1
AcidNucleic
AcidNucleic
C
Cá
áck
ckỹ
ỹthu
thuậ
ậtphânt
tphântí
íchADN
chADN
1.
1.Kỹ
Kỹthu
thuậ
ậtlyt
tlytrí
ríchADN
chADN
2.
2.S
Sự
ực
cắ
ắtn
tnố
ốiADN
iADN
3.
3.KTđi
KTđiệ
ệndiADN
ndiADN
4.KTPCR
4.KTPCR
2
A
Acide
cideD
Deoxyribo
eoxyribo
N
Nucleic
ucleic (ADN)
(ADN)
Đư
Đư
ng
ng +base
+basenitơ
nitơ =
=
Nucleoside
Nucleoside
Nucleoside
Nucleoside +acideP=
+acideP=
Nucleotide
Nucleotide
Base
BasePurine(2v
Purine(2vò
òngnhân):
ngnhân):
Adenine
Adenine,Guanine
,Guanine
Base
BasePyrimidine(1v
Pyrimidine(1vò
òng):
ng):
Thymine,Cytosine
Thymine,Cytosine
Tóm lược về sự sao chép ADN
Saochép ADN trong TB(invivo):
Mở xoắn mạch kép
Tạo conmồi (primer)
Kết nối các Nu.tự do
Hoàn chỉnh mạch và đóng xoắn
Saochép ADN trong ống nghiệm (invitro):
Mở xoắn mạch kép :nhiệt độ
Tạo conmồi (primer):conmồi tổng hợp
Kết nối các Nu.tự do:Taq Polymerase
Đóng xoắn :nhiệt độ
Kỹ thuật PCR(công nghệ gien)
3
Kỷ
Kỷthu
thuậ
ậtlytr
tlytrí
íchADN
chADN
LytríchADN–Phươngphápnào?
Vi
Việ
ệcc
cchọ
họnl
nlự
ựaphương
aphươngphá
pháplyt
plytrí
rícht
chtù
ùythu
ythuộ
ộcv
cvà
àonhi
onhiề
ềuy
uyế
ếut
utố
ố:
:
–
–Ngu
Nguồ
ồnADN:
nADN:t
từmá
ừmáu,
u,niêmm
niêmmạ
ạc,
c,VK,T
VK,TV,
V,ĐV
ĐV
–
–Mụ
Mụcđ
cđí
íchs
chsửdụ
ửdụngc
ngcủ
ủaADNđ
aADNđượ
ượclyt
clytrí
rích:P
ch:PCR,
CR,c
cắ
ắtb
tbằ
ằng
ng
Enz.
Enz.c
cắ
ắtgi
tgiớ
ớih
ihạ
ạn,
n,Cloning...
Cloning...
–
–Loạ
LoạiADN:
iADN:DNAtrongnhân
DNAtrongnhân(genomic
(genomicDNA),ty
DNA),tyth
thể
ể,l
,lạ
ạpth
pthể
ể
–
–S
Số
ốl
lượ
ượngADNc
ngADNcầ
ầnthuđ
nthuđượ
ược,
c,s
số
ốm
mẫ
ẫuc
ucầ
ầnlyt
nlytrí
rích
ch
4
CácbướccơbảncủaquitrìnhlytríchADN
1. PhávởváchTBvàmàngnguyênsinhchấtphóngthích
cácthànhphầncủaTB.
2. ỨcchếcácEnz.phânhủyDNAvàARNm(DNases,
RNases).
3. Táchnucleicacid(ADN,ARN)rakhỏicácthànhphầnkhác
củaTB.
•PPTáchly/kếttủa
•PPhấpphụ(Adsorption)
•PPlytâmdựatrênsựkhácnhauvềtỉtrọng
4.ThunhậnADN:hòatan//kếttủa
5.BảoquảnADN:hòatantrongH
2
OhayTE
6.KiểmtrasốlượngvàchấtlượngADN
V
Vậ
ậtli
tliệ
ệu
uh
hhó
hóach
achấ
ấts
tsửdụ
ửdụng
ng
Phá
Pháv
vở
ởc
cấ
ấut
utrú
rúcTB:
cTB:
+C
+Cố
ối/ch
i/chà
ày,
y,má
máyxay
yxay
phương
phươngphá
phápv
pvậ
ậtl
tlý
ý
+N
+Nitơ
itơlỏ
lỏng
ng
+C
+Cá
ácenzymes(
cenzymes(Pectinase,Cellulas
Pectinase,Cellulase,
e,Protease)
Protease)
+N
+NaOH+n
aOH+nhi
hiệ
ệtđ
tđộ
ộ
Loạ
Loạib
ibỏcá
ỏcácm
cmả
ảnhv
nhvở
ở,c
,cá
áct
cthà
hànhph
nhphầ
ầnk
nkhá
háctrongTB:
ctrongTB:
+Dishwashingdetergent
+Dishwashingdetergent
+Phenol/Chloroform
+Phenol/Chloroform
Thunh
Thunhậ
ậnADNquak
nADNquakế
ếtt
ttủ
ủa
a
+Isopropylalcohol
+Isopropylalcohol
+Ethanol100%
+Ethanol100%
5
PhávởcấutrúcTBbằngcơhọc
Yêucầu:hThaotácnhanh
hKhôngquá‘thôbạo’
hCósựhiệndiệncủabufferlytrích(chấtứcchếDnase)

h
hTh
Thự
ựchi
chiệ
ệntrongđi
ntrongđiề
ềuki
ukiệ
ệnl
nlạ
ạnh
nh(
(Ứ
Ứcch
cchếhoạ
ếhoạtđ
tđộ
ộngc
ngcủ
ủaEnz.)
aEnz.)
NướctNy(rữabát)cótác
dụnggì?
• MỗiTBđượcbaobọcbởi
màngTB(phospholipid)
• ADN nằmtrongnhân,và
cũngđượcbaobọcbởi
màngnhân
PhảiphávởmàngTBđểphóngthíchADN