zunia.vn

Tuyển sinh 2024 dành cho Gen-Z

zunia.vn

» Y Tế - Sức Khoẻ

» Y khoa - Dược

Xét nghiệm FISH

Chia sẻ: Nhậm Ngạn Đông | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:3

Báo xấu

1
lượt xem 0
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Tài liệu "Xét nghiệm FISH" nhằm cung cấp cho học viên những nội dung về đại cương, chỉ định, hóa chất và trang thiết bị, các bước tiến hành, chuẩn bị mẫu, khử paraffin của tiêu bản, xử trí protease, khử nước, tách DNA và lai đồng thời, nhuộm màu tương phản nhân, khảo sát tiêu bản, đánh giá kết quả. Mời các bạn cùng tham khảo!

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Xét nghiệm FISH

XÉT NGHIỆM FISH I. ĐẠI CƢƠNG Xét nghiệm FISH gọi là lai tại chỗ gắn huỳnh quang là xét nghiệm để xác định khuyếch đại gen Her-2/neu. II. CHỈ ĐỊNH Theo chỉ định của Bác sĩ lâm sàng: chủ yếu các định tình trạng khuyếch đại gen trong ung thư vú, ung thư dạ dày và một số loại để điều trị đích. III. H A CHẤT VÀ TRANG THIẾT BỊ - Bộ kít PathVysion - Máy ThermoBrite - Kính hiển vi huỳnh quang IV. CÁC BƢỚC TIẾN HÀNH 1. Chuẩn bị mẫu - Mẫu mô được cắt mỏng 4 micromet, gắn lên tiêu bản đã được tráng silan - Tiêu bản được ủ qua đêm ở nhiệt độ 560C - Đánh dấu vùng tế bào u xâm lấn băng bút kim cương. 2. Khử paraffin của tiêu bản - Nhúng tiêu bản vào xylen 3 lần, mỗi lần 5 phút - Khử nước bằng cồn 900, 2 lần, mỗi lần 5 phút - Làm khô tiêu bản ở 450C: 2-5 phút - Rửa nước cất 1 lần: 3 phút - Rửa tiêu bản bằng dung dịch buffer 1 lần: 3 phút - Nhúng tiêu bản trong dung dịch rửa buffer nhiệt độ 800C: 30 phút - Rửa nước cất 1 lần: 1 phút - Tửa tiêu bản bằng dung dịch rửa buffer nhiệt độ phòng 2 lần, mỗi lần 5 phút. 3. Xử trí protease - Tiêu bản được lau khô các vùng nước đọng - Ngâm lam trong dung dịch protease: 10-60 phút nhiệt độ 370C Rửa - lam bằng dung dịch rửa buffer 2 lần mỗi lần 5 phút. 634
- Làm khô tiêu bản ở 450C: 2-5 phút 4. Khử nƣớc - Cồn 700: 1 phút nhiệt độ phòng - Cồn 850: 1 phút nhiệt độ phòng - Cồn 1000: 1 phút nhiệt độ phòng - Làm khô tiêu bản 450C: 2-5 phút 5. Tách DNA và lai đồng thời - Dùng máy ThermoBite, thực hiện công đoạn trong buồng tối - Làm ấm lọ chứa đoạn đầu dò bằng máy lắc - Lấy 5 àl đoạn dò nhỏ lên vùng ung thư xâm nhập đã được đánh dấu - Gắn lamen kích thước 22 mm x 22 mm, phủ mép lamen bằng nhựa cao su - Kích hoạt chương trình - Tách DNA 750C: 5 phút - Lai đoạn dò DNA đích 370C: 18 giờ đảm bảo buồng lai tối - Tạo môi trường ấm, đạy nắp và bắt đầu - Rửa sau khi lai (thực hiện công việc trong buồng tối) - Làm nóng dung dịch rửa sau lai ở 720C - Chuẩn bị một lọ dung dịch rửa sau lai ở nhiệt độ phòng - Nhúng tiêu bản vào lọ dung dịch sau lai ở nhiệt độ phòng, lắc nhẹ để lamen rời ra - Lau những giọt nước đọng trên tiêu bản - Nhúng tiêu bản vào dung dịch sau lai ở nhiệt độ 720C: 2 phút - Lau khô tiêu bản trong buồng tối. 6. Nhuộm màu tƣơng phản nhân - Nhỏ 5 àl DAPI vào vùng đã chọn - Dán lamen 7. Khảo sát tiêu bản - Bảo quản tiêu bản vào hộp giấy bạc, giữ ở -200C, ít nhất 30 phút trước khi khảo sát; - Khảo sát tiêu bản dưới kính hiển vi huỳnh quang có nhiều kính lọc các bước huỳnh quang. 635
8. Đánh giá kết quả Đánh giá kết quả dựa vào tín hiệu màu vàng và tín hiệu màu xanh. Đếm 20 nhân tế bào vùng xâm nhập, không chống lên nhau - T lệ Her-2/CEP17 < 1,8: không khuyếch đại - T lệ Her-2/CEP17 ≥ 2,2: có khuyếch đại - T lệ 1,8 ≤ Her-2/CEP17 < 2,2: khuyếch đại giáp biên cần khảo sát lại - T lệ 2,5 < Her-2/CEP17 ≤ 5: khuyếch đại thấp - T lệ Her-2/CEP17 > 5: khuyếch đại cao Số lượng tín hiệu màu xanh lá cây sẽ xác định số lượng nhiễm sắc thể 17 tùy theo số lượng là 1, 2 và 3 hoặc nhiều hơn tương ứng nhiễm sắc thể 17 đơn bội, lưỡng bội và đa bội. 636

CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD

THÔNG TIN

TRỢ GIÚP

HỖ TRỢ KHÁCH HÀNG

Theo dõi chúng tôi

Chịu trách nhiệm nội dung:

Nguyễn Công Hà - Giám đốc Công ty TNHH TÀI LIỆU TRỰC TUYẾN VI NA

LIÊN HỆ

Địa chỉ: P402, 54A Nơ Trang Long, Phường 14, Q.Bình Thạnh, TP.HCM

Hotline: 093 303 0098

Email: support@tailieu.vn

Giấy phép Mạng Xã Hội số: 670/GP-BTTTT cấp ngày 30/11/2015 Copyright © 2022-2032 TaiLieu.VN. All rights reserved.