Bài giảng Thư viện DNA bộ gene - Nguyễn Vũ Phong

Chia sẻ: Sơn Tùng | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:36

Thêm vào BST

Báo xấu

118
lượt xem 18
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Bài giảng "Thư viện DNA bộ gen" cung cấp cho người học các kiến thức: DNA genomic library là gì, cDNA library, sàng lọc dòng DNA bằng lai nucleic acid, sàng lọc dòng DNA bằng thử miễn dịch,... Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Bài giảng Thư viện DNA bộ gene - Nguyễn Vũ Phong

Thư viện DNA bộ gene (DNA genomic library)
DNA genomic library là gì? • Tập hợp tất cả các đoạn DNA của bộ gene sinh vật. • Các đoạn DNA được tạo dòng trong các vector • Sử dụng nhằm phân lập một đoạn DNA hoặc xác định vị trí của đoạn DNA trên bộ gene
Thực hiện (phage hoặc cosmid) RE Siêu âm -----------
B1. Cắt bộ gene bằng RE • Sử dụng các RE có trình tự nhận biết gồm 4 nu • Cắt từng phần để thu được lượng lớn gene nguyên vẹn. • Sử dụng DNA tách từ các loại mô khác nhau • Cắt vector với cùng RE để tạo đầu cố kết • Có thể sử dụng 2 RE để tránh tự kết nối.
B2. Tạo dòng • Plasmid: hạn chế đối với đoạn DNA kích thước lớn, hiệu suất biến nạp tương đối thấp. • Phage : phổ biến nhất, mang DNA ~ 20 kb • Cosmid: mang đoạn DNA ~ 40 – 50 kb • BAC : hữu hiệu nhất – Mang đoạn DNA lớn 100 – 300 kb – Ít hình thành thể khảm – Hiệu quả trong tạo dòng và thu hồi DNA – Duy trì sự ổn định của DNA gắn trong vector • YAC : nhận đoạn DNA lớn, khó thao tác.
B3. Chuyển nạp vào tế bào chủ • Hóa biến nạp • Điện biến nạp • Đóng gói DNA tái tổ hợp (phage  hoặc cosmid) và cho xâm nhiễm tế bào vi khuẩn
cDNA library Tại sao cần xây dựng thư viện cDNA ?
Tách chiết, tinh sạch và phân tích RNA 1) Tách chiết RNA tổng số - Nguyên lý: tách rời RNA ra khỏi hỗn hợp DNA , protein,… - Kiểm soát ribonuclease (RNase) = chất ức chế 2) Tách chiết mRNA - Đuôi poly A - Tách bằng sắc ký ái lực oligo dT - Thu nhận bằng ly tâm
Tổng hợp cDNA theo pp RNaseH
Tổng hợp cDNA self priming
Tổng hợp cDNA đuôi trùng hợp
Tạo dòng cDNA = hệ thống dG:dC
Tạo dòng cDNA bằng 1 linker