vit Nam

ELISA : Enzyme - linked immuno sorbent assay

(Th+ nghim mi!n d"ch gn men)

FCA : Tá ch&t Freund Complete

FIA : Tá ch&t Freund Incomplete

HA : Haemagglutin

IgG : Immuno globulin G

IU : International Unit (n v" qu)c t)

KN : Kháng nguyên

KT : Kháng th

LOD : Limit of detection (Gii hn phát hin)

LOQ : Limit of quantification (Gii hn "nh lưng)

NA : Neuraminidase

OD : Optical density (Mt ( quang)

PBS : Photphat buffer saline (Dung d"ch m ca mu)i Photphat)

SD : Standard Deviation (( lch chun)

SDS-PAGE : Sodium dodecyl sulphate – Poly acrylamide gel Electrophoresis

(in di gel Poly acrylamide có Sodium dodecyl sulphate)

Streptavidine – PO : Streptavidine – Peroxydase

RIA : Radial immuno assay (Th+ nghim mi!n d"ch phóng x)

RNA : Ribonucleic Acide (Axit Ribonucleic)

TMB : 3,3’,5,5’ – TetraMethyl Benzidine

TEMED : N,N,N’,N’- TetraMethylethylendiamin

WHO : World Health Organization (T, ch'c Y t th gii -TCYTTG)

MC LC















TRANG BÌA PH-

L.I CM ƠN

DANH M-C CH0 VI1T T2T

M-C L-C

DANH M-C CÁC BNG

DANH M-C CÁC HÌNH

L.I NÓI 3U

................................................................................................................ 1

1.1. TÌNH HÌNH BNH CÚM A/H5N1 ............................................................. 4

1.2. TÌNH HÌNH NGHIÊN CU SN XUT VACXIN CÚM A/H5N1

HIN NAY ......................................................................................................... 5

1.3. GI4I THIU VACXIN CÚM A/H5N1 SN XUT TRÊN TRNG GÀ

CÓ PHÔI ............................................................................................................ 6

1.3.1. Nguyên liu sn xu&t .............................................................................. 6

1.3.2. Chng sn xu&t ....................................................................................... 6

1.3.3. Quy trình sn xu&t và kim "nh vacxin cúm A/H5N1 trên tr'ng gà

có phôi ............................................................................................................. 7

1.3.4. Tiêu chun ch&t lưng ca vacxin cúm A/H5N1 .................................... 7

1.4. OVALBUMIN .............................................................................................. 8

1.4.1. 5c tính ................................................................................................. 8

1.4.2. C&u to .................................................................................................. 9

1.4.3. Tính sinh mi!n d"ch ............................................................................... 9

1.5. CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIN OVALBUMIN VÀ KHUY1N

CÁO V7 CÁCH PHÁT TRIN VÀ TH8M 9NH PHƯƠNG PHÁP .............. 10

1.5.1. Các phưng pháp phát hin ovalbumin ................................................ 10

1.5.1.1. Phưng pháp Ouchterlony (khuych tán mi!n d"ch kép)

................. 11

1.5.1.2. Phưng pháp in di mi!n d"ch )i lưu

............................................ 11

1.5.1.3. Phưng pháp mi!n d"ch phóng x (Radioimmunoassay- RIA)

....... 12

1.5.1.4. Phưng pháp ELISA – K: thut ch&t h&p ph; mi!n d"ch gn

enzyme (Enzyme – Linked immunosorbent Assay)

......................... 12

1.5.2. Các khuyn cáo v cách phát trin và thm "nh phưng pháp ............. 14

1.6 SN XUT KHÁNG TH VÀ CÁC PHƯƠNG PHÁP TINH CH1 .......... 15

1.6.1. Tá ch&t ................................................................................................. 15

1.6.2. Quy trình gây mi!n d"ch c bn to kháng th a dòng ........................ 16

1.6.3. Tinh ch kháng th IgG ....................................................................... 17

1.6.3.1. Kt ta IgG t huyt thanh ho5c d"ch sinh vt khác b<ng

(NH

)

............................................................................................ 18

1.6.3.2. Tinh ch IgG nh sc kí trao ,i ion

.................................................. 18

1.6.3.3. Tinh ch IgG nh c(t ái l c protein A- ho5c protein G-sepharose

......................................................................................................... 19

1.6.4. Kim tra n=ng ( và ( sch ca huyt thanh sau tinh ch ................... 20

2.1. TH.I GIAN VÀ 9A IM NGHIÊN CU ............................................. 22

2.2. V>T LIU .................................................................................................. 22

2.2.1. Sinh phm............................................................................................. 22

2.2.2. Súc vt thí nghim ................................................................................ 22

2.2.3. Hoá ch&t và dung d"ch chun ................................................................ 22

2.2.4. Thit b" ................................................................................................. 23

2.2.5. D;ng c; ................................................................................................ 24

2.3. PHƯƠNG PHÁP ........................................................................................ 24

2.3.1. Mi!n d"ch th thu huyt thanh kháng ovalbumin .................................. 24

2.3.2. Xác "nh hiu giá kháng th th kháng ovalbumin b<ng phưng pháp

khuych tán mi!n d"ch kép (Ouchterlony) ...................................................... 26

2.3.2.1. Nguyên tc

............................................................................................ 26

2.3.2.2. Tin hành

.............................................................................................. 26

2.3.3. Tinh ch kháng th kháng ovalbumin b<ng c(t HiTrap protein G HP.... 27

2.3.3.1. Tinh ch

............................................................................................... 27

2.3.3.2. Phưng pháp in di SDS-PAGE kim tra ( sch ca huyt

thanh sau tinh ch

................................................................................ 28

2.3.4. Phưng pháp in di mi!n d"ch )i lưu ................................................. 30

2.3.5. Xây d ng phưng pháp ELISA "nh lưng ovalbumin trong vacxin

cúm A/H5N1. ................................................................................................. 31

2.3.5.1. Nguyên lý

............................................................................................. 31

2.3.5.2. Các bưc tin hành

.............................................................................. 31

2.3.6. Thm "nh phưng pháp ....................................................................... 33

2.3.6.1. Xây d ng ưng chun và ( nhy ca phn 'ng

............................. 33

2.3.6.2. Xác "nh ( chính xác ca phưng pháp

........................................... 33

Đề tài "“ NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT KHÁNG THỂ THỎ KHÁNG OVALBUMIN DÙNG PHÁT HIỆN OVALBUMIN TRONG VACXIN CÚM A/H5N1”

Tham khảo luận văn - đề án 'đề tài "“ nghiên cứu sản xuất kháng thể thỏ kháng ovalbumin dùng phát hiện ovalbumin trong vacxin cúm a/h5n1”', luận văn - báo cáo phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả

Chủ đề:

Tài liệu liên quan

Tài liêu mới

Hỗ trợ

Phương thức thanh toán

Theo dõi chúng tôi