247
88. ĐỊNH LƢỢNG INTERLEUKIN- I (IL-I)
I. NGUYÊN LÝ
Xét nghiệm miễn dịch IL-I dựa trên nguyên lý “sandwich” hóa phát - quang
miễn dịch nhằm mục đích tìm nồng độ IL-I trong huyết thanh và huyết tương người
II. CHUẨN BỊ
1. Ngƣời thực hiện: Người thực hiện xét nghiệm có trình độ phù hợp.
2. Phƣơng tiện, hóa chất:
Bộ kít bao gồm
- CTK DIL ASY 1 x 14ml
- CTK CONJ 1 x 20 ml
- CTK BIOCHIP 54 biochips
- CTK CAL 9 x 1ml
- REAG SGNL-EV701 2 x 10 ml
- BUF WASH (conc.) 1 x 32 ml
- Calibrator concentration Disc và Barcode 1
3. Ngƣời bệnh: Cần được tư vấn về mục đích của việc làm xét nghiệm.
4. Phiếu xét nghiệm: Có y lệnh của bác sỹ lâm sàng ghi trên phiếu xét nghiệm.
III. CÁC BƢƠC TIẾN HÀNH
1. Bệnh phẩm
- Mẫu bệnh phẩm là huyết thanh hoặc huyết tương không tiêu huyết
- Việc lấy mẫu được thực hiện theo đúng hướng dẫn và đúng ống đựng mẫu, không
rò rỉ hoặc thấm ra ngoài
- Những mẫu cần pha loãng phải được pha với dung dịch đệm rửa
- Nếu mẫu không được xét nghiệm ngay, cần phải bảo quản ở -200C từng phần nhỏ,
tránh rã đông nhiều lần
2. Tiến hành kỹ thuật
- Độ nhạy của máy là 1.6 pg/ml. với độ nhạy này thì nồng độ thấp nhất cho phép là
≤ 20% cho 20 lần lặp lại.
- Khoảng phát hiện của phép thử: 0-250 pg/ml. Tuy nhiên có thể thay đổi tùy vào lô
chất hiệu chuẩn
- Ngoại kiểm tra: Lặp lại 20 lần cho một mẫu bệnh phẩm ở 3 mức nồng độ khác
nhau (n=20)
Nồng độ (pg/ml)
Level 1
Level 2
Level 3
Mean conc
10.6
139
406
% CV
8.2
6.3
6.7
248
- Nội kiểm tra chất lượng: Lặp lại 2 lần cho một mẫu bệnh phẩm ở 3 mức nồng độ
khác nhau cho 10 xét nghiệm khác nhau (n=20)
Nồng độ (pg/ml)
Level 1
Level 2
Level 3
Mean conc
3.9
50.3
142
% CV
13.1
7.3
7
- Các bước thực hiện:
+ Hút 200 ul dung dịch pha loãng vào mỗi giếng
+ Hút 100 ul dung dịch chuẩn, mẫu và chứng vào các giếng thích hợp
+ Hòa trộn dung dịch bằng cách gõ nhẹ vào các cạnh của đĩa
+ Đặt đĩa vào đế ủ lắc nhiệt. Ủ ở 370C trong vòng 1 giờ và lắc 370 vòng/phút
+ Lấy khay chứa khỏi máy lắc. Loại bỏ dịch thừa
+ Rửa nhanh 2 lần với dung dịch đệm rửa khoảng 350 ul cho mỗi giếng, tránh nhiễm
chéo giữa các giếng và dùng giấy thấm để thấm khô sau khi rửa
+ Hút 300 ul dung dịch conjugate vào mỗi giếng
+ Gõ nhẹ vào các cạnh của khay chứa để hòa trộn dung dịch
+ Đặt khay vào máy lắc nhiệt, Ủ trong vòng 1 giờ ở 370C với tốc độ lắc 370 vòng/
phút
+ Sau đó, lấy khay ra khỏi máy lắc và loại bỏ dịch thừa
+ Lập lại rửa 2 lần như trên
+ Sau khi rửa, làm đầy giếng với dung dịch đệm rửa và để cho thấm không quá 30
phút trước khi chụp hình
IV. NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
IL-1β được chứng minh ngăn cản việc tiết insulin và giảm hàm lượng insulin và
glucagons do đó đóng vai trò quan trọng trong phát triển bệnh tiểu đường type I
V. NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ
- Đây là phương pháp dùng trong nghiên cứu, không dùng trong chẩn đoán
- Phương pháp điều tra dấu chứng Interleukin IA chỉ sử dụng trong phân tích mẫu
huyết thanh và huyết tương người. Do đó những phân tích trên chất khác sẽ cho
kết quả không chính xác (ví dụ như lỗi kỹ thuật hay lỗi phương pháp)
- Ảnh hưởng của Bilirubin, Hemoglobin, Triglycerides và Lipids gây nhiễu nồng
độ IL-Iα và là nguyên nhân tăng hay giảm đường biểu diễn nồng độ trên biểu đồ.