Bài thuyết trình: Các phương pháp phân tích vi sinh vật

Chia sẻ: Hoang Linh | Ngày: | Loại File: PPT | Số trang:54

Thêm vào BST

Báo xấu

127
lượt xem 17
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Bài thuyết trình: Các phương pháp phân tích vi sinh vật trình bày phương pháp nuôi cấy, phương pháp trên cơ sở kỹ thuật sinh học phân tử, phương pháp trên cơ sở miễn dịch học. Mời các bạn cùng tham khảo tài liệu để nắm vững nội dung chi tiết. Hi vọng tài liệu sẽ giúp ích cho các bạn trong quá trình học học phần này.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Bài thuyết trình: Các phương pháp phân tích vi sinh vật

CAÙC PHÖÔNG PHAÙP PHAÂN TÍCH VI SINH VAÄT 1. Phöông phaùp nuoâi caáy 2. Phöông phaùp treân cô sôû kyõ thuaät sinh hoïc phaân töû 3. Phöông phaùp treân cô sôû mieãn dòch hoïc
PHAÂN TÍCH VSV BAÈNG PHÖÔNG PHAÙP NUOÂI CAÁY • Phöông phaùp ñoå ñóa (pour plate) • Phöông phaùp caáy beà maët (spread) • Phöông phaùp MPN (most probable number) • Phöông phaùp nuoâi caáy kî khí
PHÖÔNG PHAÙP ÑOÅ ÑÓA • Muïc ñích söû duïng trong ñònh löôïng VSV • Kyõ thuaät – Moâi tröôøng agar ñöôïc ñun chaûy vaø laøm nguoäi ñeán 45±1oC – Caáy tối ña 1ml dòch maãu hay dòch pha loaõng vaøo ñóa petri troáng voâ truøng (Þ 9 – 10cm) – Ñoå 10-15ml moâi tröôøng vaøo ñóa – Laéc ngöôïc vaø xuoâi chieàu kim ñoàng hoà – Ñaët ñóa leân maët phaúng ngang cho moâi tröôøng ñoâng ñaëc
PHÖÔNG PHAÙP ÑOÅ ÑÓA • Öu ñieåm – Caáy ñöôïc theå tích maãu lôùn (1ml) – Xaùc ñònh ñöôïc caùc VSV caàn dinh döôõng tieáp xaùc töø nhieàu phía – Cho pheùp ñeám ñöôïc maät ñoä VSV cao, khoaûng 150 - 300 khuaån laïc Nhöôïc ñieåm - Khoâng ñònh löôïng ñöôïc nhöõng VSV quaù nhaïy nhieät - Khoâng xaùc ñònh ñöôïc hình daïng khuaån
PHÖÔNG PHAÙP CAÁY BEÀ MAËT • Moâi tröôøng phaûi ñöôïc chuaån bò treân ñóa tröôùc 12 ngaøy ñeå khoâ maët • Phöông phaùp – Caáy 0,1 – 0,3ml vaøo ñóa moâi tröôøng (ñóa Þ 90mm) Caáy toái ña 1ml vaøo ñóa moâi tröôøng (ñóa Þ 140mm) – Traûi ñeàu maãu leân beà maët moâi tröôøng baèng que trang tam giaùc – Ñeå ôû nhieät ñoä phoøng 15-20 phuùt
PHÖÔNG PHAÙP CAÁY BEÀ MAËT • Öu ñieåm – Ñònh löôïng ñöôïc caùc VSV nhaïy nhieät – Coù theå nhaän daïng ñöïôc daïng khuaån laïc ñaëc tröng – Deã daøng laøm thuaàn chuûng VSV muïc tieâu Nhöôïc ñieåm - Chæ caáy ñöïôc theå tích maãu nhoû (neáu duøng ñóa thoâng thöôøng Þ90-
PHÖÔNG PHAÙP MPN (MOST PROBABLE NUMBER) • Khaùi nieäm – Coøn goïi laø phöông phaùp pha loaõng tôùi haïn – Giaù trò keát quaû nhaän ñöôïc laø soá löôïng VSV muïc tieâu coù xaùc suaát cao nhaát theo nguyeân taéc thoáng keâ – Giaù trò MPN laø giaù trò coù xaùc xuaát cao nhaát • Heä thoáng MPN – Goàm 3 hoaëc 5 laàn laëp laïi ôû moãi noàng ñoä – Laëp laïi ôû 3 noàng ñoä pha loaõng lieân tieáp – Choïn caùc ñoä pha loaõng sao cho trong heä
