BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP. HỒ CHÍ MINH
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP
TẠO DÒNG PLASMID TÁI TỔ HỢP CHỨA GEN
MÃ HÓA ENZYME ENDOGLUCANASE D (CelD) TỪ
VI KHUẨN Clostridium thermocellum TRÊN HỆ THỐNG
NẤM MEN Pichia pastoris
Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC
Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC
Giảng viên hướng dẫn : Thạc sĩ Nguyễn Xuân Đồng
Sinh viên thực hiện : Phan Vũ Hải Yến
MSSV: 1051110247 Lớp: 10DSH02
TP. Hồ Chí Minh, 2014
LỜI CAM ĐOAN
Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của tôi. Các nội dung nghiên
cứu và kết quả trong đề tài này là trung thực và chưa từng được ai công bố trong bất
kì công trình nào trước đây. Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm trước nhà trường về
lời cam đoan này.
Tp. Hồ Chí Minh, ngày 19 tháng 7 năm 2014
Sinh viên thực hiện
Phan Vũ Hải Yến
LỜI CẢM ƠN
Lời đầu tiên tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Quý thầy cô khoa Công
nghệ Sinh học – Thực phẩm – Môi trường, trường Đại Học Công nghệ Thành phố
Hồ Chí Minh đã giảng dạy kiến thức và truyền đạt những kinh nghiệm quý báu cho
tôi trong suốt 4 năm đại học.
Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến T.S Nguyễn Thị Hai người cô
kính mến đã hết lng gip đ, dạy bảo, động viên và tạo mọi điều kiện thun lợi cho
tôi trong suốt quá trình học tp và hoàn thành lun văn tốt nghiệp.
Tôi xin được gửi lời cảm ơn chân thành và sâu sắc nhất tới Th.S Nguyễn
Xuân Đồng và K.S Lê Thị Huỳnh Trâm đã tạo mọi điều kiện, gip đ tôi về kiến
thức chuyên môn và tn tình hướng dẫn tôi trong suốt thời gian làm đề tài tốt
nghiệp.
Tôi xin chân thành cảm ơn các anh chị phòng Công nghệ Vi sinh - Trung tâm
Công nghệ Sinh học Thành phố Hồ Chí Minh đã nhiệt tình gip đ, tạo điều kiện và
hỗ trợ tôi về kinh phí cũng như thiết bị để tôi có thể thực hiện đề tài.
Tôi cũng cảm ơn các bạn trong nhóm ESS đã luôn cổ vũ và động viên tôi
những lc khó khăn để có thể vượt qua và hoàn thành tốt lun văn này.
Và cuối cùng, hơn ai hết, từ đáy lng con cảm ơn ba mẹ đã sinh ra con, nuôi
dạy con khôn lớn, luôn bên con và là nguồn động viên to lớn của con, tạo mọi điều
kiện tốt nhất cả về tinh thần và vt chất trong suốt quá trình học tp, nghiên cứu và
hoàn thành lun văn này.
Với tấm lòng biết ơn sâu sắc, tôi xin chân thành cảm ơn.
Tp. Hồ Chí Minh, ngày 19 tháng 7 năm 2014
Phan Vũ Hải Yến
Đồ án tốt nghiệp
i
MỤC LỤC
DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT ................................................................................ vi
DANH SÁCH CÁC HÌNH .............................................................................................. vii
DANH SÁCH CÁC BẢNG .............................................................................................. ix
CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU ...................................................................................................... 1
1.1. Đặt vấn đề: ...................................................................................................... 1
1.2. Mục đích nghiên cứu đề tài ............................................................................ 2
1.3. Nội dung nghiên cứuc ..................................................................................... 2
CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN.............................................................................................. 3
2.1. Cấu tạo lignocellulose .................................................................................... 3
2.1.1. Cellulose ......................................................................................................... 4
2.1.2. Hemicellulose ................................................................................................ 6
2.1.3. Lignin .............................................................................................................. 7
2.2. Enzyme cellulase ............................................................................................ 8
2.2.1. Phân loại enzyme .............................................................................................. 8
2.2.2. Cơ chế tác dụng của cellulase ...................................................................... 9
2.2.3. Vi sinh vt sản xuất cellulase ..................................................................... 10
2.3. Phức hợp cellulosome trong vi khuẩn Clostridium thermocellum .............. 11
2.3.1. Tổng quan về vi khuẩn Clostridium thermocellum ..................................... 11
2.3.2. Đặc điểm của phức hệ cellulosome ........................................................... 12
2.4. Hệ thống biểu hiện Pichia pastoris .............................................................. 14
2.4.1. Đặc điểm hệ thống biểu hiện trên Pichia pastoris ...................................... 14
2.4.2. Tích hợp gen ngoại lai vào P. pastoris ......................................................... 14
2.4.3. Ưu điểm của hệ thống biểu hiện trên Pichia pastoris ............................. 15
Đồ án tốt nghiệp
ii
2.5. Các nghiên cứu trong và ngoài nước về tạo dòng các gen từ Clostridium
thermocellum ........................................................................................................... 16
CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .............................. 19
3.1. Địa điểm và thời gian nghiên cứu: .................................................................. 19
3.1.1. Địa điểm nghiên cứu: ...................................................................................... 19
3.1.2. Thời gian nghiên cứu: ..................................................................................... 19
3.2. Nguyên liệu ...................................................................................................... 19
3.2.1. Chủng vi sinh vt ............................................................................................. 19
3.2.2. Thiết bị và dụng cụ .......................................................................................... 19
3.2.3. Hóa chất ............................................................................................................ 20
3.2.4. Môi trường ....................................................................................................... 22
3.2.4.1. Môi trường LB (Luria-Bertani): ......................................................... 22
3.2.4.2. Môi trường MD (Minimal Dextrose): ................................................ 22
3.2.4.3. Môi trường YPD (Yeast Extract Peptone Dextrose) .......................... 22
3.2.4.4. Môi trường BMGY (Buffered Glycerol-complex): ........................... 22
3.2.4.5. Môi trường BMMY (Buffered Methanol-complex) bổ sung CMC ... 23
3.2.5. Plasmid ............................................................................................................. 23
3.2.5.1. Plasmid pJET1.2/blunt ........................................................................ 23
3.2.5.2. Plasmid pPIC9K .................................................................................. 24
3.2.6. Các cặp mồi sử dụng ....................................................................................... 25
3.3. Phương pháp nghiên cứu: ................................................................................ 26
3.3.1. Tạo dòng tế bào E. coli DH5α chứa plasmid mang gen CelD của
Clostridium thermocellum......................................................................................... 26
3.3.1.1. Thiết kế mồi .................................................................................... 26