ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI
TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN
---------------------
PHẠM THỊ THỦY
NGHIÊN CỨU PHƢƠNG PHÁP ĐỘNG HỌC HUỲNH QUANG
XÁC ĐỊNH TYROSIN DỰA TRÊN PHẢN ỨNG VỚI PHỨC
RUTENI(II) POLYPIRIDIN
LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC
Hà Nội - 2016
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI
TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN
---------------------
PHẠM THỊ THỦY
NGHIÊN CỨU PHƢƠNG PHÁP ĐỘNG HỌC HUỲNH QUANG
XÁC ĐỊNH TYROSIN DỰA TRÊN PHẢN ỨNG VỚI PHỨC
RUTENI(II) POLYPIRIDIN
Chuyên ngành: HÓA PHÂN TÍCH
Mã số: 60440118
LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC
NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC:
TS. NGUYỄN THỊ ÁNH HƢỜNG
TS. NGUYỄN XUÂN TRƢỜNG
Hà Nội - 2016
LỜI CẢM ƠN
Trong thời gian làm luận văn tốt nghiệp tại Bộ môn Hóa phân tích, Viện kỹ thuật hóa
học, trƣờng Đại học Bách khoa Hà Nội tôi đã học hỏi đƣợc nhiều kiến thức bổ ích. Với lòng
kính trọng và biết ơn sâu sắc tôi xin trân trọng cám ơn TS. Nguyễn Thị Ánh Hƣờng, TS.
Nguyễn Xuân Trƣờng đã tận tình hƣớng dẫn tôi hoàn thành bản luận văn này.
Tôi xin chân thành cảm ơn ban lãnh đạo, Thầy cô trong Bộ môn Hóa phân tích, trƣờng
Đại học Bách khoa Hà Nội đã quan tâm, giúp đỡ tôi trong suốt quá trình nghiên cứu.
Tôi xin chân thành cảm ơn các Thầy cô trong Bộ môn Hoá Phân tích, Khoa Hóa học,
Trƣờng Đại học Khoa học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội đã tạo điều kiện và giúp đỡ
tôi trong quá trình làm luận văn.
Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè đã luôn bên cạnh và động viên để
tôi có thể hoàn thành tốt luận văn này.
Hà nội, tháng 12 năm 2016
Học viên
Phạm Thị Thủy
MỤC LỤC
LỜI CẢM ƠN
DANH MỤC BẢNG
DANH MỤC HÌNH
DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT
ĐẶT VẤN ĐỀ .......................................................................................................................... 1
CHƢƠNG I: TỔNG QUAN .................................................................................................... 2
1.1 Tổng quan về Tyrosin ................................................................................................... 2
1.2. Phƣơng pháp phân tích Tyrosin ..................................................................................... 7
1.2.1. Phương pháp so màu .............................................................................................. 7
1.2.2. Phương pháp quang phổ đo quang ......................................................................... 8
1.2.3. Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC ..................................................... 8
1.2.4. Phương pháp phổ huỳnh quang ............................................................................ 10
1.3. Tổng quan về phƣơng pháp phổ huỳnh quang phân tử ............................................... 10
1.3.1. Hiện tượng huỳnh quang ....................................................................................... 10
1.3.2. Sự tạo thành phổ huỳnh quang - cơ chế của sự phát quang ................................ 10
1.3.3. Cường độ huỳnh quang ......................................................................................... 11
1.3.4. Phổ huỳnh quang .................................................................................................. 12
1.3.5. Các yếu tố ảnh hưởng đến sự tạo thành huỳnh quang .......................................... 13
1.3.5.1. Ảnh hưởng của cấu trúc phân tử đến hiệu suất huỳnh quang............................ 13
1.3.5.2. Các yếu tố môi trường ảnh hưởng đến phổ huỳnh quang .................................. 14
1.3.6. Máy quang phổ huỳnh quang ................................................................................ 15
1.3.7. Thiết bị đo quang phổ huỳnh quang theo thời gian .............................................. 17
1.3.8. Ứng dụng của quang phổ huỳnh quang ................................................................ 18
1.3.9. Động học các quá trình phát quang ...................................................................... 19
1.3.9.1. Xác định thời gian sống của trạng thái kích thích ............................................. 19
1.3.9.2. Xác định hằng số tốc độ của các quá trình giải hoạt ........................................ 20
1.4. Tổng quan về phức chất Ruteni(II) polypiridin ........................................................... 22
CHƢƠNG II: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ..................................... 24
2.1. Đối tƣợng, mục tiêu và nội dung nghiên cứu ............................................................. 24
2.1.1. Mục tiêu nghiên cứu .............................................................................................. 24
2.1.2. Nội dung nghiên cứu ............................................................................................. 24
2.1.2.1. Nghiên cứu đặc trưng quang phổ của phức chất Ruteni(II) polypiridin ........... 24
2.1.2.2 Ảnh hưởng của pH tới động học phản ứng quang oxi hóa khử giữa phức
[Ru(bpy)3]Cl2 và phức Tyrosin. ............................................. 24
2.1.2.3. Ảnh hưởng của ion lạ tới động học phản ứng quang oxi hóa khử giữa phức
[Ru(bpy)3]Cl2 và Tyrosin. ..................................................... 25
2.1.2.4. Khảo sát ảnh hưởng của lực ion tới động học phản ứng của phức chất
Ruteni(II) polypiridin và amino axit Tyrosin. ................................................................. 25
2.1.2.5. Xây dựng quy trình định lượng amino axit Tyrosin dựa trên phản ứng với phức
chất Ruteni(II) polypiridin .............................................................................................. 27
2.1.3. Đối tượng nghiên cứu ........................................................................................... 27
2.2. Hóa chất, dụng cụ và thiết bị ....................................................................................... 28
2.2.1. Hóa chất. ............................................................................................................... 28
2.2.2. Dụng cụ và thiết bị ................................................................................................ 28
2.4. Thẩm định phƣơng pháp .............................................................................................. 28
2.5. Nghiên cứu quy trình xử lý mẫu protein phân tích Tyrosine ....................................... 30
2.6. Sử dụng phƣơng pháp HPLC làm phƣơng pháp đối chiếu .......................................... 32
CHƢƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ....................................................................... 34
3.1. Phổ hấp thụ phân tử UV-Vis ....................................................................................... 34
3.2. Phổ phát xạ phân tử trạng thái dừng ............................................................................ 36
3.3. Phổ phát xạ phân tử phân giải thời gian (time-domain) .............................................. 37
3.4. Ảnh hƣởng của pH tới động học phản ứng quang oxi hóa khử giữa phức
[Ru(bpy)3]Cl2 và phức Tyrosin .......................................... 38
3.5. Ảnh hƣởng của ion lạ tới động học phản ứng quang oxi hóa khử giữa phức
[Ru(bpy)3]Cl2 , phức Tyrosin .............................................. 40
3.6. Ảnh hƣởng của lực ion tới động học phản ứng quang oxi hóa khử giữa phức
[Ru(bpy)3]Cl2 , và Tyrosin ........................................................ 42
3.7. Thẩm định phƣơng pháp định lƣợng Tyrosin dựa trên phản ứng quang oxi hóa khử
với phức [Ru(bpy)3]Cl2 và phức ............................................... 44
3.7.1. Độ lặp lại của phương pháp ................................................................................. 46
3.7.2. Giới hạn phát hiện LOD và giới hạn định lượng LOQ ......................................... 48
3.7.3. Khoảng tuyến tính ................................................................................................. 49
3.7.4. Độ đúng của phương pháp .................................................................................... 51
3.8. Phân tích Tyrosin trong mẫu protein ........................................................................... 53
3.8.1. Kết quả khảo sát quy trình xử lý mẫu protein phân tích Tyrosin .......................... 53