PHÖÔNG PHAÙP MPN Chia theo soá löôïng oáng trong heä thoáng - Heä thoáng 9 oáng: moãi ñoä pha loaõng laëp laïi 3 laàn - Heä thoáng 15 oáng: moãi ñoä pha loaõng laëp laïi 5 laàn Nguyeân taéc - Döïa treân keát quaû ñònh tính VSV muïc tieâu ôû caùc laàn laëp laïi treân cuøng moät ñoä pha loaõng vaø ôû caùc ñoä pha loaõng khaùc nhau - Vi sinh vaät muïc tieâu phaûi coù nhöõng bieåu hieän ñaëc tröng treân moâi tröôøng nuoâi caáy loûng nhö Söï taïo hôi: Coliforms, E. coli …
HEÄ THOÁNG MPN • Heä thoáng 9 oáng Heä thoáng 15 oáng 10ml moâi tröôøng noàng ñoä thöôøng (ñôn)
HEÄ THOÁNG MPN 10ml moâi tröôøng noàng ñoä ñoâi 10ml moâi tröôøng noàng ñoä ñôn (thöôøng)
ÑÒNH LÖÔÏNG F. COLIFORM BAÈNG PP MPN 1ml 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 101 1ml 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 102 10ml LSB 1ml 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 103
ÑÒNH LÖÔÏNG F. COLIFORM BAÈNG PP MPN(tt) 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.1 1.2 1.5 2.2 2.3 Endo/EMB 10ml EC 2.2 3.3 1.1 1.2 2,0,0 4,5 Indol MPN/g Keát quaû 2,0,0  = 4,5
Coâng thöùc tính chæ soá MPN gj MPN / g t jmj (t j gj) mj • Trong ñoù: – ∑ gj : soá löôïng oáng döông tính trong daõy daõ choïn – ∑ tjmj :Khoái löôïng maãu trong daõy ñaõ choïn – ∑ (tj-gj)mj Khoái löôïng maãu trong taát caû caùc maãu aâm tính.
GIỚI HẠN TIN CẬY Trong ñoù: ∑ gj : soá löôïng oáng döông tính trong daõy daõ choïn ∑ tjmj :Khoái löôïng maãu trong daõy ñaõ choïn ∑ (tj-gj)mj Khoái löôïng maãu trong taát caû caùc maãu aâm tính.
CHÆ SOÁ MPN CÔ BAÛN • Laø chæ soá tra ñöôïc töø baûng keát quaû MPN c o ù s o á lö ô ïn g m a ã u t r o n g t ừn g d a õ y la ë p la ïi n h ö s a u : • D a õ y 1 : 1 g h o a ë c 1 m l m a ã u • D a õ y 2 : 0 , 1 g h o a ë c 0 , 1 m l • D a õ y 3 0 , 0 1 g h o a ë c 0 , 0 1 m l
COÂNG THÖÙC CHUYEÅN ÑOÅI KEÁT QUAÛ MPN • Cs = M x F/V0 x Vs Cs: là khả năng lớn nhất của vi sinh vật có trong thể tích Vs M : chỉ số MPN tra từ bảng đối với độ pha loãng cơ bản V0 F : nghịch đảo hệ số pha loãng tương ứng với độ pha loãng thấp nhất của dãy Vs: Thể tích chuẩn được chọn để biểu thị mật độ vi sinh vật • Nếu tính kết quả là MPN/g thì Vs = 1 • Nếu tính kết quả là MPN/100g thì Vs = 100
PHÖÔNG PHAÙP MAØNG LOÏC • Kích thöôùc loå loïc 0,47µm hay 0,22µm • Ñöôøng kính vaø hình daïng maøng loïc phuï thöïc vaøo ñöôøng kính pheåu loïc • Ñöôøng kính maøng thöôøng laø 45mm
THIEÁT BÒ LOÏC NHIEÀU PHEÅU (MULTIFOLDER)
CAÙC BOÄ PHAÄN CUÛA THIEÁT BÒ LOÏC VSV
PHÖÔNG PHAÙP LOÏC VSV • Pheåu loïc, giaù ñôû maøng loïc phaûi ñöôïc voâ truøng sau moãi laàn loïc • Maät ñoä VSV trong dòch loïc thích hôïp